禽网状内皮组织增生症病毒感染肉鸡中鸡白细胞介素18的定量检测

建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18 mRNA转录水平进行了初步研究.结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和法氏囊中IL 18的分泌水平在感染后7和14 d均显著升高(P＜0.05),在感染21、28、35和42d表达差异均有显著变化(P＜0.05).本研究为探讨REV感染的免疫抑制机理奠定了一定基础.     

SPF雏鸡感染REV后IL-2 mRNA表达的动态变化

为研究SPF鸡感染禽网状内皮组织增生症病毒(REV)后白细胞介素2(IL-2) mRNA表达的动态变化,本研究应用荧光定量RT-PCR方法,对SPF鸡感染REV后主要免疫器官的IL-2 mRNA转录水平进行了初步研究.结果显示,与对照组相比,REV感染组鸡的脾脏、胸腺和法氏囊中IL-2基因的表达量在感染后7d、14d、21d、28 d、35 d、42 d和49 d均呈现升高,而且除21日龄、28日龄鸡的脾脏外,均为差异显著(p＜0.05).本研究表明REV感染后可以诱导鸡的机体表达IL-2.     

SPF雏鸡感染REV后IL-6和IFN-γ mRNA表达的动态变化

建立并利用鸡白细胞介素6和γ干扰素荧光定量RT-PCR方法,对于禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendo-theliosis virus,REV)感染SPF鸡后主要免疫器官的鸡白细胞介素6和γ干扰素基因转录水平进行了初步研究.结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和腔上囊中IL-6和IFN-γ的分泌水平在所有时间点均显著升高(P＜0.05)或极显著升高(P＜0.01).本试验为探讨REV感染的免疫抑制机理打下了一定基础.     

重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)对MDV感染SPF鸡细胞免疫的影响

用马立克氏病病毒（MDV）感染5日龄SPF鸡后,取21日龄和35日龄鸡的淋巴细胞,运用3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞对ConA和重组鸡白细胞介素18（rChIL-18）的反应,并用MTT法检测NK细胞和CTL对MD肿瘤细胞系CU147的杀伤活性及rChIL-18和IFN-γ对它们的作用。结果显示,SPF鸡感染MDV后淋转水平显著下降,NK细胞、CTL杀伤活性在感染后21日龄时升高,而在35日龄时NK细胞杀伤活性显著下降。rChIL-18对对照组和感染组SPF鸡的淋转水平和杀伤活性均有提高作用,同样IFN-γ也具有提高NK细胞和CTL杀伤活性的作用。     

运用实时荧光PCR法检测感染鸡种蛋中的REV

为研究通过种蛋检测的方法监测SPF鸡群REV感染情况，运用已建立的荧光定量PCR方法检测攻毒母鸡种蛋中REV，并与血清REV水平进行比较。人工感染12月龄母鸡，从种蛋中提取蛋清，接种正常鸡胚成纤维细胞后传代一次，之后石蜡密封孵化至9日龄制成鸡胚成纤维细胞（CEF），运用荧光定量PCR方法检测蛋清，并和血清的检测结果进行比较，结果显示：83份蛋清，3份REV阳性；46份CEF，2份REV阳性，均在攻毒后的11天、14天收集，阳性样品的蛋清和CEF呈对应关系，两种方法的检测结果一致。与血清检测结果比较：阳性鸡蛋均在血清病毒血症持续的时间内采集，表明通过种蛋REV检测能反映SPF鸡的急性感染状态。本研究为通过种蛋抗原检测从而监测SPF鸡REV感染奠定基础。     

