水稻蛋白质双向电泳分析新方法

通过研究，建立了适合于水稻根蛋白质双向电泳分析用的磷酸缓冲液抽提、ＴＣＡ沉淀法浓缩蛋白质的新方法．本法用于水稻胚、叶片的蛋白质样品制备，也能获得稳定、清晰的双向电泳图谱．经考马斯亮蓝Ｒ２５０染色，根、叶和胚的清晰可分辨的蛋白质斑点数分别约为３５０、３５０和４００个，用银染色，斑点数分别为６００、６００和７００个．三者蛋白质的等电点总在３．０～９．０之间，大多在５．０～８．０之间，分子量在１５～１７０ｋＤ之间，大多在２５～９０ｋＤ之间     

水稻少侧根突变体MT10的双向电泳分析

用双向电泳技术分析水稻少侧根突变系MT10及其野生型IR8的根系全蛋白质组,建立二者间的差异表达图谱,得到了11个差异点,其中只在MT10中表达的蛋白点有2个,只在IR8中表达的蛋白点有4个,两者间有明显差异的蛋白点有5个。     

水稻叶片质膜的纯化及质膜蛋白质双向电泳分析

采用双水相分配法和离心法对水稻叶片的细胞质膜进行了纯化.选用聚合物Dextran T 500/PEG 3350质量分数分别为6.1%、6.2%、6.3%、6.4%、6.5%的双水相体系,对3次分配后的细胞质膜纯化效果进行了研究,并进行了细胞质膜标志酶H+-ATPase的活性测定、柠檬酸铅-醋酸铀双染色及电镜检测.结果表明:聚合物质量分数为6.3%的双水相体系可以获得高纯度的质膜微囊,且随分配次数的增加,可以有效减少其他内膜的污染,其质膜标志酶VO34--ATPase的相对活性高达93.5%.粗质膜经过3次两相分配后的蛋白质产率为2.73%.非离子型去垢剂Brij 58对质膜H+-ATPase的活性变化影响结果表明,纯化的质膜微囊封闭性较好,主要为正向型质膜微囊.质膜蛋白质经增溶缓冲液溶解及1-D SDS-PAGE的结果表明,纯化后的质膜有效减少了特定蛋白质条带的丰度,使蛋白质条带的分布更为均匀.双向电泳结果表明,纯化后的质膜双向电脉图谱具有低背景、高分辨率和重复性的优点,为进一步的水稻质膜蛋白质组研究提供了可靠的试验材料.     

水稻地方品种月亮谷与LTH叶片蛋白质的双向电泳分析

 为了研究水稻地方抗病品种月亮谷与感病品种丽江新团黑谷（LTH）在未接种稻瘟菌前蛋白质间的差异,利用双向电泳技术对月亮谷与LTH叶片的蛋白质组分进行研究。试验选用pH 4～7,17cm的IPG胶条,利用双向电泳技术分离上述两个水稻品种的稻苗叶片的蛋白质,分析其蛋白质点表达量的差异,同时选取差异显著的蛋白质点进行质谱分析。利用Gene ontology软件对这些蛋白质进行了功能分类。月亮谷与LTH叶片蛋白的双向电泳图谱得到34个差异蛋白点,对其中20个蛋白点进行质谱测定,鉴定到13个差异蛋白,包括1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亚基,3-磷酸甘油醛脱氢酶,ATP合酶,UDP-葡萄糖焦磷酸化酶,铁氧蛋白-NADP-还原酶,叶绿素a/b结合蛋白等。因此认为月亮谷与LTH叶片中主要是参与生长代谢和防御相关的蛋白质存在差异。这些蛋白在水稻与稻瘟病菌互作中的表达模式和对抗病性的贡献值得下一步深入研究。     

适用于甜玉米叶片蛋白质组分析的双向电泳技术

采用改良的TCA/丙酮法提取叶片总蛋白,建立了一套适用于甜玉米叶片的蛋白质组学研究方法,并对蛋白溶解液、蛋白上样量、第一向IEF等电聚焦时间等条件进行了优化.用改进的蛋白溶解液提取叶片总蛋白,明显减轻了离子干扰造成的蛋白点横拖;500μg蛋白上样量的检出蛋白点最丰富,可达750个以上;延长8 000 V等电聚焦至30 000 Vh可获得良好的蛋白点分离效果;采用优化条件后的双向电泳参数,结果重复性较高,检出蛋白点的线性回归相关系数可达0.93以上.     

