苎麻花药和未授粉子房离体培养的研究

1989—1991年试验结果表明,决定花粉愈伤组织发生串高低的关键因素是基因型。蔗糖浓度、低温预处理、热击(heat shock)等条件在一定程度上影响花粉愈伤组织发生率。添加有机附加物的培养基有利于愈伤组织生长,在2,4—D配以微量6—BA或KT最适宜于诱导苎麻单倍体愈伤组织。由未传粉子房的培养,不经愈伤组织、曾经直接获得一株白化苗,但至今为止尚未由花粉或未授粉子房来源的单倍体愈伤组织获得绿苗。     

高粱花药和花序培养诱导愈伤组织及再生植株

小麦、水稻、玉米及木本植物的花药培养诱导花粉植株已经取得了成功,而高粱的花粉或花药培养诱导单倍体的方法、培养基及程序还不完善,基因型和培养基对高粱再生植株的影响也没有报道。Rose 等(1985)用栽培品种(Advance)从1000多个花药形成的愈伤组织中仅得到4株不知倍数的白化苗。利用高粱体细胞组织或器官,如未成熟的胚、芽尖和叶圆片来诱导愈伤组织和再生植株已经成功,但     

亚麻花药培养高频率的植株再生

本文主要研究亚麻花药培养的诱导培养基组成成份的效果，目的是提高愈伤组织的诱导：和植株再生的效率。花药接种于改良的MS培养基上(培养基添加了五种不同配比的植物激素)。培养基中含有2mg／L2．4-D和1mg／LBAP比相同成分培养基中含有1mg／LNAA和2mg/L6-BA(CK)，愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率有显著提高。在五个处理的盐酸硫胺素的实验中，改良的MS培养基含有10mg／L盐酸硫胺素比含有2．4mg/L盐酸硫胺素愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率显著提高。在麦芽糖的五个处理中以培养基中含有6％或9％的麦芽糖，总的植株再生频率最高。蔗糖的浓度主要影响愈伤组织再生苗的百分率，总的植株再生效率、花粉植株的频率以及花粉植株染色体自然加倍的频率。本研究获得的单倍体品系已被应用于育种程序中。     

亚麻花药培养高频率的植株再生

本文主要研究亚麻花药培养的诱导培养基组成成份的效果,目的是提高愈伤组织的诱导和植株再生的效率.花药接种于改良的MS培养基上(培养基添加了五种不同配比的植物激素).培养基中含有2mg/L2.4-D和1mg/LBAP比相同成分培养基中含有1mg/LNAA和2mg/L6-BA(CK),愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率有显著提高.在五个处理的盐酸硫胺素的实验中,改良的MS培养基含有10mg/L盐酸硫胺素比含有2.4mg/L盐酸硫胺素愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率显著提高.在麦芽糖的五个处理中以培养基中含有6%或9%的麦芽糖,总的植株再生频率最高.蔗糖的浓度主要影响愈伤组织再生苗的百分率,总的植株再生效率、花粉植株的频率以及花粉植株染色体自然加倍的频率.本研究获得的单倍体品系已被应用于育种程序中.     

大豆耐盐离体筛选分化再生植株的初步研究

大豆(Glycine max)小真叶外植体直接接种到含不同浓度NaCl的选择培养基中,愈伤组织诱导率随NaCl浓度增高而降低,获得再生植株的最高NaCl浓度为0.25％。用连续逐级转移愈伤组织不断加强选择压的方法,可使筛选耐盐再生植株的最高NaCl浓度提高到0.3％。     

巴西橡胶花药胚的发生和花药植株起源的研究

定期连续切片观察表明,花药断口处、药端、药隔、药壁的薄壁细胞都可形成愈伤组织。花药中的花粉接种后很快解体死亡。在观察的12079个花粉中,只见4个花粉分裂1～2次也就停止了。全部胚状体来源于体细胞愈伤组织的外围。接种后39～49天的10天期间是愈伤组织迅速衰老,胚状体大量发生的时期。愈伤组织、胚状体和植株的染色体计数发现,染色体28～36条的分裂相占91.8～95.6％,属二倍体。花药植株的遗传表现,也进一步证实植株起源于体细胞。     

