枯草芽孢杆菌B47高产拮抗物质菌株的紫外诱变选育(英文)

[Objective] The aim of this study was to breed new strains which have higher inhibitory effects on the pathogens of watermelon fusarium wilt.[Method] The endophytic Bacillus subtilis B47 strain was obtained from tomato stems by UV mutagenesis for two consecutive times,then genetic stability as well as physiological and biochemical properties of mutant strains were studied.[Result] The antibacterial activity of all the three mutant strains F303,F304 and F305 was higher than that of B74 strain.After subculture of 10 successive generations,the antibacterial activity of all the three mutant strains for the pathogens of watermelon fusarium wilt decreased,but the antibacterial activity of F305 strain decreased the least,indicating its best genetic stability among the tested strains.The antibacterial circle diameter of F305 strain was 5 mm larger than that of wild strain B47 under the same condition.The mutant strain F305 was in logarithmic growth phase within 36 h and in stationary phase within 36-96 h,while its optimum growth temperature was 35 ℃.F305 strain could grow in sodium salt with the concentration of 1%-10%,but it grew best at the concentration of 1%.Physiological and biochemical responses of F305 strain were in accordance with those of wild strain B47.[Conclusion] This study lays the foundation for the factorial production of antagonistic substance by B47 strain and new methods of preventing from the pathogens watermelon fusarium wilt.     

枯草芽孢杆菌B47高产拮抗物质菌株的紫外诱变选育(英文)

[Objective] The aim of this study was to breed new strains which have higher inhibitory effects on the pathogens of watermelon fusarium wilt.[Method] The endophytic Bacillus subtilis B47 strain was obtained from tomato stems by UV mutagenesis for two consecutive times,then genetic stability as well as physiological and biochemical properties of mutant strains were studied.[Result] The antibacterial activity of all the three mutant strains F303,F304 and F305 was higher than that of B74 strain.After subculture of 10 successive generations,the antibacterial activity of all the three mutant strains for the pathogens of watermelon fusarium wilt decreased,but the antibacterial activity of F305 strain decreased the least,indicating its best genetic stability among the tested strains.The antibacterial circle diameter of F305 strain was 5 mm larger than that of wild strain B47 under the same condition.The mutant strain F305 was in logarithmic growth phase within 36 h and in stationary phase within 36-96 h,while its optimum growth temperature was 35 ℃.F305 strain could grow in sodium salt with the concentration of 1%-10%,but it grew best at the concentration of 1%.Physiological and biochemical responses of F305 strain were in accordance with those of wild strain B47.[Conclusion] This study lays the foundation for the factorial production of antagonistic substance by B47 strain and new methods of preventing from the pathogens watermelon fusarium wilt.     

枯草芽孢杆菌B47高产拮抗物质菌株的紫外诱变选育

[目的]为选育对西瓜枯萎病病菌具更强抑制作用的新菌株。[方法]对从番茄茎内分离获得的内生枯草芽孢杆菌B47菌株进行连续2次紫外线诱变,并对诱变菌株的遗传稳定性和生理生化特性进行测定。[结果]筛选获得3株抑菌活性高于B47菌株的诱变菌株F303、F304、F305,经10代传代培养后,3株诱变菌株对西瓜枯萎病病菌的抑菌活性都有所下降,但F305的抑菌活性下降最小,遗传稳定性最好,在同等条件下其抑菌圈直径仍比野生菌株B47大5 mm。诱变菌株F305在36 h内处于对数生长期,在36~96 h内处于稳定期;最适宜生长温度为35℃;在浓度为1%~10%的钠盐中皆能生长,但以浓度为1%时生长最好,该菌株的生理生化反应与野生菌株B47的反应一致。[结论]该研究为利用B47菌株进行工厂化生产拮抗性物质产品和探讨防治西瓜枯萎病的新方法奠定了基础。     