顽拗植物荔枝蛋白质双向电泳的改良方法

研究了荔枝胚胎蛋白质双向电泳技术 ,在试样制备、电泳及银染等方面进行了技术改进 ,探索出一种可获得稳定、清晰的双向电泳图谱的方法 .凝胶银染后 ,可分辨蛋白质斑点数约有 30 0个 ,蛋白质等电点在 p H3.5- 9.5,大多在 p H5.0 - 8.0 ,相对分子质量为 150 0 0 - 90 0 0 0 ,大多为 2 50 0 0 - 70 0 0 0     

红树叶蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析

采用水溶液提取法(磷酸盐缓冲液系统)、三氯乙酸-丙酮沉淀法和Phenol改良提取法,对红树叶进行蛋白质提取,并比较分析了这3种方法的蛋白质提取率、完整性、溶解性等。结果表明:水溶液提取法得到的是胶状沉淀,基本为多糖类物质,蛋白质含量很低;三氯乙酸-丙酮沉淀法提取的蛋白质纯度较高,但双向电泳背景最低,提取率较低,蛋白质的完整性差;Phenol改良提取法的蛋白质提取率高,约为三氯乙酸-丙酮法的10倍,双向电泳凝胶背景比三氯乙酸-丙酮沉淀法要深,蛋白质的完整性好,能够被电泳分离的蛋白质点是三氯乙酸-丙酮沉淀法的7倍左右。Phenol改良提取法在蛋白质的提取率以及完整性方面远远高于其他2种蛋白质提取方法。     

垂直板小型分析型蛋白质双向电泳技术体系的改进

以荔枝嫩叶和成熟叶为材料,第1向以小型垂直板(作胶净面积82 mm×82 mm)电泳体系进行等电聚焦,采用1.0mm厚的凝胶,通过对聚焦时间进行改进,建立了快速的小型分析型蛋白质双向电泳技术体系.应用该体系获得了稳定、清晰的双向电泳图谱.经考马斯亮蓝R-250染色显示,在荔枝嫩叶和成熟叶片中清晰可辨的蛋白质斑点数有200多个.并对该体系的应用进行了初步讨论.     

黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术条件优化

双向电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。为建立适于黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术,对黄瓜根系蛋白质样品提取方法、裂解缓冲液配方及SDS-PAGE分离胶浓度等参数进行研究。结果表明:采用TCA/丙酮法提取黄瓜根系中的蛋白质,裂解缓冲液为8mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、2%IPG Buffer、4%CHAPS、1%TBP、65mmol·L-1DTT、2mmol·L-1EDTA、0.001%溴酚蓝和1%鸡尾酒,SDS-PAGE分离胶浓度为11%时,可获得分离效果较好的双向电泳图谱。该技术条件为适合黄瓜根系蛋白分离的较优双向电泳体系。     

木本植物叶片蛋白质双向电泳技术体系的建立

以2种木本植物的成熟叶片为材料,对传统的双向电泳进行改进和优化,得到1种适合于木本植物叶片蛋白质电泳分析的方法,此方法大大降低了木本植物叶片中次生代谢物质对双向电泳结果的干扰,明显改善了分析效果。     

利用双向电泳分析烯丙异噻唑诱导后水稻的蛋白质变化

本研究应用双向电泳(2-DE)技术分析了烯丙异噻唑诱导后水稻蛋白质的差异表达,所得的双向电泳图谱用PDQuest8.0.1软件进行分析,在诱导4d的双向电泳图谱上找到了10个差异表达蛋白质点,选取其中3个进行质谱(MALDI-TOF-MS)分析,将所得肽段序列在数据库搜索比对后,找到了相匹配的蛋白,它们分别具有泛醌-细胞色素C还原酶、苏氨酸肽链内切酶和苹果酸脱氢酶活性。这些蛋白可能通过提高植物的呼吸作用和启动泛肽依赖性的蛋白质降解途径的活化来参与植物的诱导抗病机制。     

野牛草种子蛋白质组双向电泳样品制备方法的分析比较

[目的]比较野牛草种子蛋白质的提取方法。[方法]以"中坪一号"野牛草种子为试材,分别采用TCA/A(三氯乙酸/丙酮)沉淀法和Trizol法提取种子蛋白,并利用条件一致的蛋白质双向电泳体系进行分析比较。[结果]TCA/A法提取的蛋白质双向电泳图谱背景噪音大,清晰度差,横向条纹较多,图谱上呈现多个形状不规则的斑点,杂色与正常蛋白质点有区别,对其他蛋白质点构成高度覆盖和遮避,影响图谱信息的准确表达;Trizol法所提取的蛋白质样品,其双向电泳图谱背景噪音小,横向条纹少,非蛋白类杂质少,无斑点间的遮避现象,蛋白质点数量增多,为野牛草种子蛋白质组定量、定性分析提供了丰富的信息。[结论]与TCA/A沉淀法相比,改进的Trizol法是野牛草种子蛋白质提取的适用方法。     

白桦雄花序发育初期蛋白质的双向电泳图谱分析

对发育初期2个时期的白桦雄花序进行的蛋白质双向电泳(two-dimemional electrophoresis，2-DE)研究结果表明，2个时期的2-DE图谱，有275个蛋白点在表达上有明显的质和量的变化。其中：162个蛋白点在5月31日雄花序2-DE图谱中的表达量均高于5月28日，110个蛋白点的表达量低于5月28日；2个蛋白点为5月28日雄花序2-DE图谱所特有；1个蛋白点为5月31日雄花序2-DE图谱所特有。这些结果为进一步获得与雄花序发育时期的相关蛋白，进而得到相关的特异基因，在分子水平上揭示白桦雄花序发育机理奠定重要基础。     

