奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及毒力基因检测

为研究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌毒力基因的分布情况,本试验通过MALDI Biotyper系统对分离自3个奶牛场的25株金黄色葡萄球菌进行鉴定及聚类分析,并采用PCR方法对25株金黄色葡萄球菌的nuc、clfA、fnbA、fn-bB、tsst-1、sea、seb和sec等14种毒力基因进行检测。结果显示,25株金黄色葡萄球菌被分为3个类群,各个类群之间及类群内菌株遗传距离较远。14种毒力基因中有7种被检出,检出率分别是nuc(100%)、fnbA (100%)、seg(64%)、clfA(52%)、fnbB(32%)、tsst-1(16%)和sea(4%),其余未检出。结果表明,不同奶牛场甚至同一奶牛场内存在多种金黄色葡萄球菌的流行株,且金黄色葡萄球菌携带毒力基因的数量和种类不同,并存在多种毒力基因组合,为奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎的防治提供基础研究。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌8种毒力基因的PCR检测

为研究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)主要毒力因子的分布情况,本试验利用PCR对70株临床型乳房炎、55株隐性乳房炎金黄色葡萄球菌的8种主要毒力基因进行检测。结果显示,nuc、ClfA、TSST-1、PVL、Hla、Hlb、FnBPA和FnBPB 8种毒力基因在临床型乳房炎SA菌株中的检出率分别为:100.0%(70株)、100.0%(70株)、0(0株)、5.7%(4株)、100.0%(70株)、11.4%(8株)、97.1%(68株)和100.0%(70株);在隐性乳房炎SA菌株中的检出率分别为:100.0%(55株)、100.0%(55株)、0(0株)、70.9%(39株)、98.2%(54株)、9.1%(5株)、100.0%(55株)和100.0%(55株)。结果表明,nuc、ClfA、Hla、Hlb和FnBPA 5种毒力基因是引起奶牛乳房炎的SA的最主要毒力基因;PVL基因可能是引起隐性乳房炎的重要致病基因。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

[目的] 了解泰州市某奶牛场乳房炎中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染情况及其对常用药物的敏感性。[方法] 试验选用Baird-Parker培养基分离、生化鉴定、PCR检测等方法,对采集的9份奶牛乳房炎奶样进行分离鉴定和药敏试验。[结果] 共分离到6株葡萄球菌,进一步通过凝固酶试验和16S rDNA测序等方法鉴定其中3株为金黄色葡萄球菌。药敏试验结果显示,3株金黄色葡萄球菌对青霉素G均耐药,2株对四环素耐药,2株对红霉素和苯唑西林表现为中介。[结论] 该次分离的金黄色葡萄球菌主要对青霉素G和四环素耐药,对其他常用抗生素表现为敏感。     

奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌毒素基因的检测

金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的重要病原菌之一，其不仅给奶业生产造成严重损失，而且携带毒素基因的金黄色葡萄球菌在适当环境温度、pH、介质下可产生毒素，影响乳产品质量安全，危害人体健康。金黄色葡萄球菌常产生的、临床意义较大的毒素为肠毒素（SEs）、剥脱毒素（ETs）和中毒休克毒素-1（TSST-1）三类。国外有较多奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌毒素基因流行情况的调查报道，国内少有这方面的研究。因此，本文就我国重要奶产地呼和浩特地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的sea、seb、sec、sed、see、eta、etb、tst等8种常见毒素基因的流行情况进行调查研究，以期为食源性疾病的监控和分子检测提供科学依据。     

金黄色葡萄球菌乳房炎及其防治

研究人员在调查奶牛场的牛群保健情况时发现,由金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)引起的乳房炎依旧是一大问题.虽然我们对这种细菌有所了解,但由于还没找到彻底杀灭或有效处理的办法,我们仍需设法加以控制.     

