临床分离鸡源性大肠杆菌外膜蛋白型的研究

[目的]了解禽致病性大肠杆菌分离株的遗传相关性。[方法]对分离自保定、秦皇岛和北京3个地区规模化养鸡场的病死鸡体内的38株大肠杆菌,采用超声波裂解和N-十二烷基肌胺酸钠进行外膜蛋白(Omp)提取,利用SDS-PAGE进行Omp分型。[结果]38株大肠杆菌共有3个Omp型,其中Omp-1型为O78、O88、O2、O18、O93、O766个血清型分离株所共有,Omp-Ⅱ型多为O76血清型分离株,Omp-Ⅲ型为O93、O78、O88、O2分离株所共有。这表明同一血清型的菌株可能属于完全不同的Omp型,而血清学上毫不相关的分离株之间却可具有相同的Omp型。[结论]该研究证实了同一血清型的分离株之间可发生遗传分化,而不同血清型的分离株之间也可具有不同程度的遗传相关性。     

16省市禽源性大肠杆菌O18和O78的外膜蛋白型

经对我国16个省市、自治区分离到的110个禽病原性大肠杆菌O18和O78分离株的外膜蛋白型(OMP型)的测定,结果表明,这些分离株共产生了4个OMP型,56个O18分离株可分为3个OMP型,54个O78分离株出现了4个OMP型,其OMP1～3型为二者所共有.     

鸡大肠杆菌(O78)1型菌毛单克隆抗体研制及对分离菌株的检测

将菌毛化的鸡大肠杆菌国内分离株GL7(O78)灭活后作为免疫原,经淋巴细胞杂交瘤技术,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,获得3E1、3H1、4A9和5G4共4株能稳定分泌1型菌毛抗体的杂交瘤细胞,它们均为IgG。免疫印迹试验结果表明:4株单抗均能同鸡大肠杆菌1型菌毛反应,识别分子质量为17~17.5 ku的菌毛蛋白。同时对鸡大肠杆菌表达1型菌毛的分离株进行检测,结果表明同一血清型或不同血清型间的鸡病原性大肠杆菌1型菌毛之间存在差异,O血清型不能完全体现菌株间的遗传相关性。     

肉种鸡大肠杆菌脑型病原的分离鉴定及防治试验

[目的]为了明确河南省新乡市某肉种鸡场种鸡的发病原因。[方法]利用常规培养基,对190日龄发病种鸡的脑组织进行细菌分离与培养、生化鉴定、血清型鉴定、回归试验和药敏试验,并研制鸡大肠杆菌疫苗。[结果]从病鸡脑中分离到10株大肠杆菌,经O血清型鉴定,表明O22和O53各为4株,O86为2株。通过病原分离鉴定,确定此次肉种鸡脑型大肠杆菌病的病原为O22、O53和O86,并以此研制出油乳剂灭活苗。药敏试验结果表明,分离菌株对氟苯尼考、硫酸新霉素敏感。选择敏感药物进行积极治疗,及时有效地控制了疫情。[结论]用分离菌株研制成油乳剂灭活苗,用于鸡大肠杆菌病的预防,效果十分理想。     

产色素温和气单胞菌的特性及其外膜蛋白型研究

[目的]研究产色素温和气单胞菌的致病机理。[方法]从不同来源的病鳖和病鳗体内分离到4株产生棕色色素温和气单胞菌,并采用平板法进行检测。[结果]对鲫鱼胸基部注射9×108cfu/ml菌悬液0.4ml后,BA10、BA15和BA16株对鲫鱼的致死率在33.3%以上,M1株对鲫鱼无致死性。采用超声波破碎-SI法提取外膜蛋白(OMPs),SDS-PAGE电泳结果显示,4株温和气单胞菌的外膜蛋白相对分子质量范围在20.1～66.2kDa,其中1个鳗鱼分离株M1株属OMP1型,由8条主要蛋白带组成;其余3个鳖源分离株BA10、BA15和BA16株属OMP2型,由9条主要蛋白带组成。[结论]产色素与致病性无相关;4株产色素温和气单胞菌之间存在共同抗原;产色素温和气单胞菌的OMP型可能与菌株来源有关。     