适于茭白茎部蛋白质组分析的双向电泳技术体系的建立

对茭白茎部总蛋白的提取方法,以及2-DE的条件进行了摸索比较,以期得到适合于茭白茎部组织双向聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法。结果表明:应用三氯乙酸(TCA)—丙酮沉淀法在研磨时加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP),适当增加离心、沉淀的次数和时间,并且提高裂解浓度,可以得到浓度较高,质量较好的蛋白质样品;在蛋白含量测定中减少误差,对2-DE方法中上样量的多少、等电聚焦的程序进行优化,比较并选择染色方法,最终得到蛋白质点数目多,背景清晰,条纹较少,拖尾现象不明显的电泳图谱。     

红豆杉细胞蛋白质双向电泳样品制备方法的比较

[目的]探索适用于红豆杉愈伤蛋白质组学研究的样品制备方法。[方法]以红豆杉愈伤组织为材料,分别采角三氯乙酸（TCA）／丙酮沉淀法、Tris—HCl法和酚-甲醇／醋酸铵沉淀法提取其中的总蛋白,通过双向电泳（2DE）检测3种方法对总蛋白的提取效果。[结果]3种方法提取的蛋白样品2DE图谱显示的蛋白点数量均较多。TCA／丙酮沉淀法对蛋白质的提取率较高,2DE图像清晰,条纹少,拖带现象轻;Tris—HCl法提取的蛋白样品2DE图谱个别区域出现较轻的云片状聚集,并有轻微拖带现象;酚-甲醇／醋酸铵沉淀法提取蛋白样品的2DE图谱有条纹和拖带现象。[结论]TCA／丙酮沉淀法提取的蛋白质质量较高,所得图谱背景清晰,蛋白质信息量大。     

苹果叶片蛋白质双向电泳样品制备方法的比较

 为探索适用于苹果叶片蛋白质组学研究的样品制备方法,比较了三氯乙酸/丙酮沉淀法（TCA）、酚-甲醇/醋酸铵沉淀法和Tris-HCl提取法等3种总蛋白质的提取方法。制备的样品经双向电泳分离采用银染显色。结果3种方法分别得到450、374和1032个蛋白质点。认为Tris-HCl提取法为最适方法,所得图谱背景清晰,蛋白质信息量最大。     

适用于毛白杨芽双向电泳分析的蛋白质提取方法

本实验以毛白杨芽为实验材料,采用Tris鄄酚法、三氯乙酸/ 丙酮法和三氯乙酸/ 丙酮+ Tris鄄酚法对其蛋白质提 取方法进行比较,采用双向电泳分离蛋白质,通过PDQuest 软件和质谱对这3 种提取方法得到的双向电泳胶进行分 析。结果显示,三氯乙酸/ 丙酮法得到的蛋白点数量为231 ±4,得到的鲜样中的总蛋白质含量为(3.57 ±0.618) mg/ g,均高于其他两种提取方法,并且所得到的双向电泳胶更清晰,为毛白杨芽蛋白质提取的最适方法。      

水稻胚乳双向电泳技术体系的优化分析

为比较同一杂交组合不同直链淀粉含量后代在灌浆期胚乳内蛋白表达差异,文章建立了一套适合灌浆期水稻胚乳蛋白的双向电泳技术,探讨了胚乳蛋白的提取、等电聚焦上样量的选择、胶条转移等双向电泳的一些关键技术.结果表明,一次溶解蛋白样品,TCA-丙酮法优于酚法蛋白提取,300 μg上样量为最适上样量,能得到清晰、分离效果好、蛋白点数较多的图像.     

ISO-DALT双向电泳方法的优化与改进

通过对ISO-DALT双向电泳技术进行优化与改进,建立了一套适合于UV-B胁迫下水稻蛋白质组分析的双向电泳技术.用此方法对经低剂量UV-B辐射处理的水稻品种IR64的叶片蛋白进行双向电泳,可以分辨出1200-1300个蛋白(肽)点,等电点(pI)在3.5-9.3之间,相对分子质量在10-120 ku之间,分辨率较高,且重复性较好.     

龙眼种子蛋白质组双向电泳技术的优化

为建立适用于龙眼(Dimdcarpus longanaLour.)种子蛋白质组研究的双向电泳技术,对龙眼种子蛋白质的IEF、平衡时间及染色方法等关键步骤进行了优化。结果显示,龙眼种子蛋白质主要分布在pH4-7范围内,采用酚抽法,在聚焦达到50000 W.h的情况下能充分地聚焦,等电聚焦后经平衡缓冲液Ⅰ还原15 min,再经平衡缓冲液Ⅱ二次平衡20 min,考马斯亮蓝染色,24 cm IPG胶条上样量为1.2 mg时,在龙眼种子双向电泳图谱上检测到1000个多个蛋白点,蛋白点清晰,分辨率较好。本研究所建立的一套适用于龙眼种子蛋白质组分析的双向电泳方法分辨率和重复性较高,重复样品图谱间的相关系数在0.88-0.945之间。