HSP70家族的分类及基因结构与功能

热应激蛋白 (HSPs)作为分子伴侣在应激状态下占有重要地位 ,其中热应激蛋白70 (HSP70 )家族由于在应激反应中的敏感性 ,以及在临床实践中的各种作用而成为研究的热点。HSP70家族成员众多 ,它们在进化上高度保守 ,种属间同源性高 ,并且在正常细胞内和应激状态下均有表达。当进入应激状态时 ,机体通过对HSP70mRNA的优先翻译和增强其稳定性等调控机制的变化以适应需要。HSP70家族的功能表现在多方面 ,作为分子伴侣 ,HSP70家族在应激状态下帮助需要折叠的蛋白质正确折叠 ,加快正常蛋白质合成的恢复 ;在细胞保护方面 ,HSP70表达的增加可以缓解细胞所受伤害 ,增强机体对应激的抵抗力 ;同时 ,HSP70在抗细胞凋亡、抗氧化和免疫反应中也起着重要作用     

A-FABP基因5′侧翼区多态性及其与秦川牛肉用性状的关联分析

本研究通过对牛脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因5′侧翼区的1441bp序列进行SNPs检测,结果在转录起始位点上游-389bp处发现T→C突变,进而利用PCR-SSCP的方法在秦川牛、南阳牛、鲁西牛、夏南牛和郏县红牛共5个牛群体中进行个体基因型分析,结果发现3种基因型,分别命名为AA、AB和BB。χ2检验表明,除秦川牛外其它各品种在该基因座均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。基因型与秦川牛肉用性状的关联分析发现,AB基因型个体的宰前活体质量、胴体质量、含水率均显著低于AA和BB基因型个体(P0.05),AA和BB基因型个体之间差异不显著;BB基因型个体大理石花纹等级极显著优于AB基因型个体(P0.01),显著优于AA基因型个体(P0.05)。推测这一位点可能是影响牛肉大理石花纹及含水率的主效QTL或与之紧密连锁,可尝试做为肉牛肉质性状的候选分子标记。     

马生长激素基因的克隆与5′侧翼区序列分析

利用PCR技术首次扩增、克隆了6个具有不同生长速度马的生长激素基因。6个品种分别为:1个体格高大健壮的引入品种英纯血马,1个中等体高的中国驰名培育品种三河马,3个中等体高的蒙古马(乌审马、乌珠穆沁马、锡尼河马),1个体格矮小的广西矮马。马GH基因大小1923bp,包括了转录起始位点5′侧翼区序列250bp、1个可能的TATA框,组织特异性转录因子结合位点,全部5个外显子和4个内含子及部分3′侧翼区序列。分析6个品种马GH基因5′侧翼区序列并与乌审马序列相比,均在第210位出现由胞嘧啶C颠换为腺嘌呤A,在249位由胞嘧啶C颠换为鸟嘌呤G。6个品种之间的比较显示,马GH基因5′侧翼区具有极高的保守性,体格和体高具有显著差异的马品种间几乎未有差异。说明不同品种马生长速度和成年体重的差异,并非是其GH基因5′侧翼区变异造成的,马GH基因表达的差异可能受到内含子或3′侧翼区序列的影响。     

MyoG与Myf5基因与京海黄鸡生长性状的相关分析

以京海黄鸡为材料,采用PCR-SSCP方法检测MyoG和Myf5基因的单核苷酸多态性(SNPs),并分析基因型间的互作以及基因型对生长性状的遗传效应。结果表明,MyoG基因外显子3上存在一个T36C突变,形成了AA、AB和BB 3种基因型;Myf5基因外显子1上存在一个A1313G突变,形成了CC、CD和DD 3种基因型。对生长性状的最小二乘分析结果显示,BB型个体的2~16周龄均显著或极显著的高于AA型个体(P0.05或P0.01)。CD型个体仅在初生体质量上显著优于CC型个体。基因互作分析结果显示,互作效应对6、8周龄体质量的影响达到了极显著水平(P0.01)。本试验为京海黄鸡生长性状的标记辅助选择提供了参考依据。     