3种方法检测禽网状内皮组织增殖病毒人工感染鸡胚孵化雏鸡的带毒比较

为比较血液和粪便等样品采用不同方法检测禽网状内皮组织增殖病毒（REV）的准确率,从而为制定禽网状内皮组织增殖病（RE）净化程序提供参考,利用鸡胚卵黄囊接种构建REV垂直传播感染雏鸡模型,分别采用DF-1细胞病毒分离、RT-PCR检测和荧光定量RT-PCR检测,对1日龄雏鸡血液和胎粪样品,7～70日龄鸡（每隔1周）的血液和泄殖腔棉拭子样品,进行REV检测和结果比较。结果显示：对1日龄出壳的SPF鸡血浆进行检测,荧光定量RT-PCR灵敏度最高,阳性检出率为100%(25/25),其次为病毒分离,阳性检出率为96%(24/25),RT-PCR检出率最低;对1日龄出壳的SPF鸡胎粪进行检测,荧光定量RT-PCR与病毒分离灵敏度一致,阳性检出率均为80%(20/25),RT-PCR检出率最低,为28%(7/25)。对7～70日龄鸡（每隔1周）进行血液和泄殖腔棉拭子检测,3种方法阳性检出率与1日龄检测情况总体相似,检出率从高到低依次为荧光定量RT-PCR、病毒分离和RT-PCR。结果表明,在同一检测时间点使用同一检测方法,胎粪/泄殖腔棉拭子REV阳性检出率基本低于血液检出率。本研究初步比较了不同方...     

鸡胚中人工感染网状内皮增殖病病毒的检测

为了模仿禽网状内皮增生病毒(REV)垂直感染鸡胚,在1和3日龄的发育SPF鸡胚人工接种不同剂量的REV,并继续孵化至12日龄.在将发育鸡胚制成成纤维细胞单层后,再用抗REV单克隆抗体11B118作间接荧光抗体反应检测REV.结果表明,从所有人工感染REV的鸡胚12日龄制备的成纤维细胞中均能在培养48h检测出REV.该方法可用于检测生产弱毒疫苗的SPF鸡胚及其相应细胞有无REV的污染.     

禽弱毒疫苗中REV低剂量污染检测方法的比较

使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗是REV感染途径之一,而通常弱毒疫苗中REV的污染剂量较低,难以检测,本研究对不同方法在检测弱毒疫苗中REV低剂量污染进行了比较研究。将定量好的REV以不同剂量分别人为污染一批商品化新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗,提取核酸后分别以TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测、常规RT-PCR检测以及PCR产物结合核酸斑点杂交检测等不同方法进行检测。结果显示常规RTPCR检测仅可检测到10TCID50/羽份的REV污染,而另外两种方法均检测到1TCID50/羽份的低剂量REV污染。将人为污染1TCID50/羽份和2TCID50/羽份REV的NDV弱毒疫苗各接种10只SPF鸡,定期针对REV抗体及其核酸进行检测,结果显示在免疫污染疫苗后7周内REV抗体全部为阴性,而核酸检测均可以检测到一定比例的阳性,提示通过接种SPF鸡检测弱毒疫苗中REV污染时,仅仅通过抗体判定可能会对一些剂量较低的REV污染造成漏检,通过结合对病原的检测有助于降低漏检率。     

鸡白细胞介素18的研究进展

白细胞介素18（IL-18）是一种新发现的细胞因子,主要由单核巨噬细胞系统的细胞分泌。在结构上属于IL-1家族,在功能上与IL-12相似,二者具有协同效应,有着多种生物学功能。鸡IL-18是近几年被发现的,与哺乳动物IL-18有相似的生物学功能;另外,在抗病原微生物感染、抗肿瘤等方面有着潜在的应用价值,还可以作为免疫治疗剂、增强剂及核酸疫苗等,被认为可以代替传统免疫疗法的一种新型免疫佐剂,因而对于开发鸡IL-18的鸡抗病毒药物及疫苗佐剂具有重要意义。本文就其生物学特性及其功能的研究进展作一简要综述,对其未来的发展方向进行了展望。     

禽活疫苗中网状内皮组织增生症病毒污染的检测方法比较

本研究随机抽取4种市售活疫苗,利用RT-PCR法、IFA检测法和SPF鸡检查法,检测活疫苗中的禽网状内皮组织增生症病毒的污染,比较三种检测方法的优劣以找到更好检测的方法.试验结果表明,RT-PCR法虽然方便、快捷,但RT-PCR法检测会产生假阳性,影响结果的判定;SPF鸡检查法操作简单结果可靠,但该方法试验周期较长,成...     

