饲用酸性蛋白酶研究及其应用

蛋白酶是水解蛋白质肽链的总称，包括酸性（pH2.5-3)、中性（pH 7左右）和碱性（pH 8左右）3种，而在饲料中多采用酸性和中性蛋白酶，以提高动物对蛋白质的水解效率，促进动物对饲料蛋白质的吸收效率。其中酸性蛋白酶是端肽酶，一般存在于细胞内，具有多种生物学功能，主要应用于饲料、医药、乳酪制造、合成洗涤剂以及制革工业。本文主要就近年来对饲用酸性蛋白酶的研究及其在动物饲料营养中的应用进行综述。     

印度柞蚕（Antheraea mylitta）蛋白酶抑制因子的纯化、cDNA克隆及性质

通过硫酸铵沉淀、阴离子交换和凝胶过滤及FPLC层析从印度柞蚕(Antheraea mylitta)5龄幼虫血液中纯化得到米曲霉(Aspergillus oryzae)真菌蛋白酶抑制因子并命名为AmFPI-1。纯化的产物用双向电泳作了分析。SDS-PAGE电泳表明纯化的抑制因子分子量为10．4kDa。测出了该蛋白质N端的15个氨基酸残基序列，并依据这个序列合成了寡聚核苷酸，构建了印度柞蚕全长cDNA文库，用这些寡聚核苷酸和CDS作引物，通过PCR方法扩增了蛋白酶抑制因子的部分cDNA；用PCR扩增出的DNA作探针，筛选cDNA文库，获得了抑制因子cDNA克隆的序列。对序列分析表明：cDNA由543个核苷酸组成，包含一个315bp的ORF。编码一个105氨基酸残基的蛋白质，该序列与Bombyx mori的几个EST相似，N端氨基酸序列尤其与蜡蛾(Galleria mellonella)的诱导型丝氨酸蛋白酶抑制因子(ISPI-1)相似，表明两者存在高度的近缘关系。血液中存在的这种蛋白酶抑制因子可能在蚕体对抗微生物入侵的天然防御体系中扮演重要角色。     

HF酶制剂中蛋白酶活力的测定

ＨＦ酶制剂中蛋白酶活力的测定山东济宁市化工研究所赵德英，张景宏生物体内的大部分化学反应都是在酶的催化下进行的。要检查酶的存在及其含量，不能像检查化学药品那样直接用重量或体积来表示，而只能用它催化某一特定反应的能力即酶的活力来表示。因此，测定酶活力是研...     

水产品加工中蛋白酶的应用研究

蛋白酶是催化肽键水解的一群酶类,在水产品加工中应用广泛。对低值水产品以及水产副产品的综合加工中蛋白酶的应用进行了初步探讨,分析了如何更有效地开发利用蛋白酶资源。     

国内外关于鱼类胰蛋白酶的研究进展

胰蛋白酶是消化酶的一种，属于丝氨酸蛋白酶家族，对鱼类食物蛋白质的消化具有重要的生理作用。胰蛋白酶是一种肽链内切酶，对由碱性氨基酸（精氨酸、赖氨酸）的羧基与其他氨基酸的氨基所形成的键具有高度的专一性。此外还能催化由碱性氨基酸和羧基形成的酰胺键或酯键，其高度专一性仍表现为对碱性氨基酸一端的选择。胰蛋白酶对这些键的敏感性次序为：酯键〉酰胺键〉肽键。     

钙蛋白酶系统对猪肉嫩度影响的研究进展

嫩度是影响猪肉品质的重要性状之一,肉品的嫩度取决于肌肉结构及其相关蛋白质的变化程度。影响肌肉嫩度的因素有很多,其中钙蛋白酶系统在肌肉嫩化过程中发挥着重要作用。钙蛋白酶抑制蛋白是钙蛋白酶系统的成员之一,同时也为钙蛋白酶抑制蛋白基因的表达产物,钙蛋白酶抑制蛋白基因为调控猪肉品质的候选基因之一。作者对影响肌肉嫩度的因素、钙蛋白酶系统的结构和生理功能,以及钙蛋白酶系统和钙蛋白酶抑制蛋白基因型对猪肉嫩度的影响进行综述。     

饲用酸性蛋白酶研究及其应用

产业规模化养殖畜禽水产，尤其是养殖中的幼年饲养动物，因其消化器官分泌的酶系和酶量（内源酶）不足，对饲料蛋白质消化能力较差，极易引起消化不良、腹泻与消瘦等疾病。因此，国外营养学者很早就将酶制剂作为饲料添加剂加以应用，并证实在饲料中添加蛋白酶（外源性消化酶），有利于提高饲料中蛋白质的可消化性。在２０世纪５０年代，Jensen等（１９５７）和Fry等（１９５８）曾报道，添加粗制蛋白酶制剂到大麦日粮中，可显著提高鸡的生长速度和饲料转化率。经研究发现，酸性蛋白酶是其中一类较为重要的蛋白酶，常见的包括胃蛋白酶、凝乳…     

