甘蓝型油菜子叶原生质体培养再生植株

从早熟甘蓝型油菜品种６０１的子叶中游离出原生质体，采用液体浅层培养，获得持续分裂的细胞。培养基中的２，４－Ｄ浓度对刺激细胞分裂至关重要。形成的小愈伤组织必须继代培养（ＭＳ培养基补加２，４－Ｄ０．２ｍｇ／Ｌ，ｋｔ２ＭＧ／Ｌ）后，再转至ＭＳ分化培养基（补加ＮＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ，ＫＴ３ｍｇ／Ｌ）上，才能分化出芽。分化的芽在ＭＳ生根培养基（补加ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ）上，可以形成完整植株。     

甘蓝型油菜子叶原生质体培养及植株再生研究

以甘蓝型油菜中双6号子叶为材料制备原生质体,采用固液结合培养,探讨了其原生质体分离、培养与再生的优化条件,获得了再生植株。结果表明:混合酶液(0.5%纤维素酶+0.1%果胶酶+0.2 mol/L甘露醇+80 mmol/L CaCl2)与SCM溶液按3∶7的比例混合,酶解14 h可获得高产率中双6号子叶原生质体;原生质体在前人设计的B、C固液相结合培养基上培养效果好;最佳分化培养基为E培养基+1.0 g/L 6-BA+0.1 g/L NAA+0.02 g/L GA3+30μmol/L AgNO3;所有再生芽均在无激素的MS培养基上生根。研究结果为建立成熟的甘蓝型油菜原生质体再生体系提供了新的配方与依据。     

甘蓝型油菜原生质体培养和植株再生

从甘蓝型油菜试管苗下胚轴和幼叶分离的原生质体，在含２．４－Ｄ０．８ｍｇ／１，ＮＡＡ０．５ｍｇ／１，６－ＢＡ０．５ｍｇ／１的改良ＢＧ培养基中浅层液体和固体平板培养６天，分裂细胞为８％－２０％，至１５天形成３２细胞的细胞团。愈伤组织在含ＮＡＡ０．２ｍｇ／１，ＩＢＡ０．１ｍｇ／１，６－ＢＡ１．０ｍｇ／１的ＭＳ分化培养基上培养基上培养３－４周，产生不定芽，并在附加ＩＢＡ０．５ｍｇ／１，６－ＢＡ０．２ｍ...     

甘蓝型油菜下胚轴原生质体培养再生植株

油菜是重要的油料作物,我国的油菜种植面积和油菜籽产量均居世界首位。提高油菜籽粒含油量是育种的主要目标之一。我们利用拥有自主知识产权的反义PEP(phosphoenolpyruvate carboxylse）技术获得了超高含油量油菜＾[1]。将超高含油量特性与油菜杂种优势结合是使超高油油菜尽快应用于生产,实现产业化生产的重要途径。而超高含油量不育系的选育是杂种优势利用的前提之一。通过不对称体细胞杂交能“一步法”快速选育不育系＾[2]。为此,建立重演性好、再生额率高的原生质体培养系统十分必要。甘蓝型油菜原生质体的培养已有一些成功的报道＾[3-6],但愈伤组织分化频率都不高。本文以甘蓝型油菜下胚轴为材料,通过琼脂糖包埋法,建立了原生质体高频分裂及植株再生体系,为通过不对称体细胞杂交快速选育超高含油量不育系提供一些科学依据。     

芜菁油菜叶肉原生质体再生植株

以芜菁油菜为材料，从无菌苗５—８天叶龄的叶片分离叶肉原生质体，然后以６×１０￣４／ｍＬ的密度用ＭＰ１－３液体培养基进行浅层培养。培养１０天后，用ＭＰ４培养基对ＭＰ１－２中的培养物进行稀释（１：１）．用ＭＰ５培养基对ＭＰ３中的培养物进行稀释（１：１），每次间隔１０天。在培养期间时常用手轻轻摇动培养物。用这种方法，再生细胞分裂并形成愈伤组织，愈伤组织经ＭＳ１培养基增殖３周，转到分化培养基上诱导植株分化，分化出的苗经诱导生根发育成完整的小植株（共５４株）．在研究中发现：①激素的种类、浓度及组合对刺激细胞分裂的作用差异明显；②提高培养基的ｐＨ值可明显地控制细胞褐化；③ＡｇＮＯ＿３（５ｍｇ／ｍＬ）有益于愈伤组织分化植株；④谷氨酰胺（８０ｍｇ／ｍＬ）和腺嘌呤（４０ｍｇ／ｍＬ）能提高愈伤组织的植株分化频率；⑤原生质体培养基对原生质体植株的分化亦有影响．     

