PCR法进行胚胎性别鉴定的研究进展

通过胚胎性别鉴定,可控制家畜后代性别比例,获得巨大经济效益。早期胚胎性别鉴定的方法有,核型分析法,H-Y抗原法,X-连接酶检测法和PCR扩增法等。PCR法因其简单、快速、准确等优点,成为目前比较理想的胚胎性别鉴定方法。笔者对性别决定基因、PCR法胚胎性别鉴定的几个关键环节进行了综述,并对其前景进行了展望。     

山羊胚胎性别鉴定取样技术的研究

在进行山羊胚胎性别鉴定研究的同时，对山羊胚胎切割取样技术和切割胚胎的最佳阶段进行了研究，以确定最佳切割时间与取样细胞数，徒手有台切割方法取样，经１４０枚切割表明，以６￣８日龄胚为好，囊胚和孵出囊胚切割取样成功率最高（９０％），经２２枚取样后的胚胎移植受体，妊娠成功率达３６．４％。     

山羊胚胎性别鉴定取样技术的研究

在进行山羊胚胎性别鉴定研究的同时，对山羊胚胎切割取样技术和切割胚胎的最佳阶段进行了研究，以确定最佳切割时间与取样细胞数。徒手胚胎切割方法取样，经１４０枚切割表明，以６～８日龄胚为好。囊胚和孵出囊胚切割取样成功率最高（９０％），经２２枚取样后的胚胎移植受体，妊娠成功率达３６．４％。     

兔H-Y抗血清的制备和验证

本研究选取1.5~2.0 kg体重的新西兰兔2窝,提取同窝公兔睾丸H-Y抗原并测定蛋白浓度。采取2种不同的免疫方法,制备兔H-Y抗血清,经Western-blot技术检测兔睾丸H-Y抗原组分,应用ELISA法检测抗血清效价,其中5份抗血清中只有0830#产生较高的效价,达1:100以上。本试验结果为兔睾丸抗原组分的测定和兔H-Y抗血清的效价测定提供了一种新的方法。     

应用巢式及复合PCR对小鼠早期胚胎进行性别鉴定

根据小鼠SRY基因，设计并合成内外两对巢式PCR引物；同时。根据ZFY—ZFX基因的同源性，设计合成其共同的巢式PCR引物，对昆白小鼠组织DNA样品进行了性别鉴定。雄性样品可扩增262bp的SRY基因和137bp的ZFY—ZFX基因片断，而雌性样品只能扩增137bp的ZFY-ZFX基因片断，其鉴定结果与已知性别一致。将2-细胞、4-细胞、8-细胞和16细胞胚胎视为微量细胞样品进行PCR扩增，通过常规PCR与巢式PCR、复合PCR的比较。确立了巢式及复合PCR的扩增体系。结合核型分析和PCR法共鉴定21枚胚胎，其中雄性12枚，雌性8枚，鉴定准确率为95．2％。     

哺乳动物早期胚胎性别鉴定技术研究进展

本文就哺乳动物性别控制的主要途径、早期胚胎性别鉴定的主要方法等方面的研究进展及生产应用情况进行了详细论述,并阐明各技术的基本原理、存在的主要问题及今后发展方向.     

多重PCR鉴定水牛胚胎性别的研究

【目的】建立多重PCR鉴定水牛胚胎性别的技术体系,为下一步优化多重巢式PCR方法奠定基础。【方法】采用热裂解法、蛋白酶K＋二硫苏糖醇（DTT）法和吐温-20＋DTT法分别提取水牛卵裂球DNA,比较3种方法对G3PDH基因的扩增效果;同时设计1对检测引物和1对内标引物用于胚胎性别鉴定,提取胚胎DNA后进行多重PCR检测。【结果】吐温-20＋DTT法具有良好的裂解效果,其有效检出率为97.1%;而经吐温-20＋DTT法抽提的DNA用于多重PCR检测,其胚胎鉴定率达到100.0%。【结论】采用吐温-20＋DTT法处理水牛胚胎样品后再进行多重PCR性别鉴定可以简化操作步骤、提高鉴定效率,但样品数量不宜太少。     

初情期前枫泾小母猪超数排卵及其胚胎发育研究

２４头初情期前的枫泾小母猪以ＰＭＳＧ、ＨＣＧ进行超排处理,平均获得２３．４枚卵子,人工授精后２８￣５０ｈ超排的卵母细胞的受精率为９８．１％,受精卵发育至桑椹胚和囊胚的比例为８９．７％。采用外科手术将１８０枚受精卵移植至８头同期发情的枫泾母猪子宫,其中有５头妊娠,产仔４４头,胚胎移植妊娠率为６２．５％     

大豆花叶病毒（SMV）侵染大豆种胚的研究

采用大豆、健株正反交和病、健株自交的方法，以间接ＥＬＩＳＡ检测其后代种胚的带毒率。试验结果表明：♀（Ｓ）×、♀（Ｓ）×♂（Ｈ）两组合子代的种胚毒率较高，在结荚初期均超过６０％；♀（Ｈ）×♂（Ｓ）子代种胚带毒率较低，仅２５％左右；在自交组组合中未检测到病毒。说明胚珠在发育早期受到病毒的侵染可能是种子带毒的主要因素，而带毒的花粉使种胚受到的病毒侵染的作用较小。对大豆花前期病、健株子房组织进行免疫胶体金     

