氯霉素人工免疫原的合成与鉴定

将氯霉素(CAP)进行化学修饰引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的氯霉素半琥珀酸酯(CAP-HS);采用混合酸酐(MA)法将CAP-HS与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成人工免疫原BSA-CAP-HS和包被原OVA-CAP-HS,用红外(IR)、紫外(UV)、凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;用BSA-CAP-HS免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,CAP-HS与BSA合成成功,其分子结合比为15.6∶1,获得了高价、敏感、特异的CAP pAb,为CAP残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

氯霉素多克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

将氯霉素(CAP)进行化学修饰引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的氯霉素半琥珀酸酯(CAP-HS);采用混合酸酐(MA)法将CAP-HS与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成人工免疫原BSA-CAP-HS和包被原OVA-CAP-HS,用红外(IR)、紫外(UV)、凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;用BSA-CAP-HS免疫新西兰白兔和SPF鸡制备多克隆抗体(pAb),间接ELISA测定其效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,琼脂双扩散试验、WestGold膜杂交试验和交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-CAP-HS偶联成功,其分子结合比为15.6∶1,获得了高价、敏感、特异的CAPpAb,为CAP残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及ciELISA试剂盒的研制

将氯霉素(CAP)化学修饰引入羧基活性基团,形成具有半抗原结构特征的氯霉素半琥珀酸酯(CAP-HS),用混合酸酐法制备免疫原BSA-CAP-HS和包被原OVA-CAP-HS,用UV,SDS-PAGE进行鉴定;BSA-CAP-HS免疫BALB/C小鼠,细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备CAPmAb,并鉴定其免疫学特性;应用CAP mAb研制CAP残留快速检测ciELISA试剂盒(CAP-Kit),并测定其性能.结果表明,BSA-CAP-HS偶联成功,分子结合比为1:15.6;筛选出3株杂交瘤,其中最好的4F9株间接ELISA效价细胞上清为1:1.28×103,腹水为1:6.4×105,亲和常数(Ka)为1.84×1010L·mol-1,半教抑制浓度(IC50)为2.4 μg·L-1,与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR)为150%,与其它酰胺醇类和抗菌素药物无交叉反应;CAP-Kit的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为0.1～128 μg·L-1,灵敏度为0.053 μg·L-1,检测限为0.1 μg·L-1,奶样、肉样的平均添加回收率为88.5%,82.7%,平均批内和批间变异系数<15%.CAP-Kit在4 ℃可保存180 d.     

二氟沙星单克隆抗体的研制及其免疫学特性的鉴定

采用改进的碳二亚胺法,将半抗原二氟沙星(DIF)与载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,制备得到二氟沙星全抗原DIF-BSA和DIF-OVA.采用紫外(UV),凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;用BSA-DIF免疫BALB/C小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术制备二氟沙星单克隆抗体(DIF mAB),并对其效价、亲和力和特异性等进行鉴定.结果表明,BSA与DIF偶联成功,分子结合比为1:4.7,筛选出1H10、2F12、4D8共3株敏感特异的杂交瘤细胞,间接ELISA效价细胞培养上清分别为1:5.12×102、1:3.2x101、1:2.56×102,腹水效价分别为1:2.56×105、1:1.28x105、1:6.4×104.同种亚型分别为IgG1、IgG1、IgG2a,亲和常数(Ka)分别为2.94×1010L/mol、1.72×1010L/mol和1.35×1010L/mol.亲和力最高的1H10对DIF的IC50为2.2ng/ml,单抗与其他氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应.通过试验获得高效价、敏感、特异的mAb,适用于动物性食品中DIF的残留检测的免疫学试验.     