奶牛乳房炎样品金黄色葡萄球菌分离株的基因分型

为了掌握上海地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌基因型,本文采用ERIC-PCR分型方法,对从患有乳腺炎的奶牛乳汁中分离所得的74株金黄色葡萄球菌进行了基因分型。结果显示,74株金黄色葡萄球菌可扩增出4~9条带,共分为4个聚类群,亲缘关系相同或相近的菌株占97.7%。发现在同一牛群中的分离株可以是相同的基因型,也可以存在不同的基因型,而不同牛群中的分离株也可属于同一基因型。但总的来说,上海地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌多为同一基因型,在某个或某些牛群中存在金黄色葡萄球菌的优势基因型,而不同地区、不同环境和条件下同一种病原菌的基因型也存在一定差异,可能存在多个金黄色葡萄球菌基因型。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌毒力因子及荚膜基因的PCR检测

为研究金黄色葡萄球菌(S.aureus)的因型特征,本实验利用聚合酶链式反(PCR)方法,对S.aureus的3个标准株和30个临床分离株的凝集因子A、凝固酶、溶血素等33种致病因子进行了检测.结果表明各分离株在毒力因子方面存在一定差异.这些差异的检测将为进一步研究S.aureus的致病性和有效防治提供参考.     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌对四环素耐药性分析

为分析奶牛乳房炎中分离的金黄色葡萄球菌(S.aureus)四环素耐药机制,本研究以K-B法和常量肉汤法测定最低抑菌浓度(MIC)值,并对26株奶牛乳房炎S.aureus进行四环素耐药表型检测及加入利血平后的MIC值检测;以PCR检测四环素耐药基因tetM、tetO、tetL和tetK,对扩增产物进行序列分析。检测结果表明:26株菌株中,7株对四环素耐药,19株敏感;利血平能显著降低部分耐药株对四环素的MIC值;在7株耐药菌株中,1株检测出tetM基因,6株检测出tetK基因,没有检测到tetL和tetO基因;tetK基因与S.aureus质粒pT181同源性为100%,tetM基因与转座子Tn916序列同源性为99.9%。实验研究表明,26株奶牛乳房炎S.aureus四环素耐药表型与耐药基因相符,耐药机制以外排蛋白介导为主,并在国内牛源S.aureus中首次检测到tetK基因。     

金黄色葡萄球菌性乳房炎的诊治

金黄色葡萄球菌是一种经常引起奶牛乳房炎的细菌，且对一般性药物易产生耐药性，同时又经常表现为隐性感染，给临床诊断和治疗带来许多不便。现就金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳房炎的诊断及防治报道如下。     

奶牛乳房炎病原菌金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为研究江苏某奶牛场金黄色葡萄球菌的耐药特点,本试验通过MALDIBiotyper系统对8株金黄色葡萄球菌疑似株进行鉴定和耐药性试验。结果显示,8株金黄色葡萄球菌疑似株均为金黄色葡萄球菌,其对青霉素、链霉素、环丙沙星的耐药率均为100%;其次,对阿莫西林的耐药率为75%;极少数对头孢氨苄、庆大霉素、丁胺卡那、卡那霉素耐药;而对四环素、多西环素、克林霉素均敏感。结果表明,该奶牛场金黄色葡萄球菌的分离率为14.55%(8/55),且均呈现多重耐药。     

Phage typing of Staphylococcus aureus strains isolated in Sweden from bovine milk.

Both the human and the bovine international sets of phages were used for typing of 372 bovine Staphylococcus aureus (Sa) strains, whereas the bovine set alone was used for typing of a further 1183 strains. In addition, 338 of the strains were tested for antibiotic sensitivity. Out of 372 Sa strains 85.5% could be typed with the human and 89.8% with the bovine phage set. Of all the 1555 Sa strains used 92.4% were lysed by the bovine phage set. Several phage types can be present in one and the same herd and some of them can predominate. Resistance to most of the tested antibiotics was very low. The incidence of resistance to penicillin and ampicillin was 10.0% and 4.4% respectively.     

