牦牛大肠埃希氏菌病灭活疫苗的制备

用本实验室分离鉴定的致病性牦牛大肠埃希氏菌，按常规方法制备了4批氢氧化铝胶灭活疫苗。对牦牛大肠埃希氏菌的菌液培养、纯粹检验、活菌计数、灭活等进行了探索，并对用该菌研制成的疫苗进行了常规检验。结果4批灭活疫苗经无菌检验为阴性；经物理性状检验为：静置后上层是淡黄色的澄明液体，下层为灰白色沉淀，振荡后呈均匀混浊液；经牦牛安全检验结果为安全；经牦牛效力试验有效。牦牛大肠埃希氏菌病灭活疫苗为免疫预防该病打下了良好的基础。     

仔猪克雷伯氏菌病的病原分离鉴定及其疫苗制备

克雷伯氏杆菌既是一种人兽共患病病原．又是一种可引起多种动物患病的条件性致病菌。常可引起仔猪败血性克雷伯氏杆菌病，引起仔猪大量死亡，本文对临床采集的病料进行镜检、细菌分离培养、生化特性和致病性分析后分离出克雷伯氏菌；同时制备了自家氢氧化铝灭活苗，并对疫苗的安全性、保护性及免疫性进行了检测。结果表明：利用当地发病猪群分离的克雷伯氏杆菌制备的灭活苗性能良好．使用安全可靠。     

仔猪克雷伯氏菌病的病原分离鉴定及其疫苗制备

克雷伯氏杆菌既是一种人兽共患病病原又是一种可引起多种动物患病的条件性致病菌。常可引起仔猪败血性克雷伯氏杆菌病,引起仔猪大量死亡,本文对临床采集的病料进行镜检、细菌分离培养、生化特性和致病性分析后分离出克雷伯氏菌;同时制备了自家氢氧化铝灭活苗,并对疫苗的安全性、保护性及免疫性进行了检测。结果表明:利用当地发病猪群分离的克雷伯氏杆菌制备的灭活苗性能良好使用安全可靠。     

雏鸡克雷伯氏菌病的诊断及其氢氧化铝灭活疫苗的安全性检测

本文对临床采集的蛋鸡病料进行镜检、细菌分离培养、生化特性和致病性分析后, 确定为克雷伯氏菌感染; 同时制备了自家氢氧化铝灭活苗, 并对疫苗的安全性、保护性及免疫原性进行了检测, 结果表明: 利用当地发病鸡群分离的克雷伯氏杆菌制成的灭活苗性能良好, 使用安全可靠。     

羊源肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

本研究通过病死羊的肺脏中进行细菌分离、形态学观察、生化试验、致病性试验、药敏试验和16S rRNA扩增。结果从肺中分离到1株具有致病性的革兰氏阴性短杆菌。生化试验鉴定结果符合肺炎克雷伯氏菌的特征。分离株对头孢噻肟、阿米卡星、头孢曲松和链霉敏感外,对强力霉素等12药物具有耐药性。16S rRNA测序结果分析显示分离株与肺炎克雷伯氏菌的核苷酸同源性为97.1%~99.0%,在核苷酸进化树上与肺炎克雷伯氏菌属于同一分支。结果表明本研究从病死羊的肺脏中分离到1株肺炎克雷伯氏菌。     