野桑蚕、家蚕LSP基因5′侧翼区的克隆与序列分析

根据已报道的家蚕朝日×东海的幼虫血清蛋白LSP基因序列设计1对引物,以野桑蚕、家蚕苏*菊×明*虎的基因组DNA为模板,分别克隆了野桑蚕、家蚕苏*菊×明*虎的LSP基因5′侧翼区,约1.9 kb,并进行了序列测定与分析.结果表明:克隆的野桑蚕、家蚕苏*菊×明*虎的LSP基因5′侧翼区涵盖了第一内含子、第一外显子、启动子区及其5′上游区;野桑蚕LSP基因5′侧翼区与朝日×东海LSP基因5′侧翼区的同源性达96.4%,其中第一内含子、第一外显子的同源性分别为91.6%,100%;家蚕苏*菊×明*虎的LSP基因5′侧翼区与朝日×东海LSP基因5′侧翼区的同源性达98.9%,其中第一内含子、第一外显子的同源性都为100%,核心启动子区具有典型的TATA盒,还有数种昆虫脂肪体内组织特异性表达基因的共有序列和推定的激素响应元件等功能元件;野桑蚕的LSP基因启动子的5′上游区(-304～-598 bp)与J139家蚕丝素轻链基因第一内含子区域(7 639～7 933 bp)的同源性达90.6%,-913～-1 383 bp为失活的部分水手转座子元件.     

鸡Camk2d基因外显子15的SNP发现、检测及与经济性状的关联分析

克隆了鸡Camk2d基因的部分片段并发现Camk2d基因第15外显子51bp处有一C→T碱基转换的沉默突变,该突变位点具有VspI酶切多态,通过PCR-RFLP技术对我国乌骨鸡、鹿苑鸡、固始鸡、白耳鸡、仙居鸡、斗鸡和大骨鸡等7个不同地方品种鸡进行了基因型检测。结果表明:在7个品种中存在3种基因型(CC、CT、TT),χ2检验显示在各品种间基因型存在不同差异。同时在藏鸡,隐性白羽鸡,杂交鸡(藏♂×隐♀)和75%血液藏鸡[藏♂×(藏♂×隐♀)♀]群体中进行了基因-性状关联分析,结果表明,该SNP位点与腹脂存在极显著相关(P<0.01),与肌肉pH值显著相关(P<0.05)。     

鸡PRR5L基因5'UTR多态性及其与脂肪性状、屠体性状的关联分析

试验旨在研究类富脯氨酸5（proline rich 5 like,PRR5L）基因遗传变异对鸡脂肪性状及屠体性状的影响。以矮脚黄鸡为研究对象,根据GenBank公布的鸡PRR5L基因全序列（登录号：XM_015287209.1）设计扩增引物,利用PCR直接测序技术检测PRR5L基因的5'UTR区域单核苷酸多态性（SNPs）,并用统计学方法分析其与鸡脂肪性状及屠体性状的关联性。结果发现,PRR5L基因5'UTR区域存在C480G、G514A和A579G 3个多态位点,均表现出3种基因型。χ²适合性检验结果发现,群体在G514A位点处于Hardy-Weinberg非平衡状态（P < 0.05）;在C480G和A579G位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P > 0.05）。基因型与性状关联分析结果显示,在脂肪性状方面,PRR5L基因3个多态位点各基因型间腹脂重、腹脂率和肌内脂肪含量差异均不显著（P > 0.05）;在屠体性状方面,在G514A位点处AG与GG基因型的胸肌重差异显著（P < 0.05）,其余指标差异均不显著（P > 0.05）。因此,可推断PRR5L基因5'UTR的G514A位点可能是一个影响鸡胸肌生长发育的位点,但该位点能否作为标识鸡屠体性状的分子标记辅助选择还需要进一步探究。     

扬州鹅PRL基因5'调控区SNP检测及其与产蛋性状的相关分析

催乳素(Prolactin,PRL)是影响禽类就巢性和产蛋性能的重要候选基因,本试验以扬州鹅为研究素材,采用PCR-SSCP方法检测催乳素基因5′调控区序列的SNP位点并分析其与扬州鹅产蛋性状的相关性,以期为扬州鹅产蛋性状标记的辅助选择提供一定的理论依据。结果表明,在试验群体中检测到CC、DD两种基因型,未检测到CD型;对不同基因型个体测序分析发现,在外显子1上游﹢11处发现了一个G→T突变;等位基因C和D的频率分别为0.7692和0.2308。供试群体在5′调控区检测位点上处于Hardy-Weinberg不平衡状态。PRL基因5′调控区的碱基突变对扬州鹅的产蛋量和开产日龄有极显著的影响,CC型群体在一个产蛋周期内的平均产蛋量极显著高于DD型(P0.01);开产日龄也是CC型极显著早于DD型(P0.01)。     

