氟喹诺酮类药物在养猪兽医临床上的应用

<正>1蒽诺沙星药理本品为动物专用的杀菌性广谱高效氟喹诺酮类抗菌药物。其抗菌作用独特,能抑制细菌DNA旋转酶、阻断DNA复制而发挥快速杀菌作用,其作用有明显的浓度依赖性,血药浓度大于8倍最小抑菌浓度(MIC)时,可发挥最佳疗效。对大肠杆菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯氏杆菌、布氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪丹毒杆菌、变形杆菌、化脓性棒状杆菌、败血波氏杆菌、金葡菌、支原体、衣原体等均有良好作用,特别是对支原体有高效,     

蒲公英提取物对猪致病菌的体外抑菌作用

试验应用药敏纸片法和液体试管试验法研究蒲公英提取物对猪链球菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌的体外抗菌作用,结果显示:蒲公英提取物对猪链球菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌均有较好的抑制作用,其抑菌效果有浓度依赖性,最小抑菌浓度分别为9.3 g/L、14.6 g/L、11.7 g/L。     

耐恩诺沙星胸膜肺炎放线杆菌分离株的分子表征

耐恩诺沙星胸膜肺炎放线杆菌自2002年出现于台湾。目前还没有关于胸膜肺炎放线杆菌耐恩诺沙星机制的报道。从台湾2007年9月-2008年4月之间感染胸膜肺炎放线杆菌的猪肺中获得48株胸膜肺炎放线杆菌分离株。29株分离株对恩诺沙星有抵抗作用。为明确胸膜肺炎放线杆菌耐恩诺沙星的机制,对分离株DNA解旋酶和拓扑异构酶IV以及qnr基因的耐喹诺酮决定区(QRDR)的突变进行了分析,该决定区与分离株对恩诺沙星的敏感性有关。研究发现,耐恩诺沙星的分离株至少在解旋酶A的耐喹诺酮决定区有1个突变,从而导致第83位或第87位密码子编码的氨基酸发生改变。外排泵阻化剂(苯丙氨酸-精氨酸-β-奈胺)使恩诺沙星最小抑菌浓度降低2~16倍,这说明外排物参与了菌株耐恩诺沙星的作用。在这些分离株中未检测到质粒介导的耐喹诺酮基因qnr。总而言之,胸膜肺炎放线杆菌耐恩诺沙星可能与多个靶位基因的突变及外排物的激活相关。     

PVPK氟苯尼考固体分散体的制备及体外溶出速率的研究

氟苯尼考(氟甲砜霉素，Florfenicol)是美国先灵葆雅公司研制的兽用广谱抗菌药物，为人工合成的甲砜霉素单氟衍生物。氟苯尼考广谱抗菌，对猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、链球菌、副猪嗜血杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌等革兰阳性和阴性细菌及支原体均有强大的杀伤力。其抗菌活性明显优于氯霉素和甲砜霉素(MIC约为10倍)，目前该药在兽医临床上应用非常广泛，但该药的可溶性剂型目前还没有质量标准，     

猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立

目的建立可以同时检测猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速而可靠的PCR检测方法。方法和结果根据胸膜肺炎放线杆菌的Apx-VIA基因序列、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的16SrRNA基因序列设计5条引物。猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌模板的PCR扩增产物大小分别为342bp,485bp和1258bp。复合PCR对1～12型猪胸膜肺炎放线杆菌标准株,6株多杀性巴氏杆菌标准株,1～15型副猪嗜血杆菌以及25株经生化鉴定确认为上述三种细菌的分离株的基因组DNA作为模板进行检测,均获得预期大小的扩增产物。以猪放线杆菌、吲哚放线杆菌等14种常见细菌作为阴性对照进行PCR检测,结果仅有支气管败血波氏杆菌产生了可以和上述三个特异性条带明显区分的PCR产物。复合PCR针对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的敏感性分别为14pg、34pg和37pg。结论本研究建立的复合PCR特异性好,敏感性高,可以用于猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速检测。     