上海地区生乳中肺炎克雷伯氏菌毒力基因和耐药性分析

为了解上海市生乳中肺炎克雷伯氏菌污染水平,分析本市乳制品中肺炎克雷伯氏菌污染风险来源及耐药情况,本研究对上海市乳品加工厂的生乳样本和养殖场环境样本进行了肺炎克雷伯氏菌计数和细菌分离鉴定,并对分离菌株开展毒力基因检测和耐药性分析。结果显示,上海市健康奶牛中肺炎克雷伯氏菌分离率为11.25%,远低于患乳房炎奶牛样品检出率;环境溯源样品中肺炎克雷伯氏菌检出率为21.3%,多在垫料及土壤中检出;对80家奶牛场未患乳房炎奶牛样品和47批次环境溯源样品细菌分离结果均表明,夏季肺炎克雷伯氏菌检出率显著高于冬季;本市分离的肺炎克雷伯氏菌,对β-内酰胺类和氨基糖苷类药物存在普遍耐药,且多重耐药性十分严重,耐药菌株占比达98.5%;分离菌株中毒力基因mrkD、fimH、wabG的检出率分别为88.89%、66.67%、33.33%,rmp A未检出。以上结果表明,夏季为肺炎克雷伯氏菌高发季节,且主要的外部污染风险为垫料和土壤,毒力基因检测表明,菌株不具备高致病性,多为呼吸道和消化道常在菌。通过本研究,提示居民不宜直接饮用生乳,养殖场应加强养殖环境、挤奶及生产运输环节的卫生管理,不滥用抗生素。     

奶牛乳房炎克雷伯氏菌的分离鉴定及药敏试验

为了深入了解我国部分地区奶牛乳房炎克雷伯氏菌的耐药情况,试验从内蒙古、河北、黑龙江、上海和山东等省市自治区的乳房炎病牛乳样中收集497份样品,分离克雷伯氏菌。采用染色镜检法、PCR法和微量肉汤稀释法鉴定克雷伯氏菌及检测其不同地点和不同时间的耐药性。结果表明:从497份样品中分离出46株克雷伯氏菌,分离率为9.26%;分离得到的克雷伯氏菌呈革兰氏染色阴性,为短粗状的杆菌;PCR扩增得到大小约为1 500 bp的目的片段;克雷伯氏菌对氨苄西林的耐药性最高,耐药率达到73.91%,其次为复方新诺明(45.65%),耐药率均高于40.00%,耐药率低于10.00%的药物有氧氟沙星(8.70%)、美罗培南(2.17%);河北与上海地区分离菌株耐药情况较严重,内蒙古地区分离菌株耐药情况相对较好;下半年克雷伯氏菌的多重耐药性较上半年严重。说明我国奶牛乳房炎克雷伯氏菌存在一定程度的耐药性,且不同地点、不同时间耐药性存在较大差异。     

MALDI-TOF MS方法快速鉴定临床分离的肺炎克雷伯氏菌

为快速鉴定从临床死亡羊肺脏中分离的一株革兰阴性短杆菌,通过基质激光解吸电离飞行时间质谱方法(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对其进行了鉴定,发现该分离菌为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种,表明MALDI-TOF MS方法达到了亚种水平的鉴定,鉴定分数为2.549。而VITEK2 compact传统生化方法和16SrRNA测序方法均鉴定为肺炎克雷伯氏菌,仅为种水平的鉴定。获得分离菌纯菌落后,MALDI-TOF MS方法仅需约30 min即可实现对该菌的有效鉴定,而VITEK2传统生化方法需要约4 h,16SrRNA测序方法则需要至少2 d。结果表明,MALDI-TOF MS方法能够快速、准确鉴定临床分离的肺炎克雷伯氏菌,从而为肺炎克雷伯氏菌的快速检测提供了技术支撑。     

河南驻马店地区猪源肺炎克雷伯氏菌分离菌株生物学特性

为了分析驻马店地区猪源肺炎克雷伯氏菌分离菌株生物学特性,从驻马店地区不同养殖场中采集患呼吸道疾病猪肺脏、鼻拭子等病料组织74份中分离得到了43株肺炎克雷伯氏菌。采用人工感染小鼠致病性试验、PCR方法和K-B药敏纸片分别检测49株肺炎克雷伯氏菌的致病性、血清型及耐药性。结果显示,30株肺炎克雷伯氏菌对小鼠具有很强的致病性;43株分离菌株以K5、K20为主要流行血清型,分别占分离菌株的37.2%、27.9%;43株分离菌株对氨苄西林、阿莫西林、大观霉素等7种药物耐药性较高,耐药率在51.2%以上,对其他药物的耐药率在18.6%~234.9%之间,且呈现多重耐药性,耐10、9种药物分离菌株最多,分别占分离菌株的25.6%、27.9%。本试验为该地区猪源肺炎克雷伯氏菌病的防治提供理论基础。     