本地毛形线虫HSP70基因的克隆与序列分析

根据GenBank中已发表的布氏旋毛虫HSP70基因序列设计了1对引物，用Trizol法从本地毛形线虫肌幼虫虫体中提取总RNA，用RT-PCR方法扩增了HSP70基因，将目的基因克隆至pMD18-T载体，转化大肠杆菌DH5α。重组质粒用PCR、限制性内切酶BarnHⅠ和HindⅢ进行单、双酶切鉴定。测序结果表明，成功克隆了本地毛形线虫HSP70基因。序列分析表明，HSP70基因比较保守，不同物种之间氨基酸的同源性在40％～80％。与布氏旋毛虫HSP70序列相比，CDS区多出9个碱基，但核苷酸序列和氨基酸同源性分别为98%和94％，存在1个糖基化位点和1个潜在的信号肽位点。     

微卫星标记与固始鸡及部分外来鸡种体型性状及屠体性状的相关分析

选择与鸡体型参数和屠体性状紧密相关的10个微卫星位点,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析其与固始鸡5个系和4个非固始鸡品系共9个群体体型性状及屠体性状相关关系。结果表明:检测到4个标记(MCW0295、MCW0006、MCW0185、ADL0192)与5个性状(体重、胸宽、胸深、胫长、体斜长)存在显著相关,在各个群体中,标记MCW0295与体重相关比较显著,标记ADL0192与体斜长相关。在固始鸡群体中,标记MCW0006和MCW0185与体型性状各个性状相关比较显著。检测到3个标记分别与3个屠体性状存在不同程度的相关:在固始鸡原种、父母代中,标记MCW0295与胸肌率相关。在固始鸡原种和商品代中,标记MCW0006与全净膛率相关。在艾维茵鸡中,MCW0294与腿肌率相关。说明这些标记位点可能是控制特定性状的主效基因,或与控制性状的主效基因连锁。     

鸡钙蛋白酶抑制蛋白基因多态性及其与肉质性状的相关性

为探讨钙蛋白酶抑制蛋白(Calpastatin,CAST)基因作为影响鸡肉质性状候选基因的可能性,本研究以8个优质鸡新品系为试验材料,采用PCR-SSCP方法对CAST基因的部分编码区进行单核苷酸多态性(SNPs)检测。结果发现了CAST基因1个多态性位点(G→T),使试验鸡群表现出AA、BB和AB这3种基因型。利用SAS(8.01)软件统计分析了3种基因型与优质鸡肉质性状的相关性,结果表明,CAST基因的多态性对鸡肌内脂肪含量、肌纤维密度和直径有显著的影响(P0.05),对其他肉质性状无显著影响(P0.05);推测CAST基因可能对鸡肉质性状具有很大的影响或与控制肉质性状的主基因连锁。     

水貂生长激素基因多态性与体质量性状的关联分析

以水貂的生长激素基因(GH)作为候选基因,采用单链构象多态性和DNA测序的方法检测GH基因单核苷酸多态性(SNPs),并针对该群体特点建立合适的统计分析模型,探讨GH基因多态性与体质量性状的相关性。结果表明,C→A突变产生的3种基因型间的水貂个体体质量存在一定的差异(P0.05),BB基因型个体与AA基因型个体之间有一定的差异(P0.05)。T→A和C→G突变没有导致氨基酸的变化,DD基因型个体体质量平均值要高于CC基因型,但产生的3种基因型对水貂体质量的影响没有显著性差异(P0.05)。统计各基因型之间的组合给水貂体质量带来的影响时,发现不同基因型之间的组合对所检测水貂样本的体质量有影响(P0.05)。     

Association of single nucleotide polymorphism of chicken uncoupling protein gene with muscle and fatness traits

Uncoupling proteins (UCPs) are in the mitochondrial inner membrane and belong to the transporter family. The biological function of UCPs is regulating discharge of proton gradient generated by the respiratory chain. As a result, the production of ATP is diminished, and dissipative heat is yielded. The present study was designed to investigate the association of UCP gene with chicken growth and body composition traits. The ninth generation of the broiler lines divergently selected for abdominal fat was used as a research population. Primers for UCP gene were designed from chicken genomic sequence. A single-nucleotide polymorphism, in the exon3 (T1316C) of UCP gene was detected by the polymerase chain reaction and restriction fragment polymorphism (PCR-RFLP) method. The UCP polymorphism was associated with muscle and fatness traits, such as pectoralis minor weight and abdominal fat weight. The results indicated that UCP gene could be a candidate locus or linked to a major gene which affects muscle and fatness traits in chicken.     