猪胸膜肺炎放线杆菌、肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌联合检测芯片的研制及应用

本研究旨在建立联合检测胸膜肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌的DNA芯片.用7个从3种病菌基因组中扩增出的不同特异性靶DNA制作基因芯片,并对芯片的靶DNA和探针浓度、杂交温度、重复性、特异性和灵敏度进行了研究.结果表明,检测芯片的特异性强,能与测试的李氏放线杆菌、猪鼻支原体和副猪嗜血杆菌等9种病原区分;灵敏度高,在50μL标记反应体系中,能检测到10～50 pg基组DNA,芯片可重复利用.用芯片对44株目标菌的不同型标准菌株、分离株和疫苗株进行了检测.其信号值≥1 000,信号噪音比(SNR)≥6.用芯片对45头病猪和97头健康猪的临床样品选择培养物进行了检测,其检出率分别为多杀性巴氏杆菌71.1%和49.5%、胸膜肺炎放线杆菌42.2%和26.8%、猪肺炎支原体20%和22.7%,混合感染率分别为42.2%和24.7%.在检测临床样品时,芯片法与PCR的符合率为97.8%～100%,与分离鉴定法的符合率为87.6%～95.6%.研究表明,研制的芯片特异性强、敏感性高、可重复使用,是一种能有效用于胸膜肺炎放线杆菌、猪多杀性巴氏杆菌和猪肺炎支原体鉴定和联合检测的新工具.     

猪胸膜肺炎放线杆菌PCR诊断方法的建立与应用

根据胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因设计1对引物，扩增特异的650bp棱酸片段，建立了应用PCR检测猪胸膜肺炎放线杆菌的方法。特异性试验结果表明，12个血清型的放线杆菌参考菌株均能扩增出650bp特异性的核酸片段，而大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪肺炎支原体、伤寒沙门氏菌和支气管败血性波氏杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明，PCR的最低检出限量为500个放线杆菌。利用建立的PCR检测方法对22株从山东省不同地区分离的疑似胸膜肺炎放线杆菌菌株进行检测．结果14株为阳性。对感染猪病变组织的检测结果表明，病变部位不同，胸膜肺炎放线杆菌的检出率不同，其中以扁桃体的检出率最高。     

地高辛标记探针检测猪胸膜肺炎放线杆菌的研究与应用

利用PCR反应扩增出胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因650 bp的DNA,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的核酸探针。该探针与不同血清型的胸膜肺炎放线杆菌均能发生特异性杂交,而与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、猪肺炎支原体、支气管败血波氏杆菌等细菌的核酸杂交均为阴性。对胸膜肺炎放线杆菌的最低检出限量为10×102 个放线杆菌。对疑似胸膜肺炎放线杆菌感染病变组织检测结果表明,在扁桃体、鼻腔、气管、肺脏均可检测出胸膜肺炎放线杆菌,以扁桃体的检出率最高。为猪胸膜肺炎放线杆菌的诊断和流行病学调查提供了良好的方法。     

斑点杂交法检测猪传染性胸膜肺炎

将位于猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP) apx A毒素基因 3′端的长为 442 bp的DNA片段作为模板制备出地高辛标记的 APP核酸探针。敏感性检测结果表明 ,该探针对 APPDNA的最低检出量为 1 .8ng。特异性检测结果表明 ,该探针能与 APP1～ 1 0血清型标准菌株 DNA抽提物发生特异性杂交反应 ,而与多杀性巴氏杆菌A型和 B型、链球菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 DNA进行的杂交反应均为阴性。应用该探针对临床 6份阳性病料 ,1 1份纤维渗出性病料进行检测 ,结果阳性病料全部检出 ;而对于 1 1份纤维渗出性病料 ,斑点杂交检出 4份是阳性 ,比 PCR方法 6/ 1 1的检出率要低 ,但仍表明所制备的探针用于 APP的检测是一种比较敏感、特异的诊断方法。     

