脂质体包被鸡IL-18可增强新城疫活疫苗的免疫效果

首次将重组鸡白细胞介素18(mChIL-18)用脂质体包被,将不同浓度的mChIL-18脂质体联合新城疫疫苗对鸡群进行免疫,观察其对新城疫疫苗的免疫增强作用。1日龄SPF鸡分为6组,分别为空白对照组、单纯疫苗组、新城疫疫苗+0.2mL mChIL-18组、新城疫疫苗+0.1mL mChIL-18组、新城疫疫苗+0.3mL mChIL-18组和新城疫疫苗+空载体对照组。所有免疫组鸡于7日龄免疫,免疫后每周抽取外周血及外周抗凝血,应用血凝抑制试验和流式细胞仪来检测免疫鸡的HI抗体水平及CD4+和CD8+T淋巴细胞的变化情况。并于最后一次采血后,对各组试验鸡应用F48E9标准强毒进行攻击(100ELD50.只-1)。结果表明mChIL-18脂质体的最佳剂量为0.2mL.只-1,其不仅能够显著增强机体的细胞免疫和体液免疫,而且还可以明显提高新城疫疫苗的保护率。     

复方免疫活性因子对新城疫疫苗免疫增强作用的研究

本研究对健康雏鸡7日龄免疫前12小时按照分组分别使用免疫活性因子和生理盐水,然后以新城疫Ⅳ系弱毒苗点眼滴鼻,分别在新城疫Ⅳ系冻干苗免疫后7、14、21d,心脏采血,采用HI法检测新城疫抗体水平。结果表明,应用免疫活性因子及新城疫疫苗后各试验组7d抗体水平明显升高,14及21d抗体水平大大高于单用ND疫苗组,经t值检验,试验组与对照组组间差异显著(P<0.05)熏试验组间差异不显著(P>0.05)。研究结果提示免疫活性因子是一种很有前途的生物免疫增强剂。     

鸡IL-18真核表达载体的构建及其对新城疫疫苗免疫增强作用的研究

利用首次从鸡新城疫疫苗接种的鸡胚脾细胞中扩增出的鸡IL 18 全基因,构建IL 18 真核表达载体(pcDNA3 IL18),并观察其对新城疫疫苗的免疫增强作用。结果表明,同时接种pcDNA3 IL18 质粒和活疫苗的免疫鸡在接种后35 d内,特别是15 d之后所产生的HI抗体效价和T、B淋巴细胞增殖反应均高于单纯疫苗免疫组及pcDNA3 空白质粒和疫苗联合免疫组。其中,HI抗体效价在15 d 时差异显著(P<0 05),在30 和35 d时差异极显著(P<0 01); T淋巴细胞增殖反应在15 d后均表现为差异显著(P<0 05〉或极显著(P<0 01);而单纯疫苗组与空白质粒和疫苗联合免疫组之间的各测定指标则无明显的差异(P>0 05)。在35 d时进行攻毒, pcDNA3 IL18和疫苗联合免疫组的保护率为83.3%,而单纯疫苗免疫组、空白质粒和疫苗联合免疫组鸡的保护率则分别只有61.5%和66.7%。说明该pcDNA3 IL18真核表达质粒在鸡体内得到了表达,表达产物不仅能够显著增强新城疫疫苗所诱导的细胞免疫和体液免疫反应,而且还可以明显提高疫苗的保护率。     

鸡白细胞介素18成熟蛋白基因真核表达质粒的构建及其在鸡胚成纤维细胞中的表达

通过PCR方法自含鸡白细胞介素18（Chicken interleukin-18，ChlL-18）成熟蛋白（mature ChIL-18，mChIL18）基因的克隆质粒中扩增mChlL-18基因，并将其克隆到真核表达载体pcDNA3．1／V5-His-TOPO中。阳性克隆鉴定后，在脂质体作用下转染鸡胚成纤维细胞（CEF），通过问接免疫荧光试验（IFA）检测到了mChIL-18在CEF中的表达。     