4个动物园灵长类动物肠道克雷伯氏菌的分离鉴定与药敏试验

从4个动物园的非人灵长类动物中采集了214份粪便样品,经过细菌分离培养、染色镜检和生化试验等分离鉴定出88株克雷伯氏菌,分离率为41.12%。按照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的判定标准,对分离到的88株克雷伯氏菌进行了22种抗生素药物的药敏试验,结果表明,88株均表现出不同的程度的耐药性,其中,耐药程度最高的是羧苄青霉素(耐药率为95.45%);敏感度最高的是阿米卡星(敏感率为77.27%)。88株克雷伯氏菌分离株均有较为严重的多重耐药性,耐8～15种抗菌药物的菌株最多,有64株,占分离菌株的72.73%;耐10种以上抗菌药物的菌株有63株,占分离菌株的71.59%。从不同动物园分离的克雷伯氏菌对22种抗生素的耐药情况来看,在所调查的4个动物园中,重庆某动物园(CQ)和北京某动物园(BJ)的克雷伯氏菌分离株间耐药率无差异(P>0.05);上海某野生动物园(SHW)和上海某动物园(SHZ)的克雷伯氏菌分离株间耐药率无差异(P>0.05);而北京某动物园(BJ)与上海某野生动物园(SHW)和上海某动物园(SHZ)的克雷伯氏菌分离株相比,其耐药率差异均极显著(P<0.01);重庆某动物园(CQ)与上海某野生动物园(SHW)和上海某动物园(SHZ)的克雷伯氏菌分离株相比,其耐药率差异均极显著(P<0.01)。     

伴侣动物源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及毒力和耐药性分析

为探究南宁伴侣动物源肺炎克雷伯氏菌的毒力和耐药情况，本研究采集犬、猫粪便拭子，通过分离培养、形态学观察、药敏试验及PCR扩增16S rRNA、khe基因、毒力基因及耐药基因等方法对细菌特性进行分析。结果显示，分离的菌株中有4株能在麦康凯培养基上形成液状菌落，轻挑拉丝且镜检为短杆状革兰氏阴性菌，疑为肺炎克雷伯氏菌。16S rRNA测序结果显示，分离菌与肺炎克雷伯氏菌同源性达99%，同时肺炎克雷伯氏菌特异性基因（khe）阳性。其中，分离株GXKP-C14、GXKP-D15对大部分临床常用抗菌药物敏感，分离株GXKP-D1则表现出高水平多重耐药，分离株GXKP-D4耐药性稍低于GXKP-D1，对临床常用药氨苄西林、哌拉西林、头孢呋辛、四环素、多西环素、呋喃妥因、复方新诺明表现耐药，对头孢吡肟、美罗培南、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、链霉素、多黏菌素等敏感。部分菌株携带tet（A）、QnrS、bla_SHV、sul2、mcr-1等耐药基因和WabG毒力基因。本研究结果为犬、猫源肺炎克雷伯氏菌病的检测、诊断及治疗提供了试验依据。同时，黏菌素耐药基因mcr-1的检出将为多黏菌素的耐药性控制和合理使用提供参考。     

肺炎克雷伯氏菌强毒株的分离鉴定及16-23SrRNAITS序列分析

为确诊疑似仔猪肺炎克雷伯氏菌(K.pneumonia)感染,并研究其病原的致病性、耐药性、16-23SrRNA ITS系统进化特征,本研究从云南因肺炎、腹泻而大量死亡的仔猪中分离到1株革兰氏阴性短粗杆菌,命名为KP14013,对其进行生化鉴定、16SrRNA鉴定,研究其对小白鼠和仔猪的致病性,并对其16-23SrRNA ITS基因进行测序和遗传进化分析。结果显示,KP14013分离株生化特征与肺炎克雷伯氏菌相符,其16SrRNA与GenBank中23株肺炎克雷伯氏菌代表株之间的同源性均为99%,将KP14013鉴定为肺炎克雷伯氏菌。KP14013对小白鼠半数致死量(LD50)为3×101.8 CFU,腹腔注射3×108 CFU可使仔猪100%致死。16-23SrRNA ITS系统进化关系结果表明,KP14013与GenBank中收录的15株肺炎克雷伯氏菌形成进化树的一个分支,属于同一个亚群,它们之间的核苷酸同源性为98.4%~99.2%。本研究证实了肺炎克雷伯氏菌是该起仔猪腹泻大量死亡的病原;KP14013分离株为毒力极强菌株,具有多重耐药性,其16-23SrRNA ITS与GenBank中收录的肺炎克雷伯氏菌代表株之间核苷酸存在差异,可用于肺炎克雷伯氏菌菌株间的鉴别。     