新疆不同地区奶牛乳房炎β溶血性金黄色葡萄球菌毒力与基因相关性分析

从新疆5个地区8个奶牛场乳房炎奶样中分离的101株β溶血性金黄色葡萄球菌中随机选64株用小鼠进行毒力测定,同时用随机引物扩增多态性(RAPD)技术分别以3个随机引物进行基因相关性分析,建立种系进化树。结果表明,55%的菌株对小鼠具有较强毒力(可致小鼠2/3死亡),且在乌鲁木齐、奎屯和伊犁地区占据优势。基因相关性分析表明,当相对基因相关性为0.35时,被检测菌株主要分布于6个进化群,86.5%的菌株分布在A、B、C和E4个进化群。其中,50%菌株属于A群,13.5%属于B群,5.8%属于C群,17.3%属于E群。从地区分布可见,乌鲁木齐、伊犁和奎屯地区分离的菌株分别有69.6%、61.1%和71.4%分布在A群;昌吉3个牛场48%、24%的分离菌株分布在B群和C群;库尔勒牛场35.7%、57.1%的分离菌株分布在A群和E群。26株对小鼠具有致死性的菌株分布在A群,这些菌株占致死小鼠菌株的74.3%。     

新疆、内蒙古部分地区乳房炎奶样中金黄色葡萄球菌的流行性与耐药性分析

为确定患乳房炎奶牛乳中金黄色葡萄球菌的流行性和耐药性状况,试验自2018年4月至2018年5月采集了新疆地区70例和内蒙古地区50例患乳房炎奶牛生鲜乳样。通过对奶样中金黄色葡萄球菌进行增菌培养、分离纯化,KB纸片扩散法药敏试验及PCR耐药基因检测发现,新疆和内蒙古地区奶样中金黄色葡萄球菌分离率分别为28.6%和54.0%;新疆地区分离的金黄色葡萄球菌菌株对青霉素G的耐药性最高(75.0%),其次是磺胺异噁唑(60.0%)、林可霉素(55.0%);内蒙古地区的金黄色葡萄球菌菌株同样对青霉素G高度耐受,耐药率为70.4%,其次为林可霉素(63.0%)、克林霉素(51.9%);两地区所分离菌株中,88.9%以上携带多种耐药基因,呈现多重耐药性;两地区所检出的高频耐药基因分别是新疆地区的ermA(30.0%)、dfrS1(30.0%)基因和内蒙古地区的lnuA(46.2%)基因。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌基因多态性分型试验

利用随机引物AP-7,建立引物随机多态性扩增(RAPD)体系对71株引起内蒙古和贵州地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究。结果表明,71株金黄色葡萄球菌均得到清晰的RAPD指纹图谱,扩增产物为2～9条带,产物大小为240～4 500bp。菌株共分为6个基因型,其中Ⅰ型17株(占23.9%)、Ⅱ型3株(占4.2%)、Ⅲ型33株(占46.5%)、Ⅳ型15株(占21.1%)、Ⅴ型2株(占2.8%)、Ⅵ型2株(占2.8%)。Ⅰ型为内蒙古地区的流行优势菌群,Ⅲ型为贵州地区的流行优势菌群。两地区各基因型菌株比例有明显差异,这可能与奶牛养殖业水平和环境差异有关。     

In vitro susceptibility of Staphylococcus aureus strains isolated from cows with subclinical mastitis to different antimicrobial agents

Sensitivity to commercial teat dips (nonoxinol-9 iodine complex and chlorhexidine digluconate) of 56 Staphylococcus (S.) aureus strains isolated from quarter milk samples of various German dairy herds treated with different teat dipping schemes was investigated in this study. The minimum inhibitory concentration was determined using a broth macrodilution method according to the German Veterinary Association guidelines. The main objective of the current study was to induce in vitro resistance induction of S. aureus to chemical disinfectants. Ten different strains were repeatedly passed ten times in growth media with sub-lethal concentrations of disinfectants. Nine strains showed a significant reduction in susceptibility to the nonoxinol-9 iodine complex but only one strain developed resistance to chlorhexidine digluconate. Stability of the acquired resistance was observed in all S. aureus strains adapted to the nonoxinol-9 iodine complex and chlorhexidine digluconate. In contrast, simultaneous resistance to different antibiotics was not observed in any of the ten investigated S. aureus strains. However, the isolates exhibited a high degree of resistance to penicillin G. Based on these results, resistance of S. aureus to chemical disinfectants may be more likely to develop if the chemicals are used at concentrations lower than that required for an optimal biocidal effect.     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定

