伊氏锥虫、马媾疫锥虫、布氏锥虫、刚果锥虫的18S rDNA部分序列测定与系统发育关系

对伊氏锥虫（Trypanosoma evansi）：新疆株（XJCA）、湖北株（HBM）、云南株（YNB）、广东株（GDB2）；马媾疫锥虫（Trypanosoma equiperdum）、布氏锥虫（Trypanosoma brucei）、刚果锥虫（Trypanosoma congolense）提取基因组DNA，根据已报道的伊氏锥虫株18SrDNA基因序列设计合成引物，用PCR扩增了锥虫虫株基因组DNA,伊氏锥虫新疆株、湖北株、云南株、广东株、布氏锥虫、刚果锥虫均为373bp的片段；马媾疫锥虫为372bp的片段，PCR产物经电泳鉴定后用试剂盒回收纯化，纯化后PCR产物经连接、转化后测序，将测得的序列用DNAMAN软件分析并与国外已发表的相应序列进行了同源性比较，并绘制了系统发育进化树。结果与国外AJ009153、AJ223564、D89527株同源性达到99％～100％，与另外11株同源性75％。本研究为锥虫分子流行病学研究及分类研究打下基础。     

抗锥虫新药──锥－46的体内致突变性研究

抗锥虫新药──锥－４６的体内致突变性研究张魁华，沈杰，周勇志，王云飞（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所）倪奕倡（中国预防医学科学院寄生虫病研究所）周伟澄，张秀平（国家医药管理局上海医药工业研究院）锥－４６（Ｔ－４６）是家畜寄研所与上海医药工业研究院共...     

伊氏锥虫TR酶的初步研究

国外研究者已报道在布氏锥虫、枯氏锥早、刚果锥虫中发现了存在ＴＲ酶，此酶是锥虫代谢的重要酶之一。伊氏锥虫ＴＲ酶研究的尚属空白。本研究目的是为了确定伊氏锥虫中是存在ＴＲ酶。我们利用分光光度法测出了伊氏锥虫中有ＴＲ酶活性，但无ＧＲ酶活性，测出了ＴＲ酶的Ｋｍ和Ｖｍ值；发现了治疗锥虫药物安锥赛和盐酸锥双对ＴＲ酶有抑制作用，抑制率分别达２８％和３１％；比较了七株中国伊氏锥虫和布氏锥虫敏毫克蛋白中ＴＲ酶活力，其     

伊氏锥虫安锥赛抗药性相关基因-TbTA1的分析

为探讨伊氏锥虫对安锥赛抗药性的分子机理，以布氏锥虫对砷剂药物抗药性相关的TbTA1基因设计引物，以55℃、57℃、60℃、63℃和65℃不同退火温度，分别从伊氏锥虫敏感株的cDNA和基因组DNA中扩增出TbTA1基因的全长序列，但是从安锥赛抗药株伊氏锥虫的cDNA和基因组DNA中都未扩增出TbTA1基因，这表明基因TbTA1可能与伊氏锥虫安锥赛抗药性的产生有关。伊氏锥虫与布氏锥虫的，TbTA1基因序列比较，它们有10个碱基不同，即第88位的G（T.e）-A（T.b）、第144位的T（T．e）-C（T．b）、第224位的C（T．e）-T（T．b）、第471位的C（T.e）-T（T.b）、第472位的A（T．e）-G（T.b）、第549位的G（T．e）-T（T．b）、第1008位的C（T．e）-T（T.b）、第1033位的A（T．e）-G（T．b）、第1293位的A（T．e）-G（T．b）和第1384位的T（T．e）-C（T．b），其中有5个碱基所编码的氨基酸不同，即Val^30（T.e）Ile（T．b）、Ala^75（T．e）-Val（T．b）、Ile^158（T．e）-Val（T．b）、Thr^345（T．e）-Ala（T．b）和Ser^462（T.e）-Pro（T．b），这表明伊氏锥虫与布氏锥虫的TbTA1差异可能是它们的种间差异。     