从种子愈伤组织培养选育耐盐水稻突变体 1.愈伤组织诱导、植株再生及表观的植株性状变异

采用种子愈伤组织培养研究15个籼稻和硬稻品种的愈伤组织诱导及植株再生。还测定了选择性培养基不同氯化钠浓度对愈伤组织生长及植株再生的影响。不同品种愈伤组织诱导及植株再生的能力差异显著。在不加酵母及酪旦白提取物的培养基中,愈伤组织诱导频率从32％至85％。但当加入上述物质时,使诱导频率提高至将近100％。植株再生频率从IR8、IR26、IR30、IR36以及“Koshihikari”的0％至“台中65”的62％。植株再生频率随着愈伤组织培养时间的延长而下降。不过,“台中65”及“Nona Bokra”培养27周的愈伤组织还保持30％-40％的再生能力。“台中65“的愈伤组织即使生长了47周还能再生成植株。选择性培养基加进氯化钠对愈伤组织生长及随后的植株再生有显著影响。在氯化钠浓度为2％时,只有少数愈伤组织略有生长:氯化钠浓度低于1％时,愈伤组织生长良好。1.5％的氯化钠浓度抑制愈伤组织生长,但在第一筛选阶段仍然保持中等的生长速度。所有供试的品种,用培养11周的愈伤组织在氯化钠浓度较高的情况下植株再生频率仍较高。     

甘蓝型油菜单倍体离体诱变及其效应的AFLP分子标记检测

以油菜小孢子培养得到的单倍体植株的离体组织作实验材料,诱导愈伤组织,获得生长良好的愈伤组织经不同剂量的60Co-γ射线辐射以后,部分分化成苗,对成苗单株进行AFLP分析,检测其诱变效应.结果表明茎段在附加有0.5mg/L 2,4-D和2mg/L 6-BA的MS培养基上能诱导出生长良好的愈伤组织;用3 000～4 000R辐射剂量对愈伤组织进行处理较为适宜;分子标记检测结果显示单倍体基因组在诱变过程中发生了不定向变异.     

亚洲棉细胞悬浮培养技术的研究

一般认为棉属植株的组织离体培养难以得到活力旺盛的愈伤组织,而且愈伤组织在培养过程中容易发生老化和变褐色。有关细胞悬浮培养的报道更少。James等(1978)用克劳茨基棉的愈伤组织进行悬浮培养,经4～5次继代培养后死亡。本试验用亚洲棉红叶中棉品种131花药诱导产生的愈伤组织为材料,成功地建立起细胞悬浮培养体系。     

甜菜茎端分生组织的培养

本文报导了二倍体甜菜离休茎尖的培养条件和植株再生作用。采用5种培养基,由甜菜的茎尖组织都获得了愈伤组织,从其中的三种培养基上再生了植株。实验结果表明,不同种类的生长素,不同的蔗糖浓度对愈伤组织的诱导及绿苗分化率都有明显影响。对甜菜茎尖外植体,蒙乙酸(NAA)是适合的生长素。MS全成份的一半附加NAA可诱导出粗壮的根系。过筛消毒的砂土配合浇灌营养液可提高移栽苗的成活率。     

油菜素内酯对油菜种子萌发及子叶组织培养的影响

油菜素内酯促进油菜种子无菌萌发,增大子叶,增多根数,使植株和根扭曲生长.但使鲜重降低,株高变矮,根变细。低浓度的BR(10~(-5)～10~(-1)ppm)促进子叶愈伤组织形成,高浓度则表现抑制作甩。10~(-4)～10~(-5)ppmBR促进经BR处理的子叶形成根,但降低未经BR处理的材料的生根率。BR10~(-3)～10~(-4)ppm诱导形成的愈伤组织较易分化出苗。BR对种子萌发的促进作用以及对愈伤组织诱导和分化的双重促进作用,对于开拓该激素应用的新领域将具有重要意义。     