猪传染性胸膜肺炎PCR诊断方法的建立

根据已发表的猪胸膜肺炎放线杆菌APXIV毒素的基因序列，自行设计和合成了二对可扩增448bp和365bp目的片段的引物，成功的建立了检测APP的套式PCR方法。通过对猪肺疫巴氏杆菌、猪链球菌、大肠杆菌、猪嗜血杆菌、猪肺炎支原体和猪丹毒杆菌的DNA进行了PCR检测，结果均为阴性；对猪胸膜肺炎放线杆菌的1、2、5、6、7、9国际标准血清型均扩增出448bp和365bp的特异性条带；检测的敏感度一步PCR可达到5OO个细菌，最低检出DNA浓度可达到0．585ng／mL；套式PCR可达到50个细菌，最低检出DNA浓度可达到58．5pg／mL。另外，对5株从病猪体内分离的猪胸膜肺炎放线杆菌进行了检测，5株均成阳性反应；对10只屠宰猪的肺脏分离物进行了检测，结果1份为阳性。结果表明此法特异性和敏感性均很高，可做为猪传染性胸膜肺炎的快速诊断和流行病学调查的手段。     

“三步疗法”防控猪高热综合征新概念

1发病原因1．1病原因素病毒类主要有猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、蓝耳病病毒、网环病毒Ⅱ型、流感病毒等；细菌类主要有链球菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、化脓棒状杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎支原体、霍乱沙门氏菌等；     

利用菌落多重PCR对传染性胸膜肺炎放线杆菌进行血清分型

参照文献报道的传染性胸膜肺炎放线杆菌的特异基因合成5对特异引物,建立传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分型的菌落多重PCR方法,结果为10株传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型参考菌株均扩增出了相应的预期片段,而支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠埃希菌的扩增均为阴性。利用此多重PCR方法对41株传染性胸膜肺炎放线杆菌分离菌株进行血清型分型,结果所有菌株均扩增出了相应的特异片段,其中6株为1型,5株为7型,1株为5型,29株为9型。     

多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌混合感染引起山羊肺炎的诊断

青海省湟中区某山羊场发生呼吸道疾病,为确定引起本次呼吸道疾病的病原,笔者对病死羊进行剖检,并进行病原分离、鉴定。同时,采用PCR方法,对多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、绵羊肺炎支原体和丝状支原体等呼吸道相关病原进行分子检测。结果发现,患羊临床表现以咳嗽、呼吸困难、精神萎靡和鼻内有粘性分泌物为特征的肺炎,细菌分离获得多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌,未分离获得其他细菌性病原和支原体。PCR检测发现多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌阳性。根据临床症状、剖检变化和实验室检测,最后确诊为由多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌共同感染山羊引起的肺炎。     

头孢喹肟在猪呼吸道感染中应用的研究进展

呼吸道疾病严重威胁畜禽养殖业的发展,导致动物生长缓慢,使发病率和死亡率大幅升高,造成巨大的经济损失。胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、链球菌、副猪嗜血杆菌等是诱发猪呼吸道感染的常见病原菌。头孢喹肟为第4代头孢菌素类动物专用抗生素,具有抗菌谱广、吸收速度快、达峰时间短、生物利用度高、对哺乳动物毒性低及对β-内酰胺酶稳定的特点,能有效治疗猪呼吸道类疾病,防止耐药性的产生。文章阐述了头孢喹肟的理化特性、杀菌机理、药动学特征等,并通过比较头孢喹肟在不同动物体内的药学参数表明头孢喹肟在猪体内达峰时间短,达峰浓度高,消除半衰期较长,能迅速发挥高效的抗菌作用,且能维持一定时间的抗菌效果;系统地介绍了头孢喹肟对猪呼吸道主要致病菌的体外抗菌活性及临床治疗效果,发现呼吸道临床病原菌对头孢喹肟敏感性高,临床应用前景广。目前头孢喹肟在临床应用存在一些问题,不合理使用会导致其出现耐药性,通过PK-PD同步模型的研究及耐药判定标准的建立,可为该药的合理应用提供科学依据。     