伊氏锥虫同工梅,蛋白质和抗原组分的比较研究

本文采用生化技术对八个中国伊氏锥虫株及一个布氏锥虫株的同工酶、蛋白质的抗原组分进行比较研究。根据同工酶电泳结果，可将伊氏锥虫和与其形成形态上不能区分的布氏锥虫区别开来，亦可将伊锥虫分为两个酶株群（Ｚ１、Ｚ２）。根据ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳，等电聚焦电泳和免疫印迹试验的结果，可将酶株群Ｚ１分成五个同多肽群（株）。本研究结果表明：中国伊氏锥虫遗传传 变异程度较低，是一个相对稳定的种群。     

伊氏锥虫微环DNA的PCR扩增

伊氏锥虫是动物伊氏锥虫的病原体，属动基体目原虫，动基体ＤＮＡ（ＫｉｎｅｔｏｐｌａｓｔＤＮＡ简称ｋＤＮＡ）是该目原虫所特有的一种非染色体ＤＮＡ。因此，对ｋＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增可用于鉴定和检测伊氏锥虫。本文以５－ＣＡＡＣＧＣＡＡＡＧＡＧＴＣＡＧＴ－３’，５’－ＡＣＧＴＧＴＴＴＴＧＴＧＴＡＴＧＧＴ－３’为引物，对从伊氏锥虫直接抽提的总ＤＮＡ，ｋＤＮＡ以及ｋＤＮＡ基因重组子，经ＰＣＲ扩增后，在含有０．５μ     

盐酸锥双净（T－46）给药局部刺激性和吸收毒性试验

盐酸锥双净（Ｔ－４６）给药局部刺激性和吸收毒性试验钟淑梅，沈杰，周勇志，王云飞，邱巧平，汪英华（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所）盐酸锥双净（简称Ｔ－４６）是我所合成和筛选的抗锥虫新药，经ＣＤ５０、ＥＤ５０治疗指数测定［１］、亚急性毒性试验［２］、体...     

低温状态下伊氏锥虫的放射性核素标记及测定

为了明确伊氏锥虫在低温状态下是否仍有代谢活动，在-20℃和-80℃条件下，在伊氏锥虫保存液中添加3H-TdR活锥虫样品和未添加3H-TdR活锥虫样品，用液闪计数器测定保存的锥虫体内CPM值。结果，添加3H-TdR的活锥虫样品与未添加3H-TdR的活锥虫样品CPM值差异非常显著（P＜0．01），在保存液中添加3H－TdR的活锥虫样品与死锥虫样品的CPM值差异也非常显著。说明3H-TdR渗入到活锥虫体内，在低温条件下伊氏锥虫仍有代谢活动。     

理化因素对体外培养伊氏锥虫致弱的影响

本试验观察了理化因素（γ－射线、紫外线、低浓度杀虫药）对体外培养伊氏锥虫致弱的影响，结果如下：受γ－射线辐照的伊氏锥虫开始时存活数随辐照剂量的增加而减少，随后表现出无规律性，辐照剂量５万ｒａｄ以下对锥虫的存活影响较小，５～１０万ｒａｄ辐照后２ｄ锥虫的存活数明显减少，对小白鼠的感染性消失。伊氏锥虫受紫外线照射的存活曲线为“Ｃ”型，群体抗辐射不均一，平均致死剂量（Ｄ＿（３７））为波长２６５０Ａ的２０Ｗ紫外灯离样品４０ｃｍ处照射约２ｈ。虫体照射后根据体外跟踪观察，其存活数随照射剂量的增大而减少，照射了３ｈ和４ｈ第３天的活虫数近似１００条或不足１００条，对小白鼠的感染性均消失。用０．１μｇ／ｍｌ的苏拉灭和０．８μｇ／ｍｌ的贝尼尔两种低浓度杀虫药在体外对伊氏锥虫诱导４０ｄ仅造成药敏性的改变，未造成毒力减弱。     