蛋白酶: 为后抗生素时代做好准备

人们通常根据酶所能分解的物质对其分类。蛋白酶具有分解蛋白质的能力。在替代性饲料原料使用量不断增加并试图减少生态足迹的时代,蛋白酶是一个令人关注的选择。     

绵羊瘤胃微生物胞外蛋白酶性质的研究

本试验测定了pH、温度和EDTA对纯化的绵羊的瘤胃微生物胞外蛋白酶活性的影响,并用一已知氨基酸排列顺序的肽段(由15个氨基酸组成)作为底物,进一步测定了蛋白酶的酶切位点。结果表明,(1)纯化蛋白酶的最适pH在6.0～6.5之间,最适温度为40℃左右。(2)不同浓度的EDTA(浓度分别为1,10,25,50,75和100mM)对蛋白酶活性没有影响,因而该酶属于丝氨酸蛋白酶类。(3)纯化蛋白酶是一种内肽酶,其酶切位点在组氨酸—酪氨酸(?)、天冬氨酸—丙氨酸(?)、亮氨酸—赖氨酸(?)和(或)缬氨酸—赖氨酸(?)相连的肽键。(4)胰蛋白酶和纯化的蛋白酶虽同属丝氨酸蛋白酶类,但前者对底物具有高度的专一性,后者对底物的专一性不强,这是瘤胃内饲料蛋白质强烈降解的主要原因之     

一些不宜生喂的饲料原料

1.大豆:包括黄豆和黑豆,生大豆及饼粕中含有3种有害物质,一是抗胰蛋白酶,它能抑制蛋白酶催化分解蛋白质;二是植物血球凝集素,能使血细胞减少、血红素含量降低;三是脲酶,会分解蛋白质和尿素生成氨,刺激消化道.这3种有害物质都可用加热、蒸煮、炒熟的办法进行脱毒.     

钙蛋白酶在肉嫩化过程中的作用

钙蛋白酶在宰后肉类成熟过程中通过降解肌肉蛋白质而提高肉嫩度.作者阐述了与肉嫩化有关钙蛋白酶的结构,在肉宰后成熟过程中的嫩化作用,宰后活性变化及影响钙蛋白酶活性的理化因素等.     

安全动物生产系统中饲料添加剂的应用与研究

（接上期）3.1复合酶制剂商品饲用酶主要以复合酶制剂为主,它是由两种或两种以上的单一酶复配或采用不同产酶菌株混合培养,或通过细胞融合获得所需酶系的高产菌株培养等技术进行生产而得.复合酶制剂包括蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶等多种活性酶,其中蛋白酶有碱性蛋白酶、中性蛋白酶和酸性蛋白酶三种.酸性蛋白酶能在酸性条件下发挥酶解作用,补充幼年畜禽、水产动物分泌蛋白消化酶的不足,提高幼年动物对蛋白质的消化吸收.综合各试验结果,添加复合饲用酶可提高日粮ME5%以上,提高CP消化率10%左右,饲料转化率得到明显改善.     

钙蛋白酶系统在肌肉生长和肉品嫩化方面的研究

钙蛋白酶系统主要由钙蛋白酶(calpain)及钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)组成,calpain是存在于细胞质中的依赖于Ca2+的中性蛋白酶,calpastatin是钙蛋白酶的内源抑制蛋白。近年的研究表明,calpain是细胞质中主要的蛋白水解酶,在肌原纤维蛋白降解中起着重要的作用。肌肉增长和宰后嫩度的变化与蛋白质水解程度密切相关。因此,钙蛋白酶系统的活性会影响畜禽肌肉增长和肉的嫩度。文中综述了钙蛋白酶系统各种酶的结构及其如何在肌肉生长和肉的嫩化中起作用。     

钙蛋白酶系统的结构、活性调节及其在骨骼肌生长中的作用

钙蛋白酶广泛存在于各组织 ,广泛表达的钙蛋白酶有两种 ,钙蛋白酶Ⅰ和钙蛋白酶Ⅱ ,它们激活所需的Ca2 + 浓度不同。新近还发现了几种组织特异表达的钙蛋白酶 (n—钙蛋白酶 )。钙蛋白酶抑制蛋白是钙蛋白酶的内源抑制蛋白。胞内钙蛋白酶的活性受钙蛋白酶抑制蛋白和Ca2 + 的调节 ,但具体过程还不清楚。大量研究表明钙蛋白酶系统可使完整的肌原纤维解装配成肌丝或多肽片段 ,从而引发占横纹肌大部分的肌原纤维蛋白质的降解。本文还讨论了影响骨骼肌钙蛋白酶系统的因素 ,包括动物的年龄 ,去势 ,营养水平 ,β—兴奋剂和遗传因素     