猪源肺炎克雷伯氏菌耐药性及毒力基因分析

为了解猪群中猪源肺炎克雷伯氏菌耐药情况和毒力基因携带状况,2019年采集存栏生猪肛拭子样品125份、宰后生猪肉类样品50份,通过细菌分离培养、药敏试验以及PCR扩增16S rRNA、khe基因、耐药基因和毒力基因等方法对肺炎克雷伯氏菌特性进行分析。结果显示,从125份肛棉拭子样品、50份宰后生猪肉类样品中各分离得到32、4株肺炎克雷伯氏菌;药敏试验结果显示,分离的肺炎克雷伯氏菌对四环素耐药性最高(83.3%),其次是氯霉素(63.9%)。对36株分离菌进行耐药基因和毒力基因检测,发现携带耐药基因tet(A)的达30株、携带floR、mcr-1的分别为23、10株,且有23株菌同时携带tet(A)和floR基因,少部份菌株携带aadA1、blaTEM、blaCTX-M-1、blaOXA、qnrB、aac(6')-Ib-cr;携带毒力基因wabG的达26株、携带uge和fimH的25株、携带kfu的23株、携带aereobactin的7株,且有20株菌同时携带wabG、uge、fimH和kfu基因。结果表明,我国猪群中肺炎克雷伯氏菌检出率可能较高,菌株携带耐药基因及毒力基因较为集中,对部分抗生素耐药性较强。本研究为肺炎克雷伯氏菌的检测、诊断以及合理使用抗生素治疗提供了试验依据,同时也为猪源肺炎克雷伯氏菌防控提供了数据支撑。     

流产奶牛胎儿肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

从流产奶牛胎儿组织中分离到1株革兰氏阴性短杆菌,采用细菌分离纯化、生化试验、16S rRNA和16S～23S rRNA测序、药敏试验和小鼠致死性试验对其进行了鉴定。结果显示,该分离菌与GenBank中肺炎克雷伯氏菌16S rRNA和16S～23S rRNA基因序列一致性分别高达99%和96%,16S～23S rRNA基因被扩增出3条不同长度条带;该菌生化特性均符合肺炎克雷伯氏菌的生化反应特性;对头孢曲松、阿米卡星、多粘菌素等敏感,对多西环素、四环素、卡拉霉素等中度敏感,对青霉素、红霉素、米诺环素等耐药;对小鼠有很强的致病性。以上结果表明,该分离细菌为肺炎克雷伯氏菌。     

鲤鱼肺炎克雷伯氏菌分离与鉴定

初步了解肺炎克雷伯氏菌在鲤鱼鱼体中的发病机制并筛选防治药物,为预防和治疗该病提供准确实验数据。对发病鲤鱼进行细菌分离纯化,通过革兰氏染色反应,生理生化反应测定单菌落特性,进行细菌回归试验和药敏试验。对注射菌液后发病的鱼进行细菌再分离,得到革兰氏阴性菌,并且与七叶苷及其它17种指标反应呈阳性,与戊二酰-甘氨酸-精氨酸-AMC及其它11种指标反应呈阴性,注射该菌液48 h后鱼体出现与疑似病例相同病症。分离得到的细菌,按《伯杰氏细菌鉴定手册》进行鉴定,确定为肺炎克雷伯氏菌。药敏试验结果表明该菌对亚胺培南等6种药物高度敏感。本试验首次从鲤鱼体内分离出肺炎克雷伯氏菌,并得到6种高度敏感的药物,同时阐明了肺炎克雷伯氏菌在鲤鱼中发病症状。     