为检测江苏省某奶牛场中乳房炎是否为金黄色葡萄球菌所致,采取4份患病乳汁样本进行试验分离和鉴定,并针对金黄色葡萄球菌采用分离后鉴定,结果显示,分离到的2株致病菌为金黄色葡萄球菌,其他菌株还包括大肠杆菌、肠球菌等,为多种致病病原菌同时引起,主要为金黄色葡萄球菌感染。     

我国部分地区奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌血清型及毒力调查

为了解我国奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌(S.aureus)流行血清型和不同血清型菌株的毒力情况,本研究采用玻板凝集和双重PCR方法分别对北京、山西、内蒙古、山东、浙江和新疆奶牛乳房炎乳样中分离的191株S.aureus进行血清分型并从各血清型中随机选取100株菌以小白鼠进行毒力测定.结果表明:这些地区牛源S.aureus中,336PS型为流行血清型,占60.2％(115/191),CP8型占19.4％(37/191),CP5型占11.5％(22/191),未分型菌株占8.9％(17/191).毒力测定显示:336PS、CP8和CP5型菌株中强毒力菌株分别占65.1％、62.9％及61.9％,未分型菌株中强毒力菌株为22.2％.该调查为我国奶牛乳房炎S.aureus疫苗菌株的筛选提供了依据.     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌荚膜多糖主要血清型的鉴定

为了解内蒙古地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌荚膜多糖的主要血清型,试验从内蒙古地区9个牧场共采集236份奶牛乳房炎患牛的奶样,采用常规微生物方法、生物化学反应方法、动物试验和PCR方法对金黄色葡萄球菌荚膜多糖的血清型进行鉴定。结果表明:经常规微生物学检验分离得到162株葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌(S.aureus)124株、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)29株、腐生葡萄球菌(S.saparophytics)9株。动物试验得到116株致病性S.aureus。PCR方法鉴定出荚膜多糖5型S.aureus23株,占致病性S.aureus的19.83%;荚膜多糖8型S.aureus61株,占致病性S.aureus的52.59%;荚膜多糖5型和8型S.aureus占致病性S.aureus的72.41%。说明5型和8型S.aureus是内蒙古地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌荚膜多糖的主要血清型。     

牛源金黄色葡萄球菌16SrRNA分子鉴定与随机多态性扩增分型

利用16S rRNA保守序列对引起内蒙古地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,并且建立引物随机多态性扩增(RAPD)体系对金黄色葡萄球菌分离株进行基因分型研究.结果表明,共分离出金黄色葡萄球菌35株,RAPD结果显示这35株菌均可得到清晰的RAPD指纹图谱,扩增产物在1～8条带之间,产物大小在350～4 500bp之间.菌株分为6个基因型,Ⅳ型为该地区的流行优势菌群.不同牛场各基因型菌株分布有明显差异,这与牛场的环境和病原菌在牛场间流行传播情况有关.研究结果为地区性奶牛乳房炎的防治及新疫苗的研制提供了可靠的理论依据.     

新疆部分地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌荚膜多糖分型的研究

为调查新疆奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌主要流行血清型,本研究采用玻板凝集和双重PCR方法对不同地区奶牛乳房炎乳样中分离的117株金黄色葡萄球菌进行血清分型.结果表明荚膜多糖5型占10.26％(12/117),8型占13.68％(16/117),336型占64.96％(76/117),未分型菌株占11.11 ％(13/117).该研究为新疆奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌疫苗菌株的筛选提供了依据.