茶籽下胚轴组织培养的研究

目前,国内外利用茶树种子的某些组织或器官作外植体,进行培养,诱导、分化植株的研究进展很快。吴振铎(1976)、颜慕勤等(1983)、加藤美知代(1986)以子叶为外植体进行培养,通过诱导愈伤组织、分化胚状体,获得了植株。中村顺行(1985)培养子叶胚,也获得了植株。刘德华(1987)以子叶柄为外植体,直接诱导了芽的分化,获得了植株。但用茶籽下胚轴作材料,诱导分化植株的研究,国内外未见报导。本研究以下胚轴为外植体,     

茶树叶片组织培养的初步研究

用MS培养基附加以不同激素的种类及浓度的组合配比,探讨茶树叶片组织培养中对愈伤组织、胚状体、芽和小植株分化的能力。结果表明,连续用7、8号两组培养基作继代培养,新形成的愈伤组织都具有分化芽的能力。当这种愈伤组织转移到4号培养基上培养,可获得胚状体或胚性细胞团的分化,进而形成正常芽和苗。若将上述新形成的愈伤组织转移到9号培养基上培养,可使芽体有根的分化,从而得到健壮苗株。说明茶树叶片的组织培养中诱导愈伤组织,分化胚状体和小植株的形成所需要的外源激素的种类组合及浓度配比上存在明显差异。     

基因枪法转化籼稻有关因素的评价

 利用基因枪轰击水稻未成熟胚及未成熟胚诱导来源的愈伤组织,对国内外16个籼稻品种进行了转化。设置不同的基因枪转化参数,并在培养基中添加各种植物激素、甘露醇以及2-N-吗啉-乙基磺酸(简称MES)来改善继代过程中籼稻愈伤组织的生长状态。基因枪转化的操作参数（包括金粉浓度和DNA含量、基因枪氦气压力、轰击受体的不同状态）对转化频率有重要影响;在继代培养基中添加MES（500 mg/L）作为缓冲剂,可以减少籼稻愈伤组织褐化现象的发生;在诱导和继代培养基中补加NAA(0.5 mg/L）,KT(0.2 mg/L)可改进愈伤组织质量,进而提高再生频率;在继代培养基中补加低浓度的 ABA(1 mg/L)和甘露醇（20 g/L）,能普遍改善愈伤组织生长状况,减少褐化现象的产生,得到较多结构致密的颗粒状抗性愈伤。获得了再生的转化植株,经检测表现出对Basta的抗性。     

抗茎腐病的玉米(Zea maysL．)自交系体细胞变异体选择

用玉米自交系综3、综31、5003、P9－10(Zea meys L)的幼胚所诱导的愈伤组织，在继代繁殖后一部分愈伤组织转移到含有玉米茎腐病的病原菌(F.graminearum)毒素的培养基中培养并进行变异体选择，现已获得了大量的抗毒素变异体再生植株，并有部分植株移栽成活。     