氯霉素多克隆抗体的制备及免疫活性研究

建立氯霉素的免疫分析方法,由氯霉素原药与丁二酸酐反应合成了氯霉素两种半抗原(CAP-HS1、CAP-HS2),分别纯化后经质谱法(MS)分析鉴定结构.纯化的半抗原与牛血清蛋白(BSA)以碳二亚胺法偶联得到人工抗原.将免疫抗原分别免疫兔子获得了相应抗体.当包被抗原的浓度为10μg·mL-1时,抗CAP-HS1和CAP-HS2的冻干粉效价分别为8.39×106和6.55×104(OD490nm=1.0).研究了抗原抗体反应的亲和力和竞争抑制能力,其中抗CAP-HS1抗体适合免疫分析,检测线性范围为0.2～100 ng·mL-1,最低检测限IC20为0.239 ng·mL-1,抗CAP-HS1抗体对各类似物如甲砜霉素、氟甲砜霉素的交叉反应率分别为0.025%和0.166%,对其他类抗生素的交叉反应率＜2×10-5.     

盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及其特性

以戊二醛法将盐酸克伦特罗 (Clenbuterol,CL)连接到牛血清白蛋白 (BSA)上制备抗原(BSA -CL) ,并以BSA -CL免疫Balb/c小鼠 ,应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与NS0细胞融合 ,建立分泌CL单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过对杂交瘤细胞培养上清的检测、鉴定 ,筛选出 1 7株高亲和力的杂交瘤细胞株 ,其中C - 4C9、C - 2D6、C - 4G1和C - 2H6的培养上清ELISA效价为 1∶5 1 2 ,1∶640 ,1∶81 0和 1∶2 5 6;腹水ELISA效价为 5× 1 0 - 6,1 .7× 1 0 - 5,2×1 0 - 6和 3.3× 1 0 - 5。 4株单抗与 β -肾上腺素激动剂沙丁胺醇的交叉反应性为 0 .79% ,与肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素及畜禽常用抗生素无交叉反应性。可以作为制备CL快速检测的特异性单克隆抗体应用     

抗氯霉素单克隆抗体的制备及直接竞争ELISA方法的建立

用人工合成的氯霉素-卵清蛋白(CAP-OVA)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选出1株能稳定传代并分泌抗氯霉素(CAP)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞4C9,并以此制备腹水单抗.经间接竞争ELISA(ciELISA)检测,该单抗亚类重链类型是IgG1,轻链为κ类型,单抗腹水效价为1∶1×106,与甲砜霉素、氟甲砜霉素以及其他常见抗生素的交叉反应率小于0.01%.用过碘酸钠氧化法合成CAP酶标记单抗,建立了CAP直接竞争ELISA(cdELISA)方法.此法检测的线性范围为0.1~100 ng·mL-1,半数抑制浓度(IC50)为5.81 ng?L-1.添加回收实验表明所建立的CAP cdELISA方法检测限达到0.1 ng·L-1,对比试验表明其检测灵敏度与商品试剂CAP ELISA基本相当.     

呋喃它酮代谢物AMOZ单克隆抗体的制备与免疫学特性鉴定

用碳二亚胺(DCC)一步法将对醛基苯甲酸衍生物CPAMOZ偶联于牛血清白蛋白、卵清蛋白上,合成免疫原CNPAMOZ-BSA、包被原CNPAMOZ-OVA。用紫外线扫描、SDS-PAGE进行人工抗原合成的鉴定;免疫Balb/c小鼠,用杂交瘤技术建立分泌NPAMOZ mAb的细胞株;对NPAMOZ mAb的效价、敏感性和特异性进行鉴定。结果表明,CPAMOZ-BSA人工抗原分子结合比为15∶1;筛选出分泌NPAMOZ mAb的敏感特异的杂交瘤细胞1株2D11-B4,间接ELISA测定细胞培养上清,效价达到1∶(6.4×102),腹水效价为1∶(1.2×106),对NPAMOZ IC50为7.58μg/L,与其他抗生素交叉反应率低。本试验获得了抗NPAMOZ高价、敏感、特异的mAb,可用于呋喃它酮代谢物AMOZ的残留检测。     

抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及金标试纸检测方法的建立

以BSA-CAP-HS免疫Balb／C小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞,体内诱生腹水法制备cAP mAb,并鉴定其免疫学特性;依据胶体金免疫层析试验(GICA)原理,以CAP mAb 为金标抗体,研制CAP残留快速检测金标试纸(CAP-Strip),并对其性能进行测定。结果表明,筛选出了3株杂交瘤细胞,其中最好的4F9-B2株间接ELISA效价细胞培养上清为1:1 280,腹水为1:640 000,亲和常数(Ku)为 1．84×1010 L/mol,对CAP的半数抑制浓度(IC50)为0．88μg/L,与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR%)为150%,与其他酰胺醇类和抗菌素类药物无交叉反应;CAP-Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit拟合曲线,目测检测限为0．5μg/L;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100％;可见CAP-Strip具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于CAP残留的快速检测,具有较高的推广应用价值。     

抗2,4 D单克隆抗体制备及免疫学特性鉴定

制备抗2,4-D高敏感性和高特异性的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。采用EDC法将BSA、OVA和2,4-D偶联制成免疫原和包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定后,用免疫原免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫,用间接ELISA和阻断ELISA选择高效价、高敏感性的小鼠进行细胞融合;应用杂交瘤细胞技术建立分泌抗2,4-D单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用体内诱生法制备腹水,并对其效价、敏感性、亚型和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果表明,融合后筛选出3株特异性高的杂交瘤细胞1F11、2A12、2G12,单抗亚型均为IgG1型,效价为1∶2 560～1∶5 120,对2,4-D的IC50分别为0.801、1.332、1.564μg/L,亲和常数(Ka)分别为2.174×1011、3.21×1010和4.36×1010 L/mg,与其他竞争物的交叉反应率均小于0.03%。说明成功获得高敏感性、高亲和力和高特异性的2,4-D mAb,为2,4-二氯苯氧乙酸残留免疫学快速检测方法的建立奠定基础。     

基于网络鸡病防治与诊断专家系统的设计

Ji Zengtao1,2, Wang Jingfei1, Yang Yantao1,2, Li Jing1,2,Wu Chunyan1, Wang Hongbin2, Liu Yun2     

普通小麦—Elymus rectisetus异附加系的特征特性研究

报道了对普通小麦Elymusrectisetus异附加系1026A1、1057A1和1035A2的细胞学、白粉病抗性、高分子量麦谷蛋白亚基组成和形态学性状的研究结果。细胞学鉴定表明,三种异附加系均为2n=22Ⅱ;1026A1、1057A1和1035A2的花粉母细胞减数分裂中期I染色体构型统计结果为2n=22Ⅱ的细胞分别占观察细胞总数的95.1%、97.0%和96.0%,表明3种异附加系具有良好的细胞学稳定性。小麦白粉病抗性鉴定结果表明,E.rectisetus品系1050表现免疫,异附加系和普通小麦亲本Fukuhokomugi高度感染白粉病。异附加系的高分子量麦谷蛋白亚基组成与Fukuhokomugi相同。此外,获得1026A1的形态学标记一个。     

辣椒自交系的基因型值分析

利用Steuclid遗传距离对31个自交系的10个性状的基因型值基于UPGMA法进行研究,在遗传距离GD为6.0处,可将辣椒的两个变种分开,即Capsicumannuumvar.grossum变种群和Capsicumannuumvar.longum变种群;在遗传距离GD为4.6处,可将31个自交系分为5类。第一类:7号,灯笼椒变种;第二类:9号和5号,植株较高大、晚熟、感病;第三类:25号,中抗、矮杆、早熟;第四类:6、12、10、19、14、11、29、31、30、24、16、20、18、17、21、15、13、23、22、8、4号,这一类在熟性、抗性方面属于中间类型,在植株高度方面存在较大的差异;第五类:27、26、28、3、2、1号,植株高大、晚熟、抗病。这种分类结果有助于利用这些自交系进行杂交亲本的选配。     

云南的草蛉及新属新种(脉翅目：草蛉科)