鸡胚接种鸡白介素18重组质粒对IBDVDNA疫苗免疫增强作用的研究

用鸡白细胞介素18(ChIL-18)重组质粒(pCI-ChIL-18)接种18胚龄SPF鸡胚,利用适时荧光定量PCR方法对试验鸡不同时间点的动态变化进行检测.检测结果表明,胚胎接种pCI-ChIL-18使ChIL-18在鸡血液中早期持续高浓度存在,能促进鸡脾脏和法氏囊中ChIL-18基因的大量表达.用pCI-ChIL-18与传染性法氏囊病病毒(IBDV)多聚蛋白DNA疫苗分别免疫18胚龄SPF鸡胚,设1日龄雏鸡肌肉免疫对照组和空白对照组,2周龄时二免,6周龄时用IBDV标准强毒株BC6/85攻击.结果表明,胚胎免疫pCI-ChIL-18能显著促进试验鸡T、B淋巴细胞的早期增殖反应,增强IBDV多聚蛋白DNA疫苗诱导的早期抗体水平及其对强毒攻击的保护力.并进一步证明胚胎免疫pCI-ChIL-18对IBDV多聚蛋白DNA疫苗的早期免疫效果具有显著的增强作用(P相似文献   

CpG-DNA对AA肉鸡新城疫疫苗免疫增强效果的研究

为探讨CpG-DNA对AA肉鸡新城疫疫苗的免疫增强作用,本研究分别将生理盐水、新城疫Ⅳ系抗原(DNV-IV)、白油加NDV-Ⅳ、白油加NDV-Ⅳ加CpG-DNA四组试剂接种一定数量的随机分组的AA肉鸡体内,观察不同日龄的AA肉鸡免疫器官指数、细胞因子产生及抗体的分泌情况。结果显示,新城疫Ⅳ系疫苗在白油存在的条件下,对AA肉鸡免疫增强作用效果较为明显,而CpG-DNA有进一步增强该效果的作用。试验结果表明,CpG-DNA可以作为潜在的免疫佐剂应用于疫苗生产。     

ATRA对新城疫疫苗的体液免疫增强作用的研究

为了研究全反式维甲酸(ATRA)对新城疫疫苗的体液免疫增强效果,本试验选取1日龄AA肉鸡作为研究对象,低剂量组和高剂量组分别灌服1μmol/kg体重和5μmol/kg体重ATRA,在7日龄和28日龄时对药物对照组、低剂量组、高剂量组通过滴鼻、点眼的方法免疫新城疫疫苗。在7、14、21、28、35、42日龄和49日龄,每组随机取7只鸡,称重,采集胸腺、脾脏、腔上囊和血清,计算胸腺、脾脏和腔上囊免疫器官指数,利用血凝抑制(HI)试验检测血清中新城疫抗体效价。结果表明,ATRA可以促进雏鸡免疫器官生长,提高雏鸡免疫器官指数和新城疫抗体效价,表明ATRA可以增强雏鸡的体液免疫应答,且5μg/kg体重剂量ATRA对新城疫疫苗的体液免疫增强效果更显著。     

缓释复方免疫增强剂对鸡新城疫疫苗免疫增强效果研究

鸡新城疫是影响养鸡业的一种常见传染病,近年来由于母源抗体参差不齐,病原结构变异,血清型增多,多种类型病原混合感染,一些新的疾病引起免疫抑制,非典型性新城疫增加,从而造成疫苗免疫效果不佳,甚至发生免疫失败.     

