潜伏期马立克氏病病鸡血清Ⅰ型病毒L-meq、meq基因的比较及遗传分析

从潜伏期感染马立克氏病病毒(MDV)鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR的方法获得MDV的L-meq、meq基因,将其插入pMD18-T克隆载体,经测序并进行了序列分析.结果表明,L-meq、meq基因同源性很高,L-meq中只有180 bp与meq不同.但是采用同样的方法在发病期病鸡淋巴组织中却只能获得MDV的meq基因.为了进一步研究发病期L-meq基因消失的原因,试验对L-meq、meq基因的氨基酸序列的结构域进行了分析.结果表明,L-meq基因中含有9个PRR(proline-rich-reapts)区域,meq中含有6个PRR区域,从而推断PRR区域可能与基因的转录激活及调控病毒DNA复制的功能有关,该180 bp插入序列也许能解释初期感染MDV不致瘤的原因,同时也意味着L-meq基因对于潜伏期的维持是必要的.     

潜伏期马立克氏病病鸡血清I型病毒L—meq、meq基因的比较及遗传分析

从潜伏期感染马立克氏病病毒（MDV）鸡淋巴组织中提取基因组DNA，采用梯度PCR的方法获得MDV的L—meq、meq基因，将其插入pMD18-T克隆载体，经测序并进行了序列分析。结果表明，L—meq、meq基因同源性很高，L—meq中只有180bp与meq不同。但是采用同样的方法在发病期病鸡淋巴组织中却只能获得MDV的meq基因。为了进一步研究发病期L—meq基因消失的原因，试验对L—meq、meq基因的氨基酸序列的结构域进行了分析。结果表明，L—meq基因中含有9个PRR（proline—rich—reapts）区域，meq中含有6个PRR区域，从而推断PRR区域可能与基因的转录激活及调控病毒DNA复制的功能有关。该180bp插入序列也许能解释初期感染MDV不致瘤的原因，同时也意味着L—meq基因对于潜伏期的维持是必要的。     

马立克氏病病毒不同致病型meq基因的比较研究

为了研究马立克氏病病毒（MDV）的meq基因与不同毒株致病性的关系，应用PCR技术扩增了不同致病型MDV毒株的meq基因，测定和比较了它们的核苷酸和氨基酸序列。这些毒株包括：国际通用Ⅰ型疫苗毒CV1988/Rispens株和中国特有的疫苗毒814株、强毒GA株（vMDV)、特超强毒648A株（vv MDV)以及6个广西分离到的野毒株。结果发现，MDV不同致病型的meq基因序列相对比较保守，它们相互间核苷酸和氨基酸序列的同源性均在95.6%-99.7%。但是，与所有测试的致病性MDV毒株相比，二个Ⅰ型疫苗毒CV1988/Rispens株和814株均在阅读框的核苷酸序列中缺失第575-577位3个碱基（CAC），导致一个氨基酸（脯氨酸）的缺失。该缺失性突变恰恰位于meq基因的多脯氨酸功能的一个重复序列（EELCAQLCSTPPPPI）之中。该缺失性突变与一个疫苗毒株失去致肿瘤性是否有关，还有待进一步研究。     

马立克氏病病毒致瘤基因meq功能研究的概述

马立克氏病病毒 (Ｍａｒｅｋ’ｓＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ,ＭＤＶ)之众多已得到鉴定的基因中 ,目前有 3个基因即 132 ｂｐｒ、ｐｐ38、ｍｅｑ被认为可能与致瘤相关。其中 ,ｍｅｑ与 132 ｂｐｒ两个基因是ＭＤＶ 1所特有 ,已证实 132 ｂｐｒ的拷贝数与毒株的致弱程度有关 ,ｐｐ38则被证实可抑制机体的免疫应答。ｍｅｑ基因由于具有与致瘤基因ｊｕｎ/ ｆｏｓ家族类似的分子结构 ,因此 ,我们有理由认为ｍｅｑ基因在ＭＤＶ致病、致瘤中可能发挥重要的作用。本课题在国家自然科学基金和广西自然科学基金的资助下 ,历经 5年由三个单位共同攻关…     

马立克氏病病毒L-meq基因的原核表达及多克隆抗体的制备

从潜伏期感染马立克氏病病毒的鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR的方法获得了马立克氏病病毒的L-meq基因,与NCBI数据库已发表的序列(AB091109)相比,同源性达99%。将L-meq基因片段定向克隆到原核高效表达载体pET-28a中,构建pET-28a-L-meq重组质粒。将重组质粒转化受体菌Rosetta中,以IPTG对其进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,结果表明L-meq基因在E.coli Rosetta中得到了正确表达,薄层扫描分析表明,表达蛋白占细菌总蛋白的18.8%,将表达蛋白进行初步的纯化,制备了L-MEQ蛋白的多克隆抗体。用ELISA方法对多克隆抗血清进行鉴定,结果表明其纯化的重组的L-MEQ蛋白具有良好反应原性和特异性。     