SPF鸡人工感染鸡败血霉形体后血液生物化学变化

用鸡败血霉形体（ＭＧ）国际标准强毒Ｒ株人工感染１５日龄ＳＰＦ鸡,在感染后１５ｄ采血作血液生物化学检验。结果：ＴＢｉｌ、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＡＬＰ、ＬＤｈ、ＣＯ２－ＣＰ、ＣＲＥ、ＢｕＮ、ＣＲＥ－Ｕ、无机磷、Ｍｇ＾２＋明显升高,而ＴＰ、ＡＬＢ、Ａ／Ｇ、Ｃｈｏ、Ｇｌｕ、Ｃａ＾２＋等明显下降,ＲＢＣ和Ｈｂ下降,ＷＢＣ上升,其中ＬＣ和嗜酸性白细胞明显上升。说明ＭＧ不仅造成呼吸系统障碍,也对肝功能和功能产生较大影     

网状内皮增殖病病毒(REV)感染SPF雏鸡后局部免疫组织抗体生成细胞的变化

对 SPF雏鸡人工感染 REV后局部免疫组织盲肠扁桃体和哈德氏腺的 Ig A、Ig G和 Ig M抗体生成细胞数量动态变化进行了检测。结果发现 ,REV感染 SPF雏鸡后 7～ 4 9天消化道局部免疫组织盲肠扁桃体和呼吸道相关局部免疫组织哈德氏腺的 Ig A、Ig G和 Ig M抗体生成细胞数量明显低于未感染对照雏鸡。表明雏鸡感染 REV后消化道局部组织盲肠扁桃体和呼吸道相关免疫组织哈德氏腺体液免疫机能均显著下降。     

SPF雏鸡感染REV后免疫器官免疫功能的动态变化

试验通过对 1日龄 SPF雏鸡人工感染网状内皮组织增殖病病毒 ( REV) ,观察了免疫器官胸腺、法氏囊和脾脏 T、B淋巴细胞增殖反应的动态变化。结果表明 ,雏鸡感染 REV后胸腺 T淋巴细胞的增殖反应于7、2 1、4 2和 4 9日龄明显降低 ( P<0 .0 5) ,于感染后 1 4、2 8和 3 5日龄极显著减弱 ( P<0 .0 1 ) ;脾脏 T淋巴细胞的增殖反应分别于感染后 1 4～ 2 8d和 3 5～ 4 9d较对照组雏鸡明显或极明显降低 ( P<0 .0 5,P<0 .0 1 )。法氏囊和脾脏 B淋巴细胞增殖反应分别在感染后 7～ 4 9d和 1 4～ 4 9d极显著减弱 ( P<0 .0 1 )。免疫器官胸腺重量和脾脏重量与体重比值及体重分别于感染后 7～ 4 9、7～ 3 5、7～ 4 9d明显降低 ( P<0 .0 5,P<0 .0 1 )。说明SPF雏鸡感染 REV后 ,免疫器官 (胸腺、法氏囊和脾脏 )淋巴细胞发生变性坏死、数量减少和功能降低 ,机体的细胞免疫和体液免疫功能均发生明显降低或抑制     

CAV与REV共感染SPF鸡对疫苗免疫反应的抑制作用

用1日龄SPF鸡人工感染鸡贫血病毒(CAV)和禽网状内皮增生病病毒(REV),探讨病毒感染对鸡体疫苗免疫反应的影响。结果表明,在用禽流感病毒(AIV,H5和H9)疫苗免疫后,CAV与REV单独感染均显著抑制了鸡体对H5和H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的HI抗体反应,在CAV与REV共感染后,这种抑制作用更为明显。CAV单独感染后鸡体对新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗的免疫反应受到抑制,但与对照组在统计学上的差异不显著,然而,CAV可以显著加重REV感染对鸡体在NDV和IBDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用。从而证实CAV与REV共感染在疫苗免疫抑制上有协同作用。     