甘蓝型油菜与菘蓝原生质体融合及植株再生体系的研究

以甘蓝型油菜(Brassica napus)和菘蓝(Isatis tinctoria)叶片为材料提取原生质体,采用PEG-高钙高pH法融合亲本原生质体,采用固液双层培养法诱导愈伤组织的形成.研究适宜原生质体分离的酶种类及浓度,并考察了激素种类和用量对愈伤组织诱导和分化的影响.结果表明,5 mg/L纤维素酶+3 mg/L离析酶适合甘蓝型油菜和菘蓝的酶解.各培养基中适宜的激素浓度分别为,诱导培养基PellB 1.0 mg/L6-BA+1.0 mg/L NAA+0.25 mg/L 2,4-D;增殖培养基PellC 2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L2,4-D;分化培养基PellE 2.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA+0.02 mg/L 2,4-D.获得了15株再生植株,杂种幼苗叶片均呈深绿色,叶表面覆有厚的蜡质,叶片肥厚,植株在成熟期时株高比甘蓝型油菜矮,开花较晚,雄蕊发育不完全,杂种体细胞染色体数目为48～66.     

苹果原生质体培养获得再生植株

苹果由于其童期长及基因高度杂合,使其常规育种效益较低。原生质体培养,开辟了苹果育种的新途径。Patat-Ochatt等(1988)首次报道了苹果砧木M9、MM106和品种斯巴坦原生质体再生研究的结果。但是,迄今为止,能够再生植株的品种还相当有限,特别是较好的栽培品种。因此建立普遍适用的苹果原生质体再生系统,是应用原生质体培养进行苹果育种的关键。 本研究于4月底采集犬蕾期苹果花蕾,诱导胚珠愈伤组织,培养基为MS附加2.0mg/L214-D、0.1mg/LBA。取松散的胚珠愈伤组织,转入含2.0mg/L2,4-D、0.1mg/LBA、2.0mg/L Vc、100meg/L水解乳蛋白的MS液体培养基中,在120 r/min摇床上     

玉米原生质体培养再生植株

将玉米自交系“330”成熟胚诱导的愈伤组织,在附加2mg/L2,4—D的MSB培养基上继代、筛选,产生了三种类型的愈伤组织。用结构疏松,生长迅速的Ⅱ型胚性愈伤组织分离原生质体,在KPR或N_6ap培养基中以1×10~5/ml密度进行液体浅层培养,植板率为5.6%—7.4%。采用分步分化法得到了正常的绿苗,并经过壮根,炼苗后移栽成活。     

提高甘蓝型油菜离体培养再生频率的研究

以甘蓝型油菜为材料,研究了不同外植体、基因型以及Ag+和赤霉素(GA3)等对甘蓝型油菜离体再生的影响,建立了甘蓝型油菜高频率的离体再生体系.不同基因型品种以4 d苗龄的无菌苗子叶作为外植体,培养在MS培养基上并附加BA 3.0 mg/L,NAA 0.15 mg/L,GA3 1.00 mg/L,AgNO₃2.5mg/L,在23～25 ℃、16 h光照(2 00O～3 000 lx)下培养27 d以上即可实现不同基因型品种子叶外植体高频率芽的再生.     

包心菜无菌苗子叶及叶片原生质体高频分裂和高频植株再生

以包心菜子叶和叶片原生质体为材料。经不同液体培养基(Bp1,Bp2,B1)浅层培养,再生细胞高频分裂并形成愈伤组织。愈伤组织经扩增后转移到分化培养基上诱导植株分化,从这两种原生质体中获得了再生植株。在原生质体培养过程中,原生质体及细胞团的褐化程度与培养基中的有机成分的多少有关。原生质体的分化频率与培养基中植物激素种类关系甚大。在植株分化时,谷氨酰胺和腺嘌呤对植株分化有很大促进作用。另外,原生质体的来源及原生质体培养基对原生质体植株分化能力均有不同的影响。     

不同密度的油菜根系特征和产量与倒伏之间的相关性初探

以抗倒性不同的3个油菜品种为材料,分析了3种密度下根系特征及其与单株产量和倒伏的关系,结果表明：①根系各性状存在显著或极显著相关：主根长与侧根数目、根体积,根粗与根体积存在显著正相关;侧根数目与根粗、根体积、根茎粗和根茎粗与根粗、根体积存在极显著正相关;根系干鲜比与侧根数目和根体积存在显著负相关。②单株产量与根体积和根茎粗存在显著正相关。③倒伏指数与根粗存在较强的负相关,但未达显著水平。     