西瓜内生枯草芽孢杆菌BS211的拮抗活性及盆栽防效

对从西瓜植株体内分离得到的内生拮抗枯草芽孢杆菌BS211的抗菌谱进行了测定;用5种培养基对BS211菌进行培养,测定了这5种BS211菌培养液无菌滤液的抑菌活性;采用硫酸铵沉淀法提取BS211菌抗菌粗提物,并测定了抗菌粗提物的抑菌活性和温度稳定性;运用砂培和盆栽方法进行BS211菌对西瓜枯萎病的防效试验;测定了BS211菌的宿主范围。结果表明:BS211菌对西瓜枯萎病菌等12种病菌都具有强烈的拮抗作用,而且拮抗性能稳定;BS211菌在5种培养基中的生长量没有显著差异而且均能产生抗菌物质,但在不同培养基中产生的抗菌物质的抑菌能力有差异;BS211菌液的硫酸铵沉淀物及上清液对不同病菌的抗性存在差异,说明BS211菌株产生的抗菌物质为复合物;BS211菌抗菌粗提物具有较好的温度稳定性,尤其是硫酸铵沉淀的上清液部分经121℃处理30 m in后活性无明显变化,对番茄青枯病菌仍有强烈的抑菌作用;BS211菌对西瓜枯萎病有显著防效;BS211菌能在辣椒等多种作物体内定殖,有较强的宿主适应性。     

枯草芽孢杆菌J-4菌株产抑菌物质发酵条件优化

为了提高枯草芽孢杆菌J-4菌株发酵液中抑菌物质的含量,采用单因素试验和正交试验相结合的方法,对基础发酵培养基的组成(碳源、氮源、无机盐含量)和发酵条件(发酵时间、装液量、发酵温度、接种量)进行优化。优化后的培养基组成为葡萄糖1.00%、黄豆饼粉1.00%、MgSO_40.15%、Na_2HPO_40.10%、NaH_2PO_40.10%;发酵条件为发酵时间36 h、装液量100 mL(250 mL)、发酵温度37℃、摇瓶接种量5%。在此条件下,枯草芽孢杆菌J-4菌株抑菌圈面积提高50.25%。     

黄瓜内生枯草芽孢杆菌B10抗菌活性物质稳定性研究

为了明确枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B10抗菌活性物质的稳定性,采用平板对峙培养法研究了温度、紫外线、蛋白酶和pH值对其活性的影响。结果表明,高温和过度酸碱均对其抑菌活性有一定影响,蛋白酶和紫外线照射对其生防活性没有明显的影响。     

西瓜枯萎病拮抗细菌HD-5菌株的筛选及鉴定

筛选对西瓜枯萎病病原菌西瓜专化型尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schl.f.sp.niveum)具有拮抗作用的芽孢细菌.通过对土样中分离的产芽孢细菌进行初筛和复筛,得到一株具有较强抑菌活性的拮抗芽孢细菌HD-5菌株,并对该菌株进行了形态特征观察、生理生化鉴定和16S rDNA全序列分析.结合HD-5菌株的形态特征、生理生化特性和16 SrDNA全序列分析结果综合考察,判定该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).     

枯草芽孢杆菌CS16发酵条件及其抑菌活性物质研究

对香蕉枯萎病病原菌有较强抑制作用的枯草芽孢杆菌CS16进行发酵条件优化,通过单因素和正交试验得到CS16抑菌活性较强的培养基配方和发酵条件。结果显示:培养基配方为玉米粉0.5%,豆粕1.5%,K2HPO40.01%;发酵条件为pH 7.5,接种量4%,装瓶量50mL/250mL,培养时间24h,发酵温度30℃时,菌量达3.3×109cfu·mL-1,与优化前相比提高了42倍,抑菌活性提高了7%。抑菌活性物质测定结果表明CS16中抑菌活性物质可分为杀死病原菌和抑制病原菌菌丝生长2类物质。     

芝麻饼残油降解菌的选育诱变

从自然界土壤中采集到一株可降解芝麻饼残油的菌种,经16S r DNA测定其序列后通过Gen Bank进行比对及聚类分析。结果表明,菌株16S r DNA长度为1 496 bp,聚类分析显示与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的同源性达99%以上,该原始菌株经过以Co60为惟一放射源的辐射诱变,获得突变菌,编号为MT-26。经测定,MT-26的酶活力可达725 U/m L,并对其进行传代试验,证明其具有良好的遗传稳定性。     

抗烟草青枯病菌的枯草芽孢杆菌SH7的筛选与鉴定

由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)侵染引起的烟草青枯病是我国烟区的主要病害之一,严重影响烟草的产量和品质。从云南和贵州烟草青枯病重病区采集600份健康烟草根基土壤,并从中筛选出1株对R. solanacearum具有较强拮抗活性的细菌菌株SH7,该菌株在室内平板抑菌试验中,对R. solanacearum抑菌带宽可达132 mm。预先用SH7无菌发酵液保护烟株根部,对R. solanacearum防效达到66.0％。SH7发酵液经70％(NH4)2SO4饱和度沉淀并透析后得到的蛋白粗提液经平板抑菌活性检测,对R. solanacearum具有很强的抑菌活性,抑菌带宽为157 mm。初步确定SH7菌株产生的主要抑菌活性物质为蛋白多肽类物质。经菌体形态学、生理生化测定和16s rDNA序列测定,结果表明:SH7菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