 本文描记了云南省草蛉科的8新种与1新属,对过去所记载的云南省草蛉记录进行了必要的订正与补充。还附录了云南省草蛉科目录(2亚科,15属33种)及分属检索表。     

王维禅诗 禅画对后世文论的贡献

本文从禅宗的角度阐述了王维山水田园诗中的禅味,解读了禅诗的发展脉络,梳理了王维禅诗对王昌龄、皎然、严羽、司空图、王士祯的文论的影响;并运用他的画论《山水论》从禅画的角度探究了其对苏轼文论的影响。王维的禅宗画《雪中芭蕉》为王士祯的"神韵说"的建立提供了依据。     

波尔山羊胚胎移植受胎率影响因素分析

分析了波尔山羊胚胎移植时受胎率的影响因素。研究表明:山羊供、受体发情同步差在±24h之内较好,尤其以受体羊撤栓早12h最佳;移植最佳季节为9—10月份;胚龄对移植效果能产生较大影响,囊胚移植成活率最高可达80%,移胚数量以2枚为宜;母性强的受体移植效果优于母性差的品种;良好的饲养管理可提高移植效果。     

中国柱隔孢属分类研究(Ⅹ)柱隔孢属一新种和二新记录种

 报道柱隔孢属1新种:鬼臼柱隔孢Ramularia podophyla Y.X.Wang etX.Y.Wang和2新记录种:藜柱隔孢Ramularia chenopodiSpregel、1年蓬柱隔孢Ramulariaerigerontis-annui Sawada.新种提供了拉丁文描述并附图,各种均有汉文描述。研究的标本收藏于云南农业大学植物病理真菌标本室(MHYAU)。     

烟叶烘烤过程干燥模型的建立与评价

2015—2016年,以湖南省桂阳烟区烤烟品种K326、云烟87、云烟85中部叶为试验材料进行烘烤试验,选取Newton/Lewis、Henderson and Papis、Wang and Singh、Logarithmic、Page 5种干燥模型,通过回归分析法对烘烤过程中水分比进行模型拟合,并研究烘烤过程中烟叶水分变化与干燥速率。结果表明:2015年烤烟中部叶烘烤过程中的水分比均呈下降趋势,烟叶干燥速率随烟叶干基含水率的下降而下降;Wang and Singh模型可较好地描述并拟合烤烟中部叶烘烤过程中的水分比变化,K326、云烟87、云烟85的模型拟合决定系数R~2分别为0.995 9、0.987 8、0.989 2;采用线性回归法,以2016年烤烟中部叶水分比实测值和Wang and Singh模型理论预测值对模型进行验证,线性回归决定系数R~2分别为0.969 4、0.971 5、0.965 8。Wang and Singh模型在常规烘烤条件下具有较好的验证效果,可为湖南桂阳烟区不同品种中部叶烘烤过程中水分变化提供描述和预测。     

中国长柄茧蜂属一个种的讨论（膜翅目：茧蜂科：优茧蜂亚科）

黄长柄茧蜂ＳｔｒｅｂｌｏｃｅｒａｆｌａｖａＹｏｕｅｔＸｉｏｎｇ是一个独立种，虽然和冈田长柄茧蜂Ｓ．ｏｋａｄａｉＷａｔａｎａｂｅ相似，但两个种在并胸腹节、腹部第一背板和雄性外生殖器的形态上有很大差异．详细描述了两个种雄性外生殖器结构．认为陕西长柄茧蜂Ｓ．ｓｈａａｎｘｉｅｎｓｉｓＷａｎｇ和冈田长柄茧蜂是同种，提出冈田长柄茧蜂分布在中国台湾省的标本记录需分别甄别．     

~(60)Co-γ辐射对杨树生理指标的影响

分别对鲁山杨和圣山杨的种子进行不同60Co-γ射线辐射剂量的照射,得到M1代和扦插后的植株,测定其生理指标,结果表明:随着60Co-γ射线辐射剂量的增加,叶片中CAT活性、可溶性蛋白含量与SOD活性均表现出先升后降的趋势,MDA含量表现为先降后升的趋势。可溶性蛋白含量、SOD活性的峰值均在50 Gy时出现;CAT活性的峰值鲁山杨在100 Gy时出现,圣山杨在200 Gy时出现;MDA含量最大值在250 Gy时出现。综合分析表明高剂量60Co-γ处理会显著降低植株的抗性。