鸡大肠杆菌病病原的分离鉴定及药敏试验

从江苏省兴化市7个镇养鸡场的不同鸡群中采集鸡大肠杆菌病典型病料,经细菌学检验,分离出37株鸡大肠杆菌.结果表明:全部菌株对鸡均具有很强的致病作用.O因子血清鉴定发现9个血清型,分别为O157、O54、O119、O26、O14、O9、O8、O5、O53,其中O157型分离率为25/37,此外尚有2株暂未定型.各地分离菌株对14种药物的敏感性不同,但所有菌株对头孢唑啉、阿米卡星、卡那霉素等敏感.     

禽病原性大肠杆菌O2和O78外膜蛋白型的初步研究

从１１个禽败血症Ｏ２和Ｏ７８大肠杆菌分离株提取的主要外膜蛋白（ＯＭＰ），出现了３个ＯＭＰ型。其中６个Ｏ２分离株、５个Ｏ７８分离株可分别归为２个ＯＭＰ型，但有１个ＯＭＰ型为两者所共有，结果表明，从江苏地区所分离到的禽病原性大肠杆菌具有多样性的ＯＭＰ型，而且这２个血清型菌株中存在着共同的ＯＭＰ型。     

张家口地区仔猪白痢病原菌血清型检测及药敏试验

[目的]为临床上选用仔猪白痢疫苗与防治用药提供参考。[方法]从20个规模化猪场采集40份仔猪白痢病料,对致病性大肠杆菌进行分离和生化鉴定,分析其血清型并检测其耐药性。[结果]从40份病料中分离出36株大肠杆菌,其中32株为致病性大肠杆菌。分离菌对16种药物均有不同程度的耐药性,最高为100%,最低为6%。所有分离菌均表现出不同程度的多重耐药性,其中22株分离菌为4耐以上的菌株。32株致病菌分布在9个血清型中。[结论]张家口地区规模化猪场仔猪白痢病原菌的优势血清型为O8、O149、O141和O54,占已定型菌株的59.3%。对仔猪白痢病原菌敏感率较高的药物为头孢噻肟钠、诺氟沙星、丁胺卡那和新霉素。     

表达两种不同外膜蛋白的禽大肠杆菌融合菌株的构建

对从陕西省主要养鸡地区病死鸡及鸡胚中分离的致病性禽源大肠杆菌,用SDS-PAGE进行Omp分型。采用不同浓度溶菌酶作用不同时间裂解细胞壁,制备原生质体,在高渗平板上再生培养;在药敏试验的基础上,结合Omp型分析,选择具有交叉耐药且Omp型不同的菌株,利用PEG诱导进行原生质体融合,在含双抗的高渗平板上筛选融合株,对不同代次的融合株分别进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、血清型鉴定和Omp型分析。结果表明,所构建的融合菌株染色镜检和生化特性均符合大肠杆菌特征,75%融合子可凝集2亲本的O抗原,25%凝集其中1个亲本的O抗原;外膜蛋白型表现为1个或2个亲本的带型,但都有不同程度的增强。经稳定性检验证明其为遗传学上稳定的融合子。     

1、2型鸭疫里默氏菌外膜蛋白分析

采用超声波裂解和超速离心法提取30株鸭疫里默氏菌(Ra,1型和2型各15株)的外膜蛋白(OMP),经SDSPAGE凝胶电泳分析,以上2个血清型Ra的OMP均由13个蛋白多肽组成,其分子质量大小为20-100ku,相同血清型的电泳图谱相似,不同血清型的电泳图谱差异较大.经软件分析,1型RaOMP的主要条带有5条,其分子质量分别为95.0、87.7、73.2、55.4、49.8ku,占OMP总量的60.1%;2型RaOMP的主要条带有4条,其分子质量分别为95.5、53.1、50.0、22.4ku,占OMP总量的62.6%.2个血清型菌株有10个蛋白多肽的分子质量大小相似,但含量不同,另有3个蛋白多肽的分子质量差异明显.     