伊氏锥虫对安锥赛抗药性的分子基础初探

为了探讨伊氏锥虫对安锥赛抗药性的分子基础，将伊氏锥虫单虫克隆，一部分克隆虫通过28只免疫抑制小白鼠，用安锥赛亚治疗剂量治疗，使其产生抗药性，为抗药锥虫；另一部分克隆锥虫也通过28只免疫抑制小白鼠,，但不用药物治疗，为敏感锥虫，即对照，用体外生长抑制法测得抗药和敏感锥虫的IC50分别为43．8和0．16878μg/ml。分别提取它们的总RNA和mRNA，总RNA分离出3条带，即从电泳的阴极到阳棚分别为26s,21s和5s,mRNA主要分布在21sRNA之后。用抑制性消减杂交法，以敏感锥虫的cDNA为试验组（Tester)，抗药锥虫的cDNA为驱动组（Driver)，共挑选出34个阳性克隆，以cDNA来合成探针，用Southern dot blot鉴定，其中18个片段所在的基因是由于抗药性产生而表达量降低，这18个片段长度为300－700bp。     

12株中国伊氏锥虫对苏拉明的药敏试验

用体外培养生长抑制试验检测了中国伊氏锥虫安徽水牛株（AHB）、广东阳江水牛株（GDB1）、广东水牛株（GDB2）、广东马株（GDH）、广西骡株（GXM）、湖北骡株（HBM）、湖南水牛株（HNB）、江苏高邮水牛株（JSB1）、江苏盱眙水牛株（JSB2）、新疆骆驼株（XJCA）、云南水牛株（YNB）、浙江水牛株（ZJB）对苏拉明的敏感性。它们的50％生长抑制浓度（IC50）依次为0．114、0．041、0．120、0．1490．752、0．252、0．171、0．127、0．339、0．094、0．106、0．118ng/L。结果显示，不同虫株的伊氏锥虫对苏拉明的敏感性明显不同，提示中国伊氏锥虫不同虫株存在抗药性差异。在12株伊氏锥虫中，GXM株对苏拉明的抗药性水平明显高于其他株。小鼠体内治疗试验显示，GXM株以10mg/kg剂量苏拉明治疗无效，在临床上表现出一定的抗药性，而GDB1株以10mg/kg剂量苏拉明治疗则全部治愈。由此可见，体外药敏试验结果与体内治疗结果一致。这一结果提示，多数中国伊氏锥虫株对苏拉明的敏感性偏低，少数虫株已表现出一定的抗药性。     

抗安锥赛克隆伊氏锥虫的生物特性

为了解对安锥赛有抗药性的伊氏锥虫的特性和危害，将伊氏锥虫浙江株克隆，然后人工诱导其对安锥赛产生抗药性，观察抗药性锥虫的生物特性。克隆繁殖后的伊氏锥虫分为3组C(0)0为原种对照组；C(15)0为不接触安锥赛的同步繁殖对照组；第3组为连续经环磷酰胺免疫抑制小鼠人工诱导对安锥赛产生的5种不同程度抗药性锥虫C(1)6、C(3)16、C(6)43、C(9)83和C(15)199。采用无细胞培养技术分别测定C(0)0、C(15)0、C(1)6、C(3)16、C(6)43、C(9)83和C(15)199的IC50，结果依次为0.01550、0.01346、0.0263、0.10237、1.40929、1.92290和9.92330。将这7种锥虫各自按1.0×104条/只经腹腔感染5只小鼠，镜检它们在小鼠尾血中的出虫时间，结果依次为69.6、67.2、76.8、86.4、93.6、98.4、96.0h；各组感染小鼠存活时间依次为154、142、194、207、205、198、202h；各组死亡率均为100%。结果表明，伊氏锥虫经安锥赛作用于小鼠体内传15代后，其生长繁殖和对小鼠的毒性均发生变化，随着伊氏锥虫对安锥赛的抗药性程度升高至IC50为1.92290，抗药锥虫的生长繁殖速度降低，对小鼠的毒性减弱，但毒性并不随锥虫抗药性程度的提高而进一步减弱。这些结果显示，伊氏锥虫在安锥赛作用下，以生长、繁殖、毒力的代谢发生变化来适应安锥赛的作用而生存。     

锥虫长期超低温保藏方法的研究

作者观测不同保护剂、稀释液、ＰＨ值、降温方法、复苏温度、冻融次数、液相气相交替以及解冻后在普通冰瓶中存放时间对伊氏锥虫浙江虫浙江虫株的感染性及致病力的影响。在此试验基础上，又对伊氏锥虫的６个不同虫株、媾疫锥虫、铡果锥虫、布氏锥虫等４个种的９个早株，进行了超低温保藏试验和长期保藏效果观察。已测定的有效保藏期伊氏锥虫达５７４－３２００天，媾疫锥虫达２８６６天，则果锥虫达７６３天，布氏锥虫７８３天。通过     

