重组牛γ-干扰素对牛外周血淋巴细胞分裂抑制作用

观察重组牛γ-干扰素对牛外周血淋巴细胞的作用。无菌采取牛外周血，分离培养淋巴细胞，取第一代细胞，分为试验组和对照组。试验组加入不同浓度的重组牛γ-干扰素，作用5d，观察细胞数量及细胞凋亡效应。结果为试验组淋巴细胞数目下降，细胞凋亡效应减弱。试验结果表明，重组牛γ-干扰素对牛外周血淋巴细胞具有抑制分裂及抗凋亡的作用。     

红曲霉与中药合生素对延边黄牛免疫功能的影响

试验研究了红曲霉与中药合生素对延边黄牛血液免疫相关指标的影响。选择3头成年的延边黄牛母牛为试验动物(325±25)kg,采用3×3完全拉丁方设计试验。分为对照组、红曲霉组、中药+红曲霉组。共分三期,每期12d,第12天于颈静脉采集血液,分别测定白细胞、红细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)的水平。结果表明,饲喂红曲霉与中药合生素对白细胞、红细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞无显著影响(P0.05),但显著提高了IgG、IgA、淋巴细胞、单核细胞含量和淋巴细胞百分比(P0.05),从而增强了机体的免疫功能。     

鸡γ-干扰素基因的分子克隆与序列测定

应用逆转录 -聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术 ,从 Con A诱导培养 2 4 h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约 50 0 bp的基因 ,将其平端连接到 p UC1 9质粒上 ,进行质粒 PCR和 Eco RI、Hind 双酶切鉴定后 ,筛选阳性重组克隆。序列分析表明 ,该基因阅读开放框架由 4 92个核苷酸组成 ,与马和人γ-干扰素基因序列的同源性分别为 3 5%和 3 2 %,与鸡 型干扰素基因的同源性仅为 1 5%,与国外报道的鸡 γ-干扰素基因序列完全一致。表明鸡脾淋巴细胞受到有丝分裂原刺激后 ,其 γ-干扰素基因 m RNA发生了表达 ,试验成功地克隆得到了鸡 γ-干扰素基因     

抗牛γ-干扰素特异性单克隆抗体的制备

为了制备抗牛γ-干扰素(IFN-γ)的单克隆抗体(McAb),并对其部分生物学特性进行初步研究,试验用重组牛IFN-γ蛋白免疫小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术和间接ELISA方法进行试验.结果表明:共获得5株抗IFN-γ的单克隆抗体,Ig亚类鉴定均为IgGI,轻链为k链;经Weatern-blot试验证实5株McAb均能与IFN-γ发生特异性反应,而与其他蛋白不发生反应,特异性好;以5株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株制备腹水,效价均达到1:50 000以上.     

红曲霉与中药合生素对延边黄牛瘤胃内环境的影响

本实验研究红曲霉与中药合生素对延边黄牛瘤胃内环境的影响。选择3只安有永久性瘤胃瘘管的成年延边黄牛母牛为试验动物(315±30kg),采用3×3完全拉丁方设计试验。分别测定瘤胃液PH值、纤毛虫数、NH3-N浓度、和微生物蛋白质(BCP)浓度。试验结果表明:采食后各组pH值无显著影响(p0.05)。瘤胃内NH3-N浓度均处于合成瘤胃微生物的最佳浓度范围内,红曲霉+中药组与对照组、红曲霉组相比差异显著(P0.05)。6h纤毛虫数量对照组显著高于红曲酶组和红曲酶+中药组(p0.05)。其他时间差异不显著。红曲霉加中药组BCP含量显著高于其他两组(p0.05)。说明红曲霉加中药组中的信息有提高延边黄牛瘤胃微生物合成的作用,因而可促进瘤胃内养分消化代谢。     

牛γ-干扰素EIA与TST检测牛结核病的比较

采用牛γ-干扰素EIA（酶免疫分析）与结核菌素皮内试验（TST）两种方法对某奶牛场中182头奶牛进行牛结核病的检测,并对牛γ-干扰素EIA与TST两种检测方法进行比较。结果：TST检出阳性123份、可疑20份、阴性39份,牛γ-干扰素EIA检出阳性58份、阴性124份,TST的阳性率大于牛γ-干扰素EIA,EIA与TST相比,敏感性为30.30%、特异性为82.05%、符合率为39.56%。     