河南省鸡致病性大肠杆菌血清型、耐药性的研究

对河南省3个不同地区的38株鸡致病性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定、15种抗生素药物的耐药性试验。结果表明:河南省鸡致病性大肠杆菌的血清型种类众多,以O78,O1,O2为优势血清型,分别占定型菌株的35.29%,23.53%,17.65%;耐药图谱复杂,可以分为21种耐药类型,菌株耐药种类4~14种;不同来源的菌株其血清型、耐药性一般不同;相同来源的菌株,其耐药图谱相同或相似,但血清型有多种。     

鸡大肠杆菌病的病原分离鉴定与药敏试验研究

从河南7个县市的不同鸡群中采集鸡大肠杆菌病典型病料,经细菌学检验,分离出35株鸡大肠杆菌．动物试验结果表明：全部菌株对动物均具有很强的致病作用,多数菌株可使动物死亡率达100％．O因子血清鉴定发现8个血清型,分别为O78,O54,O119,O26,O14,O9,O8,O5,其中O78型分离率为25／35,占总数的71．4％,主要分布于许昌、项城、荥阳等地,其它血清型各占1株,此外尚有3株暂未定型．药敏试验结果表明,各地分离菌株对14种药物的敏感性不同,但所有菌株对头孢唑啉、阿米卡星、卡那霉素等敏感．     

产色素温和气单胞茵的特性及其外膜蛋白型研究

[目的]研究产色素温和气单胞茵的致病机理.[方法]从不同来源的病鳖和病鳗体内分离到4株产生棕色色素温和气单胞茵,并采用平板法进行检测.[结果]对鲫鱼胸基部注射9x108cfu/ml菌悬液0.4ml后,BA10、BA15和BA16株对鲫鱼的致死率在33.3%以上,Ml株对鲫鱼无致死性.采用超声波破碎-Sl法提取外膜蛋白(OMPs),SDS-PAGE电泳结果显示,4株温和气单胞茵的外膜蛋白相对分子质量范围在20.1～66.2 kDa,其中1个鳗鱼分离株Ml株属OMPI型,由8条主要蛋白带组成;其余3个鳖源分离株BA10、BA15和BA16株属OMP2型,由9条主要蛋白带组成.[结论]产色素与致病性无相关;4株产色素温和气单胞菌之间存在共同抗原;产色素温和气单胞菌的OMP型可能与茵株来源有关.     

鸡大肠杆菌O2/O74混合血清型菌株iss基因的克隆与序列测定

采用PCR方法对1株O2/O74混合血清型鸡大肠杆菌检测其iss基因的存在,并与1株O2血清型鸡大肠杆菌相比较.结果表明:鸡E.coli O2/O74混合血清型菌株携带iss基因,但采用目前通用的PCR方法并不能检测出iss基因,必须经套式PCR扩增才能检测出iss基因.O2/O74混合血清型菌株iss基因序列与已知禽大肠杆菌iss基因序列同源性为99.7%;与人源大肠杆菌iss基因进行比对,同源性为90.6%;与λ噬菌体bor 基因序列进行比对,同源性为88%,显示了此基因的保守性.     

禽病原性大肠杆菌O_2和O_（78）外膜蛋白型的初步研究

从１１个禽败血症Ｏ＿２和Ｏ＿（７８）大肠杆菌分离株提取的主要外膜蛋白（ＯＭＰ＿ｓ），出现了３个ＯＭＰ型。其中６个Ｏ＿２分离株、５个Ｏ＿（７８）分离株可分别归为２个ＯＭＰ型，但有１个ＯＭＰ型为两者所共有。结果表明，从江苏地区所分离到的禽病原性大肠杆菌具有多样性的ＯＭＰ型，而且这２个血清型菌株中存在着共同的ＯＭＰ型。     

河北省南部鸡肝周炎大肠杆菌的分离及血清型鉴定

通过对2003年3月～2008年4月,自河北省邯郸市、邢台市、石家庄市、衡水市、沧州市等发病鸡场呈现典型肝周炎病变的病死鸡肝脏分离的132株致病性大肠杆菌进行了生化特性测定,O抗原血清型鉴定及药敏试验。结果表明132株均符合大肠杆菌生化特征,试验用55种大肠杆菌单因子阳性血清进行O血清型鉴定,确定了103株O血清型,占分离菌株数的78.03%(103/132)。选取O1、O21、O65、O78、O93血清型共15株菌株(每一血清型选取3株不同来源的菌株)做药敏试验,证实多数菌株对丁胺卡那霉素高敏,对头孢曲松中敏,而对磺胺甲硝唑耐受。     