一株鸡传染性贫血病毒对不同日龄SPF鸡的致病性研究

为评价鸡传染性贫血病毒AV1550株的致病性,取1日龄、7日龄和14日龄SPF鸡分别经胸部肌肉注射不同病毒含量的病毒液,同时设置正常对照,隔离饲养观察21日。感染后14日采血测定红细胞压积,21日统计死亡率、体重变化以及胸腺、骨髓、法氏囊病变情况并测定1日龄SPF鸡感染后不同组织中的病毒载量。结果表明,1日龄SPF鸡感染AV1550株后,表现出精神沉郁、增重减缓、贫血等明显的临床症状,死亡率为53.9%;死亡鸡或观察期结束时存活鸡剖检,可见胸腺萎缩,骨髓变成淡黄色;不同剂量感染后14日,均能引起红细胞压积显著下降;21日时,胸腺病毒载量最高,可达106.7copies/mg 。7日龄SPF鸡感染后,出现增重减缓,高感染剂量（100000EID50）出现贫血,部分鸡出现胸腺萎缩和骨髓病变,但病变率低于30%。14日龄SPF鸡感染后,不引起明显临床症状。研究证实,CAV对SPF鸡的致病性具有明显的日龄依赖性,红细胞压积降低、骨髓病变、胸腺萎缩以及胸腺病毒载量测定可作为评价CAV致病的指标。     

Reduced mucosal injury of SPF chickens by mast cell stabilization after infection with very virulent infectious bursal disease virus

Recent studies here have demonstrated that increased mast cell populations and tryptase activity contribute to lesion formation in regions of immune organs in special-pathogen-free chickens after infection with very virulent infectious bursal disease virus (vvIBDV). Mast cells and their mediators have been implicated in acute inflammatory injury after vvIBDV infection, but their precise role in this process remains elusive. In this study, the role of mast cells in the vvIBDV infection process was examined using ketotifen, a mast cell membrane stabilizer. On days 1, 2, and 3 postinfection, the bursa of Fabricius (BFs) were collected to quantify mast cells, tryptase and histamine contents by cytochemistry, immunohistochemistry and fluorospectrophotometry analyses, respectively. The results showed that the mast cell populations, tryptase expression, and histamine released increased significantly in the BFs (p < 0.01) of infected birds compared to controls, and acute inflammatory responses were observed in the former. In contrast, in infected chickens pretreated with ketotifen, mast cells, tryptase, and histamine were markedly decreased (p < 0.01) and probably as a result, the BFs remitted significantly. The overall results suggest that mast cells are positively involved in BF injury induced by vvIBDV infection. Inhibition of mast cell degranulation and concurrent mediator release may represent a novel strategy to modulate this process. This study, thus, advances the understanding of the acute inflammatory injury mechanisms triggered by vvIBDV infection and the contribution of mast cell activity in this process.     

利用实时定量RT-PCR测定肉鸡组织中CaBP基因的相对表达

试验旨在利用实时定量RT-PCR技术建立肉鸡组织钙结合蛋白(CaBP)基因相对表达量的测定方法,为进一步研究肉鸡钙吸收和利用的分子生物学机理以及骨骼的发育奠定技术基础。根据GenBank中鸡的CaBP基因序列,设计合成引物,进行SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR。以管家基因β-Actin为内参基因,对组织Total RNA进行均一化处理,利用循环阈值(Ct值)的变化计算CaBP基因的相对表达量。结果表明,肉鸡十二指肠及胫骨组织CaBP基因相对表达量分别在27.78~2-4.60和2-2.46~2-17.20范围。表明利用实时定量RT-PCR技术对肉鸡组织CaBP基因相对表达水平进行检测是可行的。