甘蓝型油菜利用自交不亲和性的杂种优势

以一个自交不亲和系1010为共同母本与6个品种杂交,产生6个F_1代.用平均优势率、超亲优势率和对照优势率测定了F_1代的优势表现。结果表明,小区产量、主花序长、叶丛期叶长叶宽及主花序角果数的优势较强.讨论了三个优势指数的关系、杂种优势形成的原因及亲子间的相关性。     

青菜子叶离体再生体系的建立

以子叶为外植体,研究了苗龄、培养基中Agar浓度、BA与NAA的组配和添加AgNO₃、GA3对子叶产生不定芽的影响.结果表明,5～9d苗龄的外植体最易诱导出不定芽;培养基中BA浓度是影响不定芽形成的关键,BA浓度低于2mg/L,不定芽难以发生,BA6mg/L与NAA0.05mg/L的搭配有利于不定芽形成;在一定范围内不定芽发生频率随着Agar浓度的提高而提高;培养基中添加5mg/L AgNO₃,2～3mg/LGA3可以提高不定芽的发生频率;在此基础上建立了青菜离体再生体系,利用该体系能够获得较高的芽苗再生频率,但存在着青菜基因型间的差异.     

甘蓝型油菜种子黑色素提取条件的优化

[目的]探讨甘蓝型油菜种子黑色素提取的最佳条件。[方法]以中双5号甘蓝型油菜籽为材料,用碱溶解-酸沉淀法提取甘蓝型油菜种子黑色素,通过单因素试验探讨提取剂NaOH浓度（1％、2％、3％、4％）、提取温度（40、60、80、100℃）、提取时间（1、2、3、4h）、提取次数（1、2、3、4次）、沉淀pH值（1、2、3、4）对甘蓝型油菜种子黑色素提取率的影响,并采用正交试验优化提取条件。[结果]5种因素对甘蓝型油菜种子黑色素提取率均有不同程度的影响。[结论]甘蓝型油菜种子黑色素的最佳提取条件是：NaOH浓度为3％,提取温度为80qC,提取时间为1h,提取次数为2次,沉淀pH值为4,其提取率为13．07％。     

甘蓝型油菜与紫罗兰体细胞杂交研究*

 以甘蓝型油菜湘油15号和紫罗兰的下胚轴为材料,分离制备原生质体。采用PEG-高Ca²⁺-高pH法进行原生质体融合,在PEG浓度为30%,原生质体融合密度为5.0×10⁵个/mL下融合25 min,融合率可达17%。在附加1.5 mg/L 2,4-D,0.5 mg/L NAA,0.5 mL/L BA的改良的KM8p培养基中,以0.3 mol/L蔗糖和0.1 mol/L葡萄糖作渗透稳定剂进行液体浅层培养融合体,培养3~6 d细胞发生第1次分裂,7 d时统计分裂频率最高为13.8%,35 d后形成大量的细胞团和肉眼可见的小愈伤组织,其植板率最高为6.5%。然后转移到含有0.1 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L BA的MS固体培养基上使其增殖。当愈伤组织长至5 mm左右时,将其转到含有0.5 mg/L BA,0.1 mg/L NAA和0.2 mg/L GA₃的MS分化培养基上诱导芽分化。当芽长1~2 cm时,将其切下插入附加0.5 mg/L IBA的1/2 MS生根培养基上,两周后即可获得完整植株。细胞学鉴定表明获得了杂种植株。     

Plant Regeneration from Hypocotyl Protoplast of Brassica campestris

以大白菜成青２号为材料,从萌发５天的无菌苗下胚轴分离原生质体,然后以附加８．２％葡萄糖,０．４ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ,０．４ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ的改良ＫＭ８ｐ液体培养基进行浅层培养．培养１３天后,用含５．２％葡萄糖的ＫＭ８ｐ培养基以１∶１进行稀释．４～６周后,再生细胞分裂并形成愈伤组织,直径约０．４～０．５ｍｍ的愈伤组织经ＭＳ培养基（附加２％蔗糖,０．８％的琼脂,１．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ,０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ）诱导植株分化．５９％的愈伤组织可分化形成芽,分化的芽经诱导生根发育成完整的植株．０．８ｍｇ／ＬＩＢＡ和４００ｍｇ／Ｌ的羧苄青霉素对分化再生有促进作用．     

甘蓝型油菜小孢子再生体系的优化研究*

 以甘蓝型油菜花油3号、湘油15号为材料，优化了甘蓝型油菜小孢子再生胚状体的条件，建立起甘蓝型油菜小孢子的高效再生体系。在主花序第一朵花开后第4d从主花序上取4.0～4.5mm花蕾，每毫升NLN培养基接种1个花蕾的小孢子，在32℃起始热激培养36h，胚状体再生频率最高，花油3号达24.80个胚状体/花蕾，湘油15号达16.50个胚状体/花蕾。胚状体再生植株的频率为80.25%。