湖南西部地区鸡大肠杆菌血清型分布及耐药性分析

[目的]研究湖南西部地区鸡大肠杆菌的血清型分布及其耐药性。[方法]从湖南西部地区12县市12个养鸡场分离出147株鸡源大肠杆菌,进行血清型鉴定,并测定分离率高的血清型对抗菌药物的敏感性。[结果]在分离到的18个血清型中,O_6、O(22)、O_8和O_4血清型分离率最高,分别为17.7%、12.2%、11.6%和10.2%,为优势型。按NCCLS推荐的纸片扩散法测定了其对14种抗菌药物的敏感性。结果表明,细菌耐药性严重,以多药耐药为主,分离菌对四环素和萘啶酸的耐药率最高,分别为96.6%和85.0%,细菌对头孢噻肟、头孢噻吩、头孢曲松较为敏感,其耐药率在2.0%～8.2%。[结论]为有效防治湖南西部地区鸡大肠杆菌病提供了有价值的参考资料。     

健康鸡与病鸡大肠杆菌某些生物特性的分析

从健康肉鸡和蛋鸡分离到大肠杆菌180株，已鉴定的血清型为01，O2，O7，O8，O36，O78，O111，其中O2，O78为致病性大肠杆菌所常见的血清型；从大肠杆菌病病鸡分离到70株，已鉴定的血清型有O2，O78，O36。用9种抗生素进行了药敏试验。结果表明：绝大多数菌株对庆大霉素、痢特灵和卡那霉素有较高敏感性；一些菌株对氯霉素、链霉素和环丙沙星也有较高的敏感性；部分菌株对四环素和新诺明有耐药性。     

新疆部分地区犊牛腹泻病大肠杆菌的分离、鉴定与血清型分析

[目的]为新疆犊牛腹泻病的预防提供理论依据.犊牛腹泻多是1月龄以内的犊牛出现一种以消化不良、腹泻为主要症状的消化道疾病,是造成犊牛死亡的主要疾病之一,同时引起犊牛腹泻的细菌种类不同,细菌的血清型也可能存在着地区差异型.[方法]选取新疆四个地方犊牛腹泻的粪便69份,进行细菌常规分离鉴定和血清型鉴定分析.[结果]大肠杆菌99株,沙门氏菌45株,克雷伯菌39株及未鉴定菌株20株.同时对分离的99株大肠杆菌进行血清型诊断和分析多为:O55、O44、O86和O125.[结论]新疆部分地区引起犊牛腹泻的病原菌和大肠杆菌优势血清型均存在地域性差异,为该不同地区犊牛腹泻防治提供理论依据.     

鸡致病性大肠杆菌的质粒DNA指纹图谱分析

从山东省诸城地区6个集约化养鸡场的大肠杆菌感染鸡群的死鸡、毛蛋的心血中分离到32株细菌,经形态、培养特性及生化反应鉴定为大肠埃希氏杆菌(Escherichia.coli)简称大肠杆菌(E.coli)。对其作动物回归试验结果表明,全部为致病性大肠杆菌。从而证明从死鸡(毛蛋)心血中分离到的大肠杆菌与其致病性密切相关。将分离到的鸡大肠杆菌的14株优势血清型菌株进行了质粒DNA分析,通过碱裂解法小量提取质粒,然后对质粒进行了琼脂糖凝胶电泳分析,用hindⅢ限制性内切酶对质粒进行了酶切分析,结果表明:质粒的得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株的质粒图谱一般不同。将血清型和质粒图谱比较发现:同一血清型可以有不同的质粒图谱,不同血清型可以有相似的质粒图谱,血清型与质粒图谱没有直接的联系。本试验同一来源菌株的质粒指纹图谱相同、但它们的血清型不一致的现象可作为自然条件下同一质粒在不同血清型大肠杆菌中扩散转化的一个分子生物学依据。