枯草芽孢杆菌21抑菌物质的稳定性分析及初步分离

为了探讨芽孢杆菌21抑菌物质的稳定性及确定其抑菌主要成分,利用管碟法和硫酸铵沉淀法研究了代谢物对玉米圆斑病菌抑菌能力的变化。结果表明:经p H 4~9处理后,代谢产物对玉米圆斑病菌的抑制能力在60%~100%之间变化;经碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后,代谢产物对玉米圆斑病菌的抑制能力在70%~80%之间;但经胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌能力变化不大,仍在95%以上;经40~90℃处理后,抑菌能力变化范围在67%~100%之间,随温度升高,抑菌能力有下降趋势,但当处理温度为100℃时,发酵液几乎没有抑菌效果;代谢物经30%~70%不同浓度的饱和硫酸铵沉淀后,蛋白类沉淀物均具有抑菌作用,其中以饱和度为60%的硫酸铵沉淀后的抑菌效果最好,抑菌半径可达1.0 cm。     

枯草芽孢杆菌CS16诱导香蕉抗病性相关防御酶系的研究

以多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、β-1,3-葡聚糖酶等5种防御酶作为植物抗病性反应指标,研究枯草芽孢杆菌CS16发酵液及其上清液对香蕉体内防御酶活性的影响,探讨其诱导香蕉抗病性机理。结果表明:CS16发酵液和上清液处理香蕉苗后,均能诱导香蕉叶片中PPO、POD、SOD、PAL、β-1,3-葡聚糖酶等5种防御酶活性变化。CS16发酵液处理可诱导香蕉植株防御酶出峰数目多、持续时间长。说明CS16菌株及其胞外代谢物在一定程度上能够诱导香蕉抗病性,推测CS16菌株诱导香蕉抗病性是其生防机制之一。     

N+ 离子束注入诱变选育生防菌枯草芽孢杆菌的研究

[目的]研究N+离子束注入对生防菌枯草芽孢杆菌存活率和突变率的影响。[方法]对离子束注入前样品处理方法进行优化,包括枯草芽孢杆菌液体培养时间、稀释浓度、稀释溶剂和菌膜干燥时间;采用N+离子束注入进行诱变处理,并通过平板对峙法和牛津杯法筛选菌株。[结果]N+离子束注入样品前处理最佳条件为:枯草芽孢杆菌液体培养20～24 h,利用无菌水将菌液稀释到106个/ml,菌膜干燥时间为0～60 min;离子束注入诱变的最佳条件为:注入能量30 kev,剂量为2×1014～4×1014ions/cm2,枯草芽孢杆菌存活率为8.43%～26.71%,突变率为3.50%～5.43%。[结论]该研究结果为枯草芽孢杆菌离子束注入诱变育种方法的研究提供了参考依据,同时也为其他生防菌的辐射诱变育种奠定了基础。     

N~+离子束注入诱变选育生防菌枯草芽孢杆菌的研究(英文)

[目的]研究N+离子束注入对生防菌枯草芽孢杆菌存活率和突变率的影响。[方法]对离子束注入前样品处理方法进行优化,包括枯草芽孢杆菌液体培养时间、稀释浓度、稀释溶剂和菌膜干燥时间;采用N+离子束注入进行诱变处理,并通过平板对峙法和牛津杯法筛选菌株。[结果]N+离子束注入样品前处理最佳条件为:枯草芽孢杆菌液体培养20~24h,利用无菌水将菌液稀释到106个/ml,菌膜干燥时间为0~60min;离子束注入诱变的最佳条件为:注入能量30kev,剂量为2.0×1014~4.0×1014ions/cm2,枯草芽孢杆菌存活率为8.43%~26.71%,突变率为3.50%~5.43%。[结论]该研究结果为枯草芽孢杆菌离子束注入诱变育种方法的研究提供了参考依据,同时也为其他生防菌的辐射诱变育种奠定了基础。     