Improved immunogenicity of Newcastle disease virus inactivated vaccine following DNA vaccination using Newcastle disease virus hemagglutinin-neuraminidase and fusion protein genes

The present study describes the development of DNA vaccines using the hemagglutinin-neuraminidase (HN) and fusion (F) genes from AF2240 Newcastle disease virus strain, namely pIRES/HN, pIRES/F and pIRES-F/HN. Transient expression analysis of the constructs in Vero cells revealed the successful expression of gene inserts in vitro. Moreover, in vivo experiments showed that single vaccination with the constructed plasmid DNA (pDNA) followed by a boost with inactivated vaccine induced a significant difference in enzyme-linked immunosorbent assay antibody levels (p < 0.05) elicited by either pIRES/F, pIRES/F+ pIRES/HN or pIRES-F/HN at one week after the booster in specific pathogen free chickens when compared with the inactivated vaccine alone. Taken together, these results indicated that recombinant pDNA could be used to increase the efficacy of the inactivated vaccine immunization procedure.     

新城疫浓缩灭活疫苗的初步研究

以10^3.0、10^4.0、10^5.0 EID503个不同剂量接种非免疫鸡胚,收获鸡胚液,病毒含量测定结果显示,以10^3.0-10^4.0～EID50剂量接种的鸡胚收获的抗原含量高。用该优化方法繁殖了一批新城疫抗原,采用截留分子量为100kD的浓缩滤膜对新城疫抗原进行浓缩,对不同浓缩倍数的新城疫抗原制备疫苗进行了免疫效力试验。结果表明,以新城疫3倍浓缩抗原制备疫苗,以5μL剂量（现有相关产品效力检验的1／4剂量）免疫SPF鸡,即可达到现有同类产品的效力检验质量标准,高抗体水平至少可以维持35d。本研究为进一步研制新城疫灭活浓缩疫苗用于低剂量免疫肉鸡提供了基础。     

Co-expression of EtMic2 protein and chicken interleukin-18 for DNA vaccine against chicken coccidiosis

In the present study, a naked EtMIC2 DNA vaccine, a ChIL-18 expression vector and a EtMIC2 and ChIL-18 co-expression DNA vaccine were constructed and their protective efficacies against homologous challenge were compared and evaluated by examining the body weight gain, oocyst shedding, cecal lesion, ACI as well as specific anti-EtMic2 antibody level, the proliferation ability and percentages of CD4+ and CD8+ of splenocytes. The results showed the naked EtMIC2 DNA vaccine could increase the weight gain and decrease the oocyst shedding, but could not alleviate the cecal lesion of immunized chickens compared to unimmunized chickens. Chickens immunized with the co-expression vector pVAX1-MIC2-IL-18 exhibited much improved immune protection against challenge compared to chickens immunized with naked EtMIC2 DNA vaccine, or with naked EtMIC2 DNA vaccine and ChIL-18 expression vector applied separately. These results suggest that the co-expression of ChIL-18 with EtMic2 together could significantly improve the immune protection of the EtMic2 protein.     

缓释复方免疫增强剂对鸡新城疫疫苗免疫增强效果研究

将40只10日龄海兰褐蛋雏鸡，随机分成试验组和对照组，每组20只，分别皮下注射ND-La Sota弱毒疫苗0．2ml／只。同时给试验组雏鸡投服缓释复方免疫增强剂1粒／只，对照组不投服。在免疫前、免疫后10、20、30和40d，每组随机取10只鸡采血，测定ND-HI抗体效价、T淋巴细胞ERFC形成率和ANAE阳性率。结果免疫后10、20、30、40d，试验组与对照组比较，鸡ND-HI抗体效价、T淋巴细胞ERFC形成率和ANAE阳性率差异极显著（P〈0．01）或显著（P〈0．05），三项指标具有相同的消涨趋势，表明缓释复方免疫增强剂可以提高鸡的体液免疫功能和细胞免疫功能。     