青占鱼蛋白水制备酶解鱼溶浆最佳工艺条件的研究

为研究制备酶解鱼溶浆的最佳工艺条件,实验以青占鱼蛋白水为原料,采用复合蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶进行水解,探讨酶解时间、酶解温度及酶用量对蛋白质水解的影响,并通过正交实验确定最佳酶解条件优化水解工艺。结果表明:复合蛋白酶为水解青占鱼蛋白水最适蛋白酶,最佳工艺条件为:温度50℃,酶用量0.3%(干物质),水解3 h,该条件下制备的酶解鱼溶浆酸溶蛋白含量为75.83 g/100 g(干物质),蛋白质水解效率达95.29%。     

山黧豆种子萌发特异性蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

蛋白酶在种子萌发过程中参与了储藏蛋白水解等多种生理过程,为植物的生长发育提供氮源并在种子萌发的生化机制中有重要作用。本研究采用明胶酶谱法检测了山黧豆种子在不同萌发时间的蛋白酶表达情况。利用盐析、离子交换层析等方法从萌发6d的山黧豆种子中分离纯化了蛋白酶并对其基本酶学性质进行了研究。结果表明,山黧豆种子萌发特异性蛋白酶造成了种子萌发过程中高分子质量蛋白质的水解和较低分子质量蛋白质的积累。对纯化蛋白酶进行总蛋白含量、酶活力、酶比活力等检测表明,山黧豆蛋白酶的纯化倍数为6.58,蛋白得率为7.97%。山黧豆蛋白酶对金属离子的耐受性较高,添加Fe³⁺可以引起蛋白酶活性的显著增加。此外,该蛋白酶对血红蛋白和明胶的反应活性最高,其最适反应pH和温度分别为pH7和60℃。本研究为进一步研究山黧豆种子萌发过程中蛋白质水解与其内源毒素β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸积累的相互关系奠定了基础。     

钙蛋白酶抑制蛋白对猪肉品质的影响

钙蛋白酶蛋白系统是影响肌肉生长和宰后肉嫩化的一个重要因素,主要由钙蛋白酶(μ-calpain和m-calpain)、钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)及骨骼肌特异性钙蛋白酶组成,钙蛋白酶抑制蛋白是一种内源性专一抑制钙蛋白酶活性的蛋白,参与了调控肌原纤维蛋白的降解并在其中发挥了关键作用。本文概述了钙蛋白酶抑制蛋白的结构、功能及其对肌肉蛋白质的增加、提高肉嫩度的作用。     

旋毛虫丝氨酸蛋白酶基因的克隆与分析

以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫3日龄成虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的阳性克隆进行测序,用分子生物学软件对所得cDNA序列进行了分析。序列分析结果显示,阳性克隆Zh68cDNA全长为1372bp,含有1个1287bp的完整的开放阅读框架,编码由429个氨基酸组成的多肽,理论分子质量为47．5ku,等电点为8．45。SMART分析表明,1～18位氨基酸为信号肽序列,37～277位氨基酸为典型的丝氨酸蛋白酶胰蛋白酶类结构域,其中His88、Asp142、Ser233为催化中心的3个主要氨基酸残基,78～80位氨基酸为N-糖基化位点（NCS）,另外还有6个保守的Cys形成二硫键。BLASTn同源性分析表明,与其他生物丝氨酸蛋白酶的基因序列无明显的同源性,为1个新的cDNA分子。BLASTp蛋白质同源性分析表明,与丝氨酸蛋白酶的同源性为30％左右。Southern—blot杂交表明,此基因在旋毛虫基因组中属于多基因家族,具有基因多态性。cDNA的PCR结果表明,此基因在旋毛虫肌幼虫、新生幼虫及成虫期均有表达。     

饲料中添加无花果蛋白酶的试验分析

在育肥猪饲料中添加不同比例的无花果蛋白酶,结果表明,按4%的比例添加在饲料中饲料报酬、日增重最好,3%、5%次之。无花果蛋白酶对饲料中蛋白质有效利用明显提高,并能获得较快的生长速度,同时对预防猪的消化道疾病也有明显效果。     

寄生虫金属蛋白酶研究进展

金属蛋白酶（Metalloproteinase）是虫体活性中心依赖于金属离子的一类蛋白酶，在寄生虫中其分布非常广泛，功能涉及寄生虫营养摄取、细胞分化、对宿主的入侵以及免疫逃避等许多方面，一些金属蛋白酶还具有比较强的免疫原性。寄生虫金属蛋白酶的功能和作用的阐明，将为寄生虫病的免疫诊断和治疗以及新型生物制剂的开发开辟新的思路。本文综述了寄生虫金属蛋白酶的最新研究进展。