内生枯草芽孢杆菌B215对香蕉弯孢霉叶斑病抑制作用初探

采用对峙培养法和孢子悬滴法研究内生枯草芽孢杆菌菌株B215对香蕉弯孢霉叶斑病菌的控制作用,试验结果显示,菌株B215明显抑制香蕉弯孢霉叶斑病菌菌丝向四周均匀扩展,抑菌带宽度0.4cm,菌株滤液的EC50值为5.10%,表明内生枯草芽孢杆菌B215对香蕉弯孢霉叶斑病病原真菌具有很强的拮抗作用;而对菌株B215的抑菌谱测定结果显示,B215有广泛的抑菌谱,可产生广谱抗菌物质,生产中有望利用该菌株研制成生防制剂用于香蕉重要病害的防治。     

Bacillus subtilis fmbR抗菌物质的分离和鉴定

 【目的】对Bacillus subtilis fmbR产生的抗菌物质进行分离和鉴定研究，以确定抗菌物质的组成和结构。【方法】采用HPLC和TLC层析对Bacillus subtilis fmbR抗菌物质进行分离纯化，通过ESI-MS和MALDI-MS分析对抗菌物质的组成和结构进行初步鉴定。【结果】HPLC层析表明了Bacillus subtilis fmbR抗菌物质含有保留时间与surfactin相似的成分。TLC层析和原位酸解证明了Bacillus subtilis fmbR抗菌物质含有闭合肽键类的物质，其中之一为相对迁移率Rf与标样surfactin相近的组分。采用ESI-MS分析检测到Bacillus subtilis fmbR抗菌物质含有分子量与surfactinA相同的m/z1009.1、m/z1023.2 和m/z1037.0等3种同系物；通过MALDI-MS分析获得[M+H]+为m/z 3403.95抗菌物质，该物质分子量与Bacillus subtilis 168产生的细菌素subtilosin的m/z3403.3 相同。【结论】Bacillus subtilis fmbR抗菌物质由C13～C15的3种surfactinA同系物和一种羊毛硫抗生素subtilosin组成。     

枯草芽孢杆菌Bs-916胞外抗菌蛋白质的生物功能分析

采用AKTA-epxlore层析系统,利用DEAE sepharose fast flow、Phenyl sepharose 6 F.F.和羟基磷石灰石柱层析后,分离纯化获得枯草芽孢杆菌Bs-916抗菌蛋白质Bacisubin.该蛋白质对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisease)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、白菜黑斑病菌(Alternaria oleracea)、甘蓝黑斑病菌(A. Brassicae)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici (syd.) Butl.)和水稻恶苗病菌(Fusarium moniliforme Sheld)均有抑菌活性,尤其对Alternaria属的病原菌具有较高的毒力.枯草芽孢杆菌Bs-916胞外抗菌蛋白质的抑菌机制是造成病原菌菌丝营养吸收困难,致使菌丝顶端膨大,分支增加,胞壁加厚、断裂,从而抑制了病原菌的生长.研究发现抗菌蛋白具有凝集素活性和核糖核酸酶活性,无蛋白酶活性和蛋白酶抑制活性.     

枯草芽孢杆菌BS-06液体发酵生产农用抑真菌素的初步研究

对枯草芽孢杆菌BS-06产生抑真菌素的条件进行优化,确定最佳发酵条件为:培养时间48 h,初始pH为8.0,装液量为30 mL,培养基中添加2%的麦芽糖、0.15%的硝酸钾、0.15%的吐温-80。枯草芽孢杆菌BS-06产生的抑真菌素具有较广的抗菌谱,对水稻纹枯病菌、稻瘟病菌、节瓜枯萎病菌、冬瓜枯萎病菌、苦瓜枯萎病菌均有较好的抗菌效果,有望开发成生物农药来防治农作物病原真菌。     

枯草芽孢杆菌B21抗菌蛋白的分离纯化及特性研究

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B21对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea Pers.)有较强的抑制作用,其产生的抗菌物质主要是抗菌蛋白.为明确该抗菌蛋白的理化性质,利用饱和硫酸铵沉淀法得到拮抗粗提蛋白,所获粗提蛋白不耐高温,对胰蛋白酶和蛋白酶K部分敏感,对链霉蛋白酶不敏感而对氯仿敏感,作...     

白桦木材蓝变生防枯草芽孢杆菌B26的生物学特性

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B26是一株对白桦木材蓝变菌有良好桔抗作用的生防菌,具有开发成为微生态制剂的潜力.对枯草芽孢杆菌B26的生物学特性进行了研究,以确定其最适生长温度、pH值、光照条件以及碳源、氮源.结果表明:该菌株生长适宜温度为30～40℃,最适生长温度为35℃;适宜pH值为7.0～8....