鞭毛蛋白及鸡GM-CSF重组新城疫病毒对鸡的免疫增强作用

为评价鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白(FliC)以及鸡GM-CSF(chGM-CSF)对新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗的免疫增强效果,本实验通过PCR扩增fliC,并合成chGM-CSF编码基因,分别构建重组质粒pBrClone30-fliC和pBrClone30-GM-CSF,拯救获得重组病毒rClone30-fliC和rClone30-GM-CSF。RT-PCR和ELISA检测结果表明:fliC和chGM-CSF基因正确插入重组病毒,并获得稳定表达;重组病毒免疫7 d后重组NDV HI抗体效价检测显示,实验组平均HI效价分别达到4.5 log2和4.8 log2,而r Clone30组和空白组HI效价仅为3 log2和1 log2;免疫7 d后攻毒,空白组SPF鸡均死亡,rClone30组有两例发病,实验组SPF鸡全部存活并且无任何临床症状。本研究结果表明,FliC和chGM-CSF作为佐剂能够有效提高弱毒疫苗的免疫效果。     

鸡新城疫（ND）各种免疫程序的测定

本试验进行了三批鸡的免疫研究。第一批试验检测不同类型新城疫疫苗在不同母源抗体水平（高和低）的鸡体上的免疫效果。结果显示,在高母源抗体时免疫,Ｖ４组和油乳剂灭活苗级抗体水平表现较低,而在低母源抗体时免疫,几种疫苗的抗体水平上升得很快,特别Ｌａｓｏｔａ－克隆３０组最明显,而油乳剂灭活苗组的抗体水平保持最长。根据此结果而制定了不同的免疫程序,进行了第二、第三批免疫试验,并分别在４５天龄及７０天龄时进行强     

Protection of chickens from Newcastle disease with a recombinant baculovirus subunit vaccine expressing the fusion and hemagglutinin-neuraminidase proteins

Recombinant baculoviruses containing the fusion (F) and hemagglutinin-neuraminidase (HN) glycoprotein gene of the viscerotropic velogenic (vv) Newcastle disease virus (NDV) isolate, Kr-005/00, and a lentogenic La Sota strain of the NDV were constructed in an attempt to develop an effective subunit vaccine to the recent epizootic vvNDV. The level of protection was determined by evaluating the clinical signs, mortality, and virus shedding from the oropharynx and cloaca of chickens after a challenge with vvNDV Kr-005/00. The recombinant ND F (rND F) and recombinant HN (rND HN) glycoproteins derived from the velogenic strain provided good protection against the clinical signs and mortality, showing a 0.00 PI value and 100% protection after a booster immunization. On the other hand, the combined rND F + HN glycoprotein derived from the velogenic strain induced complete protection (0.00 PI value and 100% protection) and significantly reduced the amount of virus shedding even after a single immunization. The rND F and rND HN glycoproteins derived from the velogenic strain had a slightly, but not significantly, greater protective effect than the lentogenic strain. These results suggest that the combined rND F + HN glycoprotein derived from vvNDV can be an ideal subunit marker vaccine candidate in chickens in a future ND eradication program.     

携带新城疫病毒F基因DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性

根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计1对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源NDV分离株JS5F基因(约1700bp),测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1-F。pVAX1-F经脂质体转染COS-7细胞,间接免疫荧光试验检测出F基因在COS-7细胞中的表达产物。将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F)。重组菌以109CFU/只的剂量2次免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对NDVF蛋白的血清抗体和小肠粘膜抗体应答,SL7207(pVAX1-F)免疫组抗体水平显著高于SL7207(pVAX1)组(P<0.05)。将SL7207(pVAX1-F)以109CFU/只剂量口服免疫1日龄雏鸡,免疫保护试验结果显示,SL7207(pVAX1-F)免疫组对鸡具有良好的保护率(77.27%),与空白对照组和SL7207(pVAX1)空载体组之间存在显著性差异(P<0.05)。结果表明,该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能成功释放所携带的质粒,并能刺激机体产生免疫应答,可对NDV强毒攻击提供良好的免疫保护作用,提示该疫苗候选株对新城疫的控制有重要应用前景。