驴乳溶菌酶原核表达及活性检测

为探究驴乳源溶菌酶特性,本研究人工合成了驴乳溶菌酶基因DKLYSC1,并连入原核表达载体pET32a(+)中经诱导、表达,通过SDS-PAGE、western blot及比浊法检测重组溶菌酶表达及活性。结果显示,重组溶菌酶主要以包涵体形式高效表达,分子质量约31 ku;纯化的重组蛋白可以与抗His标签抗体特异性结合,特异性较强;比浊法测定复性蛋白比酶活为124.74 U/mg。本研究在大肠杆菌中表达了驴乳溶菌酶,并获得具有活性的复性蛋白,为驴乳溶菌酶的基础研究和应用奠定了基础。     

禽蛋溶菌酶的制备及改性研究进展

溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的糖苷水解酶,是天然防腐剂,广泛存在于自然界中,特别是禽蛋中。但是天然溶菌酶是一种非广谱抗菌剂,主要作用于革兰氏阳性菌,而对革兰氏阴性菌几乎没有作用,近年来,很多学者研究了对溶菌酶的改性方法,使其达到对革兰氏阴性菌的抑制作用。本文综述了禽蛋溶菌酶的结构特点、抗菌机理,重点介绍了禽蛋溶菌酶的分离纯化方法以及国内外对溶菌酶进行物理、化学、生物改性的研究进展,并展望了禽蛋溶菌酶改性的发展前景。     

重组禽腺联病毒介导的溶菌酶对临床病原菌的抑制作用

在前期研究基础上,将经转座获得的杆状病毒重组穿梭质粒rBacmid-Rep、rBacmid-VP和rBacmid-LYZ共转染Sf9昆虫细胞,产生了表达人溶菌酶(hLYZ)的重组禽腺联病毒(rAAAV)(rAAAV-hLYZ);然后用纯化好的rAAAV-hLYZ溶液,在固体培养基上对常见病原菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、蜡状芽胞杆菌、白色念珠菌进行体外抑菌活性试验,研究重组禽腺联病毒介导的溶菌酶对临床病原菌的抑制作用。结果表明,溶菌酶基因能在重组禽腺联病毒中高效表达,这为进一步探索溶菌酶作为新型兽用生物药物奠定了基础。     

鸡输卵管表达的重组人溶菌酶的鉴定

为了对鸡输卵管特异表达载体表达的重组人溶菌酶(rhLYZ)的理化及生物学特性进行鉴定,用直接结晶法从重组载体注射鸡蛋清中提取溶菌酶,以兔抗hLYZ血清为一抗,HRP-标记的羊抗免IgG为二抗,进行Western blotting检测,结果表明表达在鸡蛋清中的rhLYZ能被hLYZ特异抗体识别;将纯化的rhLYZ和天然hLYZ在不同温度的水浴中孵育30min,用RBB-R染料标记比色法检测溶菌酶活性的变化,结果显示二者的热稳定性无显著差异;将纯化的rhLYZ和天然hLYZ用不同PH的溶液稀释,40C孵育30min后进行酶的活性测定,结果显示两者在pH3.0～11.0范围内具有活性,最强活性pH为7.0;以12种常见细菌为试验对象,用最小抑菌浓度法测定含rhLYZ蛋清和纯化rhLYZ的溶菌活性,结果显示两者对鲫鱼嗜水气单胞菌、变形杆菌、枯草杆菌、无鞭毛伤寒杆菌、白色念珠菌和柠檬色葡萄球菌具有很强的抑制作用,对痢疾杆菌、白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有较强的抑制作用,对有鞭毛伤寒杆菌和鳖嗜水气单胞菌无明显的抑制作用.这些试验结果显示,表达在重组载体注射鸡蛋清中的rhLYZ具有与天然hLYZ十分相似的相对分子质量、热稳定性、pH活性范围和溶菌谱.     

螺旋藻多糖活性炭脱色方法的研究

<正>螺旋藻(Spirulina)广泛分布在世界各海区及陆地淡、盐水湖中,是一种极具开发潜力的水生生物资源[1-2]。近年来,螺旋藻的活性成分日渐成为研究的热点,其中,螺旋藻多糖也逐渐受到广大研究者的重视,研究内容主要集中在提取工艺、分离纯化、结构研究及其生物活性等方面[3-7]。多糖的提取、分离、纯化以及结     

鸡肿瘤坏死因子的分离纯化样品和未分离纯化样品免疫活性比较

在鸡体内诱导产生肿瘤坏死因子,取血清、外周白细胞及脾细胞样品,然后分别取一定量样品用硫酸铵盐析法和葡聚糖凝胶G-200柱层析法进行分离纯化。再将分离纯化的样品和未分离纯化的样品分别作用于L929细胞,检测细胞死亡率。结果表明分离纯化的样品活性高于未分离纯化的样品活性,这种纯化方法能提高鸡TNF的纯度和活性。     

反刍动物胃溶菌酶的研究进展

反刍动物胃溶菌酶与其他溶菌酶相比,能在其他溶菌酶无活性或活性较低的胃中(含有胃蛋白酶和胃酸)保持较高的溶菌能力。作者从反刍动物胃溶菌酶的理化性质、酶活性影响因素、进化等方面综合介绍了反刍动物胃溶菌酶的部分特性,并对其应用前景作出展望。     

重组人溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及活性研究

为了构建一种胞内表达人溶菌酶(hLZ)的毕赤酵母工程菌,此研究以人工合成人溶菌酶基因序列,通过酶切位点插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,获得pPICZαA-hLZ。线性化该表达载体,电转化并筛选阳性克隆,甲醇诱导重组蛋白表达后,进行纯化和活性分析。结果表明,通过亲和层析树脂(Ni-IDA)从培养液上清纯化目标蛋白,SDS-PAGE表明目标蛋白为14.7 kDa左右,Western-blot结果表明目标蛋白即为带有6个His标签的重组人溶菌酶,BCA法测定表明纯化后的蛋白浓度为0.121 mg/mL;溶壁微球菌抑菌试验表明该重组人溶菌酶具有部分生物活性。此研究成功地获得了胞内表达且具有部分生物活性的人溶菌酶毕赤酵母工程菌,为重组人溶菌酶作为饲料添加剂开发应用奠定了一定的基础。     

鸡输卵管表达的重组人溶菌酶的鉴定

用直接结晶法从重组载体注射鸡蛋清中提取重组人溶菌酶（rhLYZ），并对其理化及生物学特性进行了鉴定。结果显示，rhLYZ能被hLYZ特异抗体识别；纯化的rhLYZ和天然hLYZ的热稳定性无显著差异，二者在pH3．0～11．0范围内均具有活性，pH为7．0时活性最强。采用最小抑菌浓度法测定了含rhLYZ蛋清和纯化rhLYZ对12种常见细菌的溶菌活性，二者对除有鞭毛伤寒杆菌和鳖嗜水气单胞菌以外的参试茵均有不同程度的抑制作用。表明，表达在重组栽体注射鸡蛋清中的rhLYZ具有与天然hLYZ十分相似的分子质量、热稳定性、pH活性范围和溶菌谱。     

蝇蛆的营养价值及在水产养殖方面的应用

蝇蛆营养价值丰富,繁殖力强,生产成本低,无毒无污染,是一种优质的蛋白源,并且含有凝集素、溶菌酶和抗菌蛋白等活性成分,能够增强机体免疫力,应用前景广阔。综述蝇蛆的营养价值及其在水产养殖方面的应用,以期为相关研究者提供参考。