中药添加剂对延边黄牛非特异性免疫水平的影响

探讨中药添加剂对延边黄牛非特异性免疫水平的影响。方法:采用三分群血细胞分析仪测定法和葡萄球菌吞噬法检测延边黄牛血液的白细胞总数及中性粒细胞吞噬率,并应用比色法测定其血清中SOD、NO含量。经统计学分析,与对照组比较,白细胞总数、NO含量在正常范围内有逐渐上升的趋势,中性粒细胞吞噬率、SOD含量显著提高,表明中药添加剂具有增强延边黄牛机体非特异性免疫水平的功能。     

中药复方连翘对感染法氏囊病毒雏鸡免疫功能的影响

160只7日龄健康岭南黄鸡随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组,每组40只,Ⅰ为正常对照组、Ⅱ为感染病毒组、Ⅲ为中药复方治疗组、Ⅳ为中药复方制剂组,Ⅱ、Ⅲ组均于8日龄感染传染性法氏囊病毒（IBDV）,Ⅲ、Ⅳ以20g·kg^-1单剂量灌服中药复方连翘汤。分别于试验后第7、14、21、28日龄采外周血及免疫器官法氏囊和脾脏,测定血细胞的吞噬能力、外周血T淋巴细胞的百分率和T淋巴细胞的转化率,流式细胞仪测定鸡外周血和脾T淋巴细胞亚群CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋T细胞的含量;放血致死称体质量、脾和法氏囊质量,计算免疫器官指数。在感染IBDV7d后取脾脏和法氏囊组织,制备组织样品进行组织学及透视电镜观察。结果表明：中药复方连翘制剂可使雏鸡外周血细胞的吞噬能力、T淋巴细胞的百分率和T淋巴细胞的转化率、法氏囊和脾脏的质量明显提高,对感染IBDV后免疫器官法氏囊和脾脏有明显的改善和恢复作用,提高外周血和脾淋巴细胞中CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋T细胞百分率,改变CD4^＋／CD8^＋比值促进对机体免疫系统的调控。感染病毒组的上述指标显著下降,中药复方连翘治疗组与感染病毒组相比能显著提高上述指标。     

负离子中药复合制剂对延边黄牛生长性能、养分表观消化率及血液生化指标的影响

本试验旨在探究负离子中药复合制剂对育肥后期延边黄牛生长性能、养分表观消化率及血液生化指标的影响。试验选取30月龄左右的延边黄牛公牛12头,体重平均为（351±20） kg,完全随机分为对照组和试验组,每组6头。其中对照组饲喂育肥后期基础日粮,试验组饲喂育肥后期基础日粮添加20 mg/kg负离子中药复合制剂。预饲期10 d,正试期90 d。试验期间,每天记录试验牛的采食量及剩余量,并在预饲期结束和屠宰前空腹称重;试验结束时空腹采血,测定血液常规生化指标;在试验第90天时采用全收粪法测定牛的表观消化率。结果显示,与对照组相比,试验组牛平均日增重（ADG）、饲料转化率（FCR）及粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维的表观消化率,均显著高于对照组（P<0.05）,干物质（DM）、粗灰分、钙、磷的表观消化率无显著变化（P>0.05）;负离子中药复合制剂可以显著提高牛血液中白细胞（WBC）、淋巴细胞数（LYM）及淋巴细胞百分比（P<0.05）,对血液中其他成分无显著影响（P>0.05）。综上所述,在育肥后期添加20 mg/kg负离子中药复合制剂可以显著提高延边黄牛的生长性能及对营养物质的吸收利用,并有助于延边黄牛免疫能力的提高。     

胡麻油和苹果酸对延边黄牛瘤胃发酵特性的影响

试验旨在研究基础日粮添加胡麻油和苹果酸对延边黄牛瘤胃发酵的影响.选用4头安装永久性瘤胃瘘管的延边黄牛,采用4×4拉丁方设计,1个对照组和3个试验组,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加胡麻油475 g/d(LO组)、胡麻油475 g/d+苹果酸160g/d(LOM组)和胡麻油475 g/d+苹果酸160 g/d+小苏打(NaHCO3)47.5 g/d(LOMS组).试验结果表明:各试验组与对照组相比pH均有提高趋势,饲喂后9h显著提高,且LOMS组在6h时显著高于对照组.饲喂后1h,LOM组和LOMS组的NH3-N质量浓度显著低于对照组,在3h时达到最低值.各试验组的丙酸质量浓度与对照组相比都有增高的趋势,而乙酸、丁酸和总挥发性脂肪酸有降低的趋势,同时添加胡麻油和苹果酸更为明显.处理组与对照组相比,乙酸丙酸比显著降低.说明在饲粮中添加胡麻油和苹果酸有利于延边黄牛的瘤胃发酵,且同时添加效果更佳.     