鸡1号染色体114701476-115068911区域与生长性状的关联分析

拷贝数变异（CNVs）作为遗传变异的重要来源,在表型变异和进化过程中起着重要的作用。本试验以华南农业大学杏花×隐性白洛克全同胞资源家系为材料,利用SNP Beadchip芯片的基因分型结果分析1号染色体114701476-115068911区域对鸡生长性状的影响。结果显示,此区域内部GGaluGA038110与GGaluGA038117这2位点处于强烈的连锁不平衡,GGaluGA038239与单胺氧化酶A基因内部GGaluGA038203也存在连锁不平衡关系,且GGaluGA038239、GGaluGA038110与GGaluGA038117这3个SNP位点与鸡生长性状显著相关,表明1号染色体114701476-115068911区域在鸡的生长过程中起着重要的作用。     

如皋鸡NLRC5基因外显子8多态性及其与部分免疫指标的关联分析

采用PCR-SSCP技术对中国地方鸡种如皋鸡NLRC5基因外显子8多态性进行检测,结果检测到AA和AB2种基因型,基因型频率分别为0.867 9和0.132 1,X2适合性检验表明如皋鸡NLRC5基因外显子8等位基因的分布处于Hardy-Weinberg平衡状态。序列分析结果显示,NLRC5基因外显子8存在G43A同义突变。测定部分免疫指标,分析不同周龄如皋鸡个体免疫指标的差异以及12周龄如皋鸡2种基因型与免疫指标间的关联性,结果表明：IgM含量和IgG含量变化比较一致,随周龄不断降低;2周龄IgM含量显著高于4、6、8、10、12周龄（P〈0.05）;12、10、8周龄IgG含量极显著低于2、4、6周龄（P〈0.01）;淋巴细胞转化率在12周龄达到最大值为33.742%,极显著高于其他周龄（P〈0.01）;12周龄AA型个体的IgM和IgG含量、淋巴细胞转化率均高于AB型个体,但差异并不显著（P〉0.05）。     

Study on association of single nucleotide polymorphism of CAPN1 gene with muscle fibre and carcass traits in quality chicken populations

This study was aimed at investigating the effect of the calpain 1 (CAPN1) gene on carcass and meat quality traits in eight meat-type chicken populations, including five pure lines (developed from Chinese local breeds) and three cross-breeds. Primer pairs for the Coding Sequence (CDS) region in CAPN1 were designed from the chicken genomic sequence database. Polymorphisms were detected by polymerase chain reaction (PCR)-Single Strand Conformation Polymorphism (SSCP) and DNA sequencing. Three single nucleotide polymorphisms (SNP; C2546T, G3535A and C7198A) were detected among individuals in each population. The associations of their haplotypes (H1 = CGA, H2 = CGC, H3 = CAA, H4 = CAC, H5 = TGA and H7 = TAA) with chicken breast muscle fibre and carcass traits were analysed. Results showed that the haplotypes were associated with live weight (LW), carcass weight (CW), breast muscle weight (BMW) and leg muscle weight (LMW) (p < 0.05), and were also related to eviscerated percentage (%EP) and breast muscle fibre density (p < 0.01). H1H3 haplotype was dominant for LW, CW and BMW; H1H5 haplotype was dominant for EP; H3H4 haplotype was dominant for LMW and H1H1 haplotype was dominant for BFD. It was concluded that the CAPN1 gene may be a major gene affecting meat quality traits of chicken or it is linked with the major gene. H1H3, H1H5 and H3H4 were the most advantageous haplotypes for carcass traits whereas H1H1 was the positive haplotype for breast muscle fibre trait.     

热应激绍兴鸭不同组织HSP70基因mRNA表达研究

研究蛋鸭热应激条件下不同组织中热休克蛋白70(HSP70)基因mRNA表达规律,为揭示蛋鸭热应激反应机理提供参考。60只绍兴蛋鸭25℃饲养20d,其中30只进行40℃热应激处理1h,采取荧光定量PCR方法分别测定不同组织中HSP70mRNA的表达水平。试验组与对照组相比,肝脏、脾脏和胰腺组织HSP70mRNA表达差异不显著,其他6种组织HSP70基因表达量均有不同程度的增加,试验组心脏、腿肌、垂体、下丘脑、胸肌、肾脏中HSP70基因表达量分别高于对照组3.6倍、2.8倍、2.7倍、2.4倍、2.2倍和1.57倍。