节节麦幼胚再生体系的建立

为建立高效的节节麦幼胚再生体系,以节节麦幼胚为外植体,通过正交设计,探索基本培养基、2,4-D、碳源、KT等因素对幼胚愈伤组织诱导、分化及植株再生效果的影响。结果表明,4种因素中,基本培养基对节节麦幼胚愈伤组织诱导的影响最显著(P0.05),2,4-D浓度对节节麦幼胚愈伤组织诱导也有显著影响(P0.05),添加3.0mg·L~(-1) 2,4-D的培养基诱导出的愈伤组织质量高,淡黄色,表面呈不规则颗粒状,质地致密,再生频率可以达到17.62%。KT浓度对节节麦愈伤分化影响最显著,基本培养基、2,4-D和碳源对节节麦幼胚愈伤分化均无显著影响。不同碳源对节节麦幼胚愈伤组织诱导和分化的影响均不显著,为节约成本可直接选用30g·L~(-1)蔗糖作为碳源。节节麦幼胚组织培养的最佳组合是:愈伤诱导培养基为MS培养基+3mg·L~(-1) 2,4-D+15g·L~(-1)蔗糖+15g·L~(-1)甘露醇,愈伤分化培养基为MS培养基+15g·L~(-1)蔗糖+15g·L~(~(-1))甘露醇+1.0mg·L~(-1) KT。     

大豆原生质体培养经胚胎发生高频率再生植株

大豆原生质体培养诱导再生植株一直为国内外学者所关注。如Kao(1970)和Miller等(1971)从悬浮培养的大豆细胞分离出原生质体,经培养获得了愈伤组织。但在以后的多年中进展不够大。据报道,已从幼荚子叶、幼苗根、叶肉组织和悬浮培养细胞等外植体游离出原生质体,经培养获得愈伤组织,并进行了大量的分化研究,但最终都未能得到再生植株。卫志明和许智宏于1988年首次由大豆幼荚子叶分离出     

两个栽培大豆品种的体细胞胚胎发生和植株再生研究

通过优化培养条件,即提高植物生长激素浓度和蔗糖浓度,发展了一种再生频率较高的大豆植株再生的方法。从栽培大豆品种幼胚中诱导形成的体细胞胚性愈伤组织和胚状体可以进一步分化出芽和根,发育成完整植株,中黄４号植株再生频率最高可达３９％,早熟１８号仅得到了胚性愈伤组织。     

温度对甘蓝型油菜花粉胚状体的诱导及其类型的影响

为了提高甘蓝型油菜(Brassica napus L.)花粉胚状体的诱导频率,进行了花药接种前的低温处理和接种后的高温处理,试验采用了五种不同温度的分段培养,对比了变温处理的效应。结果表明:不同基因型油菜花药培养,对变温处理的反应有差异;低、高温处理花药,对胚状体的类型有明显的影响;根据胚状体的形状和大小不同可分为五类,它们的再生植株能力不同。变温处理可以提高甘蓝型油菜花粉胚状体诱导频率和正常胚比率。     

适合全周期间作的橡胶树品种热垦628花药再生体系研究

在橡胶树体胚发生再生体系研究中，如何快速获得胚性愈伤组织是能否成功建立再生体系的关键。本研究基于课题组前期的研究基础，以橡胶树花药为外植体，通过正交试验设计方案研究了毒莠定、KT、6-BA、IAA四种激素的不同浓度组合对橡胶树花药胚性愈伤组织诱导的影响，结果表明：橡胶树花药愈伤组织诱导的最优组合培养基为MS基础培养基，硫胺素0.4 mg/L、天冬酰胺300 mg/L、水解酪蛋白100 mg/L、脯氨酸100 mg/L、精氨酸100 mg/L、谷氨酰胺100 mg/L、L-半胱氨酸-盐酸盐50 mg/L、蔗糖70 g/L、椰子水50 mL/L、植物凝胶2.2 g/L，并添加毒莠定浓度20 mg/L、KT浓度2 mg/L、6-BA浓度1 mg/L、IAA浓度0 mg/L，愈伤组织诱导率达73.3%～100%。所有处理在诱导愈伤组织25～28 d左右，愈伤组织达到快速增殖时期，对胚性愈伤组织的诱导起主要作用的是毒莠定浓度，其浓度在20～30 mg/L之间时，对胚性愈伤组织的诱导有促进作用。低浓度的毒莠定虽然也能诱导愈伤组织产生，但是这些愈伤组织几乎为无胚胎发生能力的非胚性愈伤组织。同时用获得...