马立克氏病病毒致瘤相关基因meq在不同病变组织中的变化

以MSB-1肿瘤细胞建立的马立克氏病为病理模型,利用PCR技术扩增不同病变组织中的meq基因,构建meq基因重组阳性质粒,测定和比较它们的核苷酸和氨基酸序列。结果显示,与L-meq（1 200 bp）和标准株GA的meq（1 020 bp）比较,MSB-1细胞和脾脏肿瘤组织的meq基因（1 197 bp）、羽髓meq基因（1 017 bp）分别相应缺失3个碱基（CCA）;MSB-1细胞和脾脏肿瘤组织的meq基因具有与L-meq相同的180 bp插入序列;氨基酸序列也发生相应变化。结果表明,meq基因在不同病变组织中的核苷酸序列发生了变化,这种变化可能与马立克氏病病毒的致瘤机制有关。     

马立克氏病病毒的分离与鉴定

从广西不同地区患马立克氏病的鸡群分离出１０株马立克氏病毒，命名为ＭＺ１、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｇ２、Ｌ１、Ｇ５、Ａｎ７、Ｎ。用ＭＤＶ分型单克隆抗体对Ｅ４、Ｌ１、Ｇ２、Ａｎ７、Ｎ毒进行血清型鉴定，结果除Ｅ４疑有血清Ⅱ型与血清Ⅰ型ＭＤＶ同时存在外，其余均为血清Ⅰ型ＭＤＶ。     

马立克氏病毒单克隆抗体的制备及应用

用ＭＤ１１／７５ｃ，ＳＢ１，ＨＶＴＦＣ１２６三个马立克氏病毒株分别兔疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，获得１０株分泌抗马立克氏病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＦＭ３，ＦＭ１７，ＦＭ２４，ＦＭ２８，ＦＭ４２，ＦＭ４５，ＦＭ５２，ＦＭ５３，ＦＭ５４，ＦＭ１５９。这些单克隆抗体都具有免疫萤光反应特性，其腹水抗体的ＦＡ效价为１０＾３－１０＾５，其中ＦＭ３，ＦＭ４２，ＦＭ５３，ＦＭ１５９等单抗具有ＥＬＩＳＡ特性，     

鸡肾细胞培养分离鸡马立克氏病病毒

鸡肾细胞培养分离鸡马立克氏病病毒吕昌琳高登慧（贵州农学院，贵阳５５００２５）马立克氏病（ＭＤ）是由疱疹病毒引起的一种具有高度传染性的肿瘤性疾病，作者用琼脂扩散进行流行病学调查，用鸡胚、雏鸡接种进行人工感染试验及病理组织学检查、荧光抗体试验，反向间接血...     

鸡马立克氏病病毒编码的miRNA体内表达特征分析

最新研究发现,鸡马立克氏病病毒(MDV)基因组编码的miRNAs在肿瘤发生发展中发挥了重要的调控作用.为阐明强弱毒株编码的miRNA差异表达与病毒复制的关系,本研究采用SYBR Green荧光定量PCR方法检测了MDV CVI988疫苗株和MDV GA强毒株编码的M4-5P、M8-3P和M12-3P 3种miRNAs在肝脏和胸腺中的动态表达特征.结果表明,强弱毒株编码的这3种miRNAs在病毒感染过程中具有明显的差异性,其中GA株编码的miRNAs表达量高于CVI988株,这是由于强弱毒株在体内的复制滴度差异造成的,表明在感染前期miRNAs的表达量与病毒载量有关.该研究为进一步研究miRNAs的功能提供了实验依据.     

鸡马立克氏病病毒的分离鉴定和防治试验

1 前言鸡马立克氏病(Marek's disease MD)是由庖疹病毒群的亚群病毒(与细胞相结合)引起,可造成严重经济损失的世界性家禽流行病。大庆机械化养鸡厂1986年投产以来,鸡MD的防制主要采取1日龄注射国产马立克疫苗和法氏囊疫苗以及相应的消毒工作。据1987、1988年     

鸡马立克氏病病毒的分离与初步鉴定

从鸡马立克氏病病鸡拔取羽毛根 ,经处理后接种于 4日龄鸡胚绒毛尿囊膜。盲传到第六代出现典型的马立克氏痘斑。用第7代鸡胚绒毛尿囊膜研磨液与MD阳性血清进行琼脂扩散试验 ,结果出现了明显的白色沉淀线。此结果表明已分离到马立克氏病毒。