中药复方制剂连黄对动物细胞免疫水平及血清生化指标的影响

近年来,随着分子生物学和免疫学的发展,运用现代免疫学的理论和技术,筛选出具有免疫促进作用的中草药,分别提取其有效成分,以及配伍更合理的复方制剂已成为目前兽药研究的主要方向.本试验采用中药复方制剂连黄对犊牛和小鼠进行了细胞免疫学指标和血清生化指标的测定,为其全面开发及今后临床合理用药提供了理论依据.     

牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用

以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸—硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素（Pokeweed mitogen,PWM）刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11。将单抗5E11以40μg/mL浓度包被,与1∶3 000倍稀释的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清（13.8μg/mL）配对,以1∶6 000稀释的商品化酶标羊抗兔IgG为指示抗体,建立了BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法,该方法可以检出2.56 U/100μL（30.5 pg/100μL）的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ。以商品化试剂盒作为平行对照,将获得的奶牛临床检测血浆样品使用BoIFN-γ抗原捕获ELISA法进行检测,结果显示两种方法检测符合率达到83.9%。本研究建立的BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法可有效检测分泌性IFN-γ,为进一步开发BoIFN-γELISA检测试剂盒奠定了基础。     

抗猪γ-干扰素单克隆抗体的制备和鉴定

将在大肠埃希氏菌中表达的重组猪γ-干扰素（rpIFN-γ）免疫8周龄BALB／c鼠3次后，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞按标准程序融合后，以间接ELISA和有限稀释法进行筛选，获得1株能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该株单克隆抗体命名为B11株。经Western blot分析和间接ELISA检测，B11株能与商品化猪IFN-γ标准品产生特异性反应。间接免疫荧光检测显示B11株能与经PMA刺激的猪外周血单个核细胞产生特异性荧光。抗体亚型鉴定结果表明，B11株为IgG1型，且轻链为κ链。     

中药复方对低温条件下锦江黄牛生产性能及血清抗氧化指标的影响

本试验选择5月龄,150 kg左右的锦江黄牛15头,分为低温对照组、中药添加剂1组和中药添加剂2组三个组别,每组5头,研究中药复方添加剂对冬季饲养锦江黄牛的抗冷应激作用。试验为期30 d。结果表明:与低温对照组相比,中药1组日增重明显升高,料重比显著下降,血清MDA含量下降59.26%(P<0.01);中药2组日增重和料重比与低温对照组差异不显著(P>0.05),血清MDA含量下降了81.48%(P<0.01);两个中药添加组肉牛的血清SOD活性与低温对照组均无显著差异(P>0.05)。以上结果表明,饲粮中添加中药复方1后可有效缓解冬季饲养的锦江黄牛冷应激反应,提高其血清抗氧化能力,改善生产性能,且其效果优于中药复方2。     

牛γ-干扰素基因的克隆及序列分析

根据GenBank中已公布的牛γ-干扰素(BovIFN-γ)基因序列设计引物,应用一步法逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以从牛外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,扩增出γ-干扰素成熟肽基因片断,并对其进行了克隆、测序及序列分析.结果表明,试验所设计引物可以成功用于扩增牛γ-干扰素成熟肽基因片段,所扩增序列与GenBank中已有序列同源性达99.77%.     