仔猪克雷伯氏菌病的病原分离鉴定

克雷伯氏杆菌既是一种人兽共患病病原，又是一种可引起多种动物患病的条件性致病菌。常可引起仔猪败血性克雷伯氏杆菌病，引起大量死亡。本文对临床采集的病料进行镜检，细菌分离培养、生化特性和致病性分析并分离出克雷伯氏菌。     

牛源肺炎克雷伯氏菌的分离和鉴定

牛源肺炎克雷伯氏菌的分离和鉴定陈兴生叶育桐（海南省定安县兽医诊断室，５７１２００）陈永林（中国兽药监察所）肺炎克雷伯氏菌为肠杆菌科的条件病原菌，能使人畜发生肺炎、子宫炎、乳房炎及其它化脓性炎症，甚至发生败血症，对人畜具有高度病原性［１，２］。我们在开...     

兔源肺炎克雷伯氏菌的生物学特性研究

为探究兔源肺炎克雷伯氏菌的生物学特性,本研究对从病兔中采集的病料进行细菌的分离培养、细菌特征性基因(Khe基因)的PCR检测、生化鉴定、药敏试验、致病性试验、毒力基因的扩增及序列分析对细菌分离株进行分析.结果显示麦康凯平板上生长有奶油状菌落且镜检为革兰氏阴性菌;Khe基因扩增为阳性;生化鉴定结果表明分离菌为肺炎克雷伯氏...     

致奶牛乳房炎肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及防治建议

肺炎克雷伯氏菌为革兰氏阴性菌,是重要的条件性致病菌和医源性感染菌之一,也是引起奶牛乳房炎的重要病原菌。本研究对30份奶牛乳房炎乳样进行了病原菌的分离鉴定,并对分离菌进行药物敏感试验;结果表明,本次共分离肺炎克雷伯氏菌3株,遗传进化树关系显示分离菌株KP1、KP3与CP031810株、CP031562株、CP032185株亲缘关系较近,分离株KP2则相对较远。药物敏感试验结果显示,3株分离株均对阿莫西林、头孢他啶、头孢曲松耐药,对链霉素、庆大霉素表现敏感,分离菌株KP1和KP3对青霉素表现中度敏感,菌株KP2则表现耐药。本研究为奶牛场针对该菌的防控提供了基础数据。     

四川地区牦牛源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了分析四川地区牦牛源肺炎克雷伯氏菌耐药性并确定其耐药基因的携带情况，本试验采集了四川地区不同养殖场患呼吸道疾病牦牛肺脏、咽拭子、鼻拭子共127份病料组织，分离得到了43株肺炎克雷伯氏菌，并采用微量肉汤稀释法结合PCR扩增法检测43株肺炎克雷伯氏菌的耐药性和耐药基因携带情况。结果表明：43株肺炎克雷伯氏菌对氨苄西林、阿莫西林、多西环素、磺胺间甲氧嘧啶4种药物耐药率较高，为65.12%~90.70%；对阿米卡星、氟苯尼考、多黏菌素B、大观霉素4种药物的耐药率在20.93%~48.84%之间；对头孢噻呋、恩诺沙星、环丙沙星3药物的耐药率在18.60%~25.58%之间；多数筛选分离得到的菌株均呈现出多重耐药性，耐9、10种药物的菌株最多，分别占分离菌株的23.3%和20.9%。通过使用PCR扩增法检测分离菌携带的耐药基因情况，结果表明：bla_TEM、bla_SHV、sul2、sul3、floR 5种耐药基因检出率较高，检出率在62.8%~69.8%之间；ant （3″）-Ⅰa、aph （3'）-Ⅱa、aac （6'）-Ⅰb、aacC2 4种耐药基因检出率较低，检出率在7.0%~20.9%；bla_CTX-M、Mcr-1、qnrA、qnrS、rmtB 5种耐药基因未检出。综上所述，本试验中分离得到肺炎克雷伯氏菌具有较强的耐药性并携带有较多的耐药基因，为了更好的促进四川省牦牛养殖产业的发展，应注意避免滥用抗生素并通过药敏试验对症下药。