我国伊氏锥虫病的研究现状及存在的主要问题

我国伊氏锥虫病的研究现状及存在的主要问题李详瑞（北京农业大学兽医学院）伊氏锥虫Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｅｖａｎｓｉ是地理分布最广的锥虫，可以引起骆驼、马、驴、骡、牛、水牛、山羊和猪等多种动物的伊氏锥虫病，从解放初到现在不断在我国南方各省和西北地区流行，...     

抗不同伊氏锥虫株抗体的交叉免疫实验

以抗广西株伊氏锥虫和抗南京株伊氏锥虫免疫血清分别与广西株伊氏锥虫和南京株伊氏锥虫进行体外中和作用,然后接种小鼠。结果经株特异性免疫血清作用的锥虫大部分失去了对小鼠的感染力,而经非株特异性免疫血清作用的锥虫仍然可使小鼠发病死亡。说明两株伊氏锥虫间具有完全不同的抗原性。     

应用质粒PTK探针鉴定锥虫的初步研究

用^32P标记质粒探针PTK1、PTK1.1和PTK1．2，对12株中国伊氏锥虫的斑点杂交试验显示，3个探针均能与8株具有正常动基体的伊氏锥虫杂交，而不与其余4株异常动基体伊氏锥虫杂交，对正常动基体株的敏感度为10^2虫体。探针PTK1亦能与马媾疫锥虫杂交，敏感度为10^2个虫体。但PTK1与布氏锥虫仅发生微弱的杂交反应．敏感度为10^5个虫体。试验表明伊氏锥虫株之间的kDNA微环是同源的，伊氏锥虫与马媾疫锥虫和布氏锥虫的kDNA微环存在着共同序列。     

伊氏锥虫对杀锥虫药抗性的体外试验

伊氏锥虫对杀锥虫药抗性的体外试验涂洁贵摘译沈永林校１引言随着锥虫病流行地区的抗寄生虫药物广泛应用，开发新的抗锥虫药物来防止抗性的发生尤为紧迫。然而制药厂家对投资开发抗锥虫药兴趣甚微。使今后引进新药明显不可能，因此必须致力保持现有杀锥虫药的效果。在癌症...     

2—C—7单克隆抗体对伊氏锥虫感染力的影响

2-C-7杂交瘤细胞株对伊氏锥虫有着专一反应性。为了探讨该杂交瘤细胞株所分泌的抗伊氏锥虫单克隆抗体的生物学活性,我们观察了用单抗处理过的伊氏锥虫对小白鼠的感染力。一、材料与方法 1.杂交瘤细胞培养上清液的收集及其抗体滴度的测定复苏2-C-7细胞株并培养、收集其上清液。用ELISA法测定其抗体阳性滴度,OD值为0.87,阴性对照OD值为0.04。     

伊氏锥虫与小鼠细胞的粘附反应研究

本文探讨了伊氏锥虫在体外与小鼠淋巴细胞、巨噬细胞和上皮细胞间的粘附反应。结果表明，三种健康细胞与锥虫有不同程度的粘附性，不同个体来源的细胞的粘附反应存在差异，但是，各类细胞的粘附率之比基本稳定。动物受到感染后，粘附细胞数大幅度减少。人α－干扰素可以促进健康细胞以及受感染动物细胞与锥虫的粘附性。细胞粘附水平高的个体在疾病的后期表现有较强的耐受力。作者认为，小鼠多种细胞表面存在着伊氏锥虫的病原性受体，后者与动物的抗锥虫感染能力以及疾病发生都有明显相关性。     

抗锥虫新药—锥－46的致癌性预测

抗锥虫新药—锥－４６的致癌性预测张魁华，沈杰，倪奕倡（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所）（中国预防医学科学院寄生虫病研究所）世界上每年有近万种新化学物进入市场，而要确定一个化学物的致癌性试验既费时、费力、耗资又大。一般都用短期试验来检测化学物的致突变...