红曲霉合生素对延边黄牛瘤胃内环境的影响

试验研究红曲霉合生素对延边黄牛瘤胃内环境的影响。选择6只安装永久性瘤胃瘘管的成年延边黄牛母牛为试验动物[(325±25)kg],采用3×3完全拉丁方设计试验。分别测定瘤胃液pH值、纤毛虫数、NH3-N浓度和BCP浓度。试验结果表明:采食后各组pH值无显著影响(P0.05)。瘤胃内NH3-N浓度均处于合成瘤胃微生物的最佳浓度范围内,红曲霉+中药组与对照组、红曲霉组相比差异显著(P0.05)。6h纤毛虫数量对照组显著高于红曲酶组和红曲酶+中药组(P0.05)。其它时间差异不显著。红曲霉+中药组BCP含量显著高于其它两组(P0.05)。说明红曲霉+中药组有提高延边黄牛瘤胃微生物合成的作用,因而可促进瘤胃内养分消化代谢。     

复方中药对腹水症肉鸡肝肺血清NO含量和mPAP的影响

肉鸡腹水症是因肉鸡生长过快而导致机体供氧不足，心脏功能性代偿发展为衰竭，导致血液循环障碍，以致肺动脉高压。因高血压使肝脏充血水肿，肝内淋巴液从肝脏渗出，形成腹水。本研究以探讨复方中药制剂对腹水症肉鸡肝肺血清NO和mPAP影响，为肉鸡腹水症的防治和发病机理研究提供理论基础。     

6-DMAP对延边黄牛末期卵母细胞核移植的影响

为探讨6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）在延边黄牛末期去核的体细胞克隆中的作用,本试验主要研究了单独使用离子霉素处理与离子霉素联合添加6-DMAP处理对体外成熟的老化延边黄牛卵母细胞的激活率的不同影响;以及不同时期添加6-DMAP对重构胚后期发育能力的影响。试验结果显示,体外成熟的老化卵母细胞,使用离子霉素单独处理后91%被激活,而在离子霉素联合添加6-DMAP处理后却没有细胞被激活,也就是没有第二极体的排出。另外,融合后使用6-DMAP处理,所得重构胚的囊胚发育率最低,而激活后的卵母细胞立即用6-DMAP处理,所得重构胚的发育能力与无6-DMAP处理的相近。综上所述,离子霉素联合添加6-DMAP可抑制老化的延边黄牛卵母细胞的激活,阻止第二极体的排出,但对重构胚的后期发育没有影响。而融合使用添加6-DMAP的培养液,抑制了重构胚的后期发育。     

猪接种肺炎支原体疫苗对血液γ-干扰素和生产性能的影响

为了探讨猪肺炎支原体疫苗对猪自然感染肺炎支原体的免疫保护力,并比较其对肺脏病变及生产性能的影响。本试验选择在中国华南地区某一长期存在猪支原体肺炎的猪场进行。试验设A、B、C三组,每组各100头猪,其中A组21日龄肌注A疫苗1头份;B组7日龄和21日龄分别肌注B疫苗1头份;C组为对照组,不进行免疫。试验过程中分别在初生、4周龄、10周龄、16周龄和23周龄时采血,测定血清中γ-干扰素的含量,并对各组各阶段生产性能进行统计;23周龄屠宰时取肺脏进行肺炎病变计分,并取病变部位和纵隔淋巴结进行组织学检查。结果显示,免疫组血清γ-干扰素均比对照组高,差异极显著(P≤0.01),而免疫组中A组比B组高,差异显著(0.01≤P≤0.05)。各组肺炎计分结果表明,A组显著低于B组(P≤0.01),B组显著低于C组(P≤0.01)。各组生产性能统计结果显示,免疫组各阶段日增重比对照组高,饲料转化率高,死亡率低,治疗药物成本也显著降低(P≤0.01)。其中A组比B组的日增重高(0.01≤P≤0.05),饲料转化率高(0.01≤P≤0.05),治疗药物成本也有所降低(0.01≤P≤0.05)。     

中国部分重点地区牛结核病的γ-干扰素试验流行病学调查

为调查部分省份牛结核病(bTB)的流行情况,我们在山东等14个省份34个历史上疫情较重的县共129个场户采集牛全血2 201份,采用CO2培养箱或蜡罐方法进行bTBγ-干扰素检测,结果显示样品的个体阳性率为6.4%,群阳性率为42.6%。饲养模式对bTB感染影响的统计显示较大规模场的个体阳性率(6.9%)和群阳性率(60%)均高于散养户(分别为5.7%和35.6%)。而牦牛样品的检测结果均为阴性。5个牛群的禽型PPD阳性统计结果显示牛型PPD阳性率越高,则禽型PPD阳性牛在牛型PPD阳性牛中的所占比率越低。在所有阳性牛群中,阳性率≥10%的牛群所占比例高达81.8%(45/55),bTB感染呈现出一个"群发性"的特征。