陆地棉×亚洲棉胚胎在培养条件下的发育研究

离体培养陆地棉与亚洲棉杂种胚珠,并以陆地棉自交为对照。观察结果表明,杂种胚胎表现出明显的生长优势,能顺利地通过胚胎发育的各个时期而达成熟胚。其原因是,胚乳游离核迅速解体,珠心组织也随之解体,而不形成胚乳细胞并使胚囊腔迅速扩展,使杂种胚有足够的营养源,并提供了足够的生长空间。自交胚胎的生育速度远不及杂种胚,发育受抑,尤其是球形胚到心形胚的时期较长。     

奶牛胚胎切割移植试验报告

以裸胚切割和透明带内切割两种方法,切割31枚奶牛早期胚胎,一分为二。将41枚半胚(其中38枚成对)分别移植给26头受体牛,6头移植怀孕,成功率为23.1%,移植有透明带的半胚和无透明带的裸半胚怀孕成功率都为25%。2半胚在同一透明带内(透明带内切割)的怀孕成功率为40%,而将裸半胚重新装入空透明带内的移植5头(受体全为黑白花奶牛),均未怀孕。桑椹胚分割成半胚移植怀孕成功率为21.1%,而早期囊胚则为28.6%。     

龙须草成熟胚囊结构和类型的观察

采用常规石蜡切片法,观察了龙须草成熟胚囊的结构和类型。结果表明,龙须草的成熟胚囊通常;是由靠近珠孔的１个４核胚囊分化而来;发育类型为体细胞无孢子生殖的大黍型;成熟胚囊由１个卵细胞,２个助细胞和含１个极核的中央细胞组成。     

金柑胚珠与胚囊发育的观察

对金柑胚珠与胚囊的发育进行了观察.当花蕾长0.25～0.3 cm 时,在胎座上形成胚珠原基.花蕾为0.55～0.6 cm 时,胚珠原基已发育成为倒生胚珠.胚珠为厚珠心,具2层珠被,胚囊母细胞经减数分裂以后形成四分体.四分体线形排列,近合点端的1个发育成胚囊,其余3个细胞退化.开花前先天发育成单核胚囊,开花后第1 d 进行第1次有丝分裂,开花5～6 d 多数胚囊发育成熟.开花后7～8 d 普遍出现幼胚.在开花后第2 d 即二核胚囊时,珠心内有多个大型活跃细胞,以后发育成无性胚.     

龙须草成熟胚囊结构和类型的观察

采用常规石蜡切片法, 观察了龙须草成熟胚囊的结构和类型。结果表明龙须 草的成熟胚囊通常是由靠近珠孔端的1个4核胚囊分化而来;发育类型为体细胞无孢子生殖的大黍型;成熟胚囊由1个卵细胞、2个助细胞和含1个极核的中央细胞组成。     

小麦未熟胚离体培养的研究——愈伤组织发生及器官建成

对小麦胚离体培养过程中愈伤组织发生及器官的形态建成进行了解剖学观察。结果表明,胚龄对愈伤组织发生的起始部位有明显影响。胚的各个部位对离体培养反应的敏感程度随胚龄的增长盾片形成愈伤组织的能力而减弱,3周龄至成熟胚的盾片不能产生愈伤组织,只起分泌α-淀粉酶、转化、吸收和运转养分的作用。同时还观察到输导系统分化完善之前存在传递细胞。不定根及不定芽的分化和形成,既存在器官发生途径,也存在胚状体途径。根、芽原基形成的先后顺序并不固定。     

银杉成熟胚离体培养及愈伤组织诱导的研究

将银杉种子的成熟胚剥离出来，在ＬＰ＋ＮＡＡ１．５×１０￣（－６）培养基中离休培养，成苗率为８７％。以无菌幼苗的子叶、下胚轴、顶芽作为外植体，在ＬＰ附加ＫＴ０．５，ＢＡ０．５，ＮＡＡｌｘ１０￣（－６）的培养基中诱导出愈伤组织。这一研究为银杉离体胚培养进行快速繁殖，作了有益的尝试。     

早熟葡萄种子培养和胚培养

结果表明:果实成熟前一周取样的种子培养后胚长1560μm,成熟期及成熟后一周取样的仅为953μm及830μm。培养基中蔗糖浓度在2—20％范围内浓度越低,效果越好。胚培养时培养基由加入GA,IA-A及IAA+KT均能促进胚的萌发,但对幼苗的生长有不同影响,在添加GA的培养基上幼苗生长正常。种子培养过程中胚不能自然萌发,种子培养后再结合胚培养可使胚萌发率达73.2％,不经种子培养而直接进行胚培养的,胚萌发率仅为5.6％。