胸膜肺炎放线杆菌研究进展

胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae,APP,也有简写为 Ap) ,原称胸膜肺炎嗜血杆菌(H aemophiluspleuropneumoniae,Hp) ,属于巴氏杆菌科嗜血杆菌属 ,后又根据其表型 (phenotype)和 DNA杂交水平均与放线杆菌属模式种密切相关 ,归属为巴氏杆菌科放线杆菌属 ,命名为猪胸膜肺炎放线杆菌 [1 ] 。由本菌引起的猪接触传染性胸膜肺炎是猪的呼吸道传染病 ,各种年龄的猪均易感染 ;常与巴氏杆菌等混合感染 [1 ]。病猪发热 (可达 4 2℃ ) ,呼吸困难 ,食欲不振 ;剖检可见纤维素性胸膜肺炎 ,多感染两侧 ,6 5 %的肺叶病变严重 ;发病率 8.…     

猪胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立

根据猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外膜脂蛋白基因序列，设计合成了1对特异性引物。经PCR扩增，APP1～10标准血清型菌株均能扩增出大小为980bp的DNA片段，而大肠埃希氏茵、猪多杀性巴氏杆菌、猪链球菌、猪肺炎霉形体和葡萄球菌等的扩增结果均为阴性。该方法检测APP DNA的敏感性可达2pg。表明，此PCR方法特异性好，敏感性高，可用于猪传染性胸膜肺炎的快速诊断。     

兔巴氏杆菌和波氏杆菌多重PCR检测方法的建立

参考GenBank中兔巴氏杆菌16SrRNA和波氏杆菌的fim2的基因序列,应用Premier 5.0软件在二者高度保守区设计了2对引物,建立了适合巴氏杆菌和波氏杆菌快速检测的多重PCR检测方法。以该方法对巴氏杆菌和波氏杆菌参考菌株进行PCR扩增,分别能从各自的基因组中扩增出与试验设计相符的644bp和425bp的特异性DNA片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果表明分别为巴氏杆菌16SrRNA和波氏杆菌fim2基因序列。该方法对波氏杆菌的检测下限为4×102 CFU,对巴氏杆菌的检测下限为6×101 CFU。对兔源性沙门菌、葡萄球菌、大肠杆菌、魏氏梭菌扩增结果为阴性。表明所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于鉴别诊断兔巴氏杆菌和波氏杆菌以及2者混合感染。     

猪胸膜肺炎放线杆菌快速PCR检测方法的建立

根据猪胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的 apx A基因序列设计了 1对可扩增 1个4 2 2 bp片段的特异性引物 ,成功地建立了一种检测 APP的快速 PCR方法 ,并确定了其特异性和灵敏性。对血清 1～ 13型等 13个 APP标准株均能扩增出预期 4 2 2 bp的特异性条带 ;对猪副嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌的扩增结果为阴性。对 APP菌液最低检出浓度为 6 8CFU/ m L(D6 0 0 为 0 .0 0 3)。 12株临床分离菌的 PCR扩增结果与生化鉴定结果是一致的。该方法能从病料中分离培养 8h的混合菌群中快速检测APP,可用于 APP的快速诊断和流行病学的调查。     

阿莫西林对副猪嗜血杆菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的药敏试验

以大肠杆菌ATCC25922为质控菌株,采用阿莫西林对5株猪胸膜肺炎放线杆菌和6株副猪嗜血杆菌进行药敏试验,测定其最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌对阿莫西林敏感。     

氟喹诺酮类药物对鸡常见病原菌的体外抑菌活性试验

采用试管二倍稀释法测定单诺沙星等 6种氟喹诺酮类药物对鸡大肠杆菌 (O78)、鸡白痢沙门氏杆菌、禽多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌的体外抑菌效力。结果表明 6种氟喹诺酮类药物对鸡 4种常见病原菌均有较强的抑制作用 ,单诺沙星的作用最强 ,可作为防治鸡细菌性疾病的首选药物。