宛氏拟青霉提取物增强水稻抗低温胁迫的最佳施用水平

【目的】施用生物刺激素是可持续农业中缓解作物低温胁迫的重要措施。本文主要研究了本课题组从野生沙棘内生菌提取的一种新型生物刺激素（宛氏拟青霉提取物）增强水稻抗低温胁迫的最佳施用浓度和生物学机制。【方法】通过室内培养，于野生沙棘体内分离出宛氏拟青霉 (Paecilomyces variotii) 菌株，菌株再经发酵和提纯获得供试生物刺激素PVE (Paecilomyces variotiiextracts)。以水稻为试验材料设置了萌发和液培试验，试验设0、0.05、0.10、0.20、0.50和1.00 μg/L 6个PVE施用水平，研究了低温 (15℃) 胁迫下不同浓度PVE对水稻种子萌发、幼苗生长、根系发育、光合特性和氧化损伤的影响。【结果】1)施用PVE的各处理提前打破了种子休眠，种子发芽率在第5天和第6天较CK分别提高66.7%～106.7%和28.2%～47.8%。2) PVE在0.05～0.50 μg/L浓度范围较CK显著增加地上部生物量7.9%～20.4%，提高了根系重量12.5%～28.1%。3) PVE在0.10 μg/L浓度条件下，较CK显著提高水稻总根长、根表面积、根体积和根平均直径48.0%、36.6%、36.2%和35.2%。4) PVE在0.05～0.50 μg/L浓度范围较CK显著提高水稻叶片光合速率5.1%～34.4%，并提高了叶片气孔导度和蒸腾速率。5) PVE在0.10 μg/L浓度条件下较CK显著提高叶片SOD、CAT和POD活性46.9%、9.6%和18.4%，提高根系SOD、CAT和POD活性28.0%、12.7%和16.4%，并显著降低叶片和根系中MDA含量22.0%和29.8%。6) PVE在0.05～0.50 μg/L浓度范围内均具有缓解低温胁迫的能力，以0.10 μg/L为最佳施用浓度。当超过0.10 μg/L，PVE对低温胁迫的缓解能力随着施用浓度的提升反而减弱。【结论】PVE在0.10 μg/L的浓度下可提高叶片光合能力和减少细胞氧化损伤，增加根系吸收养分的面积，显著缓解低温对水稻幼苗的胁迫。建议PVE的施用水平为0.10 μg/L。     

ICP-MS测定植物样品中的砷和硒含量

研究建立了 ICP-MS 检测植物样品中砷和硒含量的检测方法。优化了 ICP-MS 的 STD、Oxygen-DRC、KED、Methane-DRC 四种工作模式下的 GF 和 RPq 值,并通过 6 种不同基质的标准物质,考察了不同工作模式测定砷和硒的准确度。结果表明,测定植物样品中的砷含量可优先选择Oxygen-DRC 模式监测⁹¹As O⁺和 KED 模式监测⁷⁵As⁺,检出限分别为 0.023 μg/L、0.031 μg/L;测定硒含量时可选择 Methane-DRC 模式监测⁸⁰Se⁺和 KED 模式监测⁷⁸Se⁺,检出限分别为 0.014 μg/L、0.144 μg/L。方法的加标回收率在 85.3%～109.1%,RSD 均小于 3%,适用于大量植物样品的测定。     

L-色氨酸生产菌株TPO1发酵条件研究

对L-色氨酸生产基因工程菌TP01发酵的接种量、发酵温度和溶氧等条件进行了研究。结果表明,该菌株的最佳发酵条件初始培养基组成为葡萄糖30 g/L、硫酸铵40 g/L、酪氨酸0.2 g/L、玉米浆25 mL/L、磷酸氢二钾10 g/L、磷酸二氢钾5 g/L、七水硫酸镁2 g/L、硫酸钠0.002 g/L、七水硫酸亚铁0.01 g/L、维生素B1 100 μg/L、维生素H 50 μg/L,流加糖为浓度70%的葡萄糖(质量体积比),pH为7.0,温度为37 ℃,接种量为10%,溶氧控制在20%~30%。     

玉米赤霉烯酮的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

采用时间分辨荧光技术建立高灵敏的玉米赤霉烯酮（ZEN）间接竞争免疫分析法（ZEN-TRFIA）。以玉米赤霉烯酮人工抗原（ZEN-BSA）包被96孔板为固相抗原，与ZEN标准或样品中的ZEN共同竞争有限的抗ZEN的单抗；用稀土离子Eu3+标记的羊抗鼠抗体进行示踪。该方法的灵敏度为0.01 μg/L（10ppt），测量范围为0.01-20 μg/L，批内和批间变异分别为7.2%和14.6%，平均回收率为94.4%，与玉米赤霉醇（ZER）的交叉反应率为15.16%。7条不同时间进行的ZEN-TRFIA的效应点值ED20、ED50、ED80分别为0.156±0.035 μg/L、0.634±0.091 μg/L和2.595±0.274 μg/L。试剂盒4℃保质期超过6个月。研究表明，ZEN-TRFIA是目前报导的ZEN检测中较灵敏的方法，该分析方法稳定性好，货架期符合要求，可测范围宽，具有很好的应用前景。     

二氟沙星残留检测直接竞争ELISA方法的建立

应用分泌抗二氟沙星(DIF)单克隆抗体(DIFmAb)的杂交瘤细胞株建立直接竞争ELISA分析方法.特异性实验结果表明,与达氟沙星的交叉反应率为0.32%,与其它氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应,该方法对DIF的检测限可达到0.1μg/L,半数抑制浓度IC(50)为2.2 μg/L,线性范围0.1～128.0μg/L,平均批内和批间变异系数小于15%.对牛奶和鸡肉分别添加0.4、2.0、10.0和50.0μg/L DIF标准品.平均回收率分别为89.3%和83.9%.直接竞争ELISA准确度高、重复性好、特异性强,适用于DIF残留快速检测的推广应用.     

微波消解—ICP-MS法测定有机肥料中8种元素

采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定,来比较不同混合酸体系对有机肥料中As、Pb、Cd、Cr、Hg、Ni、Cu、Zn 8种元素的提取效果,建立了微波消解—ICP-MS测定有机肥料多元素含量的方法。研究结果表明,8种元素在0.10～1600 μg/L质量范围内线性关系良好,线性相关系数为0.99970～0.99995,检出限范围为0.003～0.400 μg/L。三水平加标回收率范围为81.8%～108.0%,相对标准偏差为0.9%～4.9%(n=6)。国家标准物质灌木枝叶GBW07603(GSV-2)除汞元素缺少相应的认定值以外,其余7种元素的测定值均在标准物质证书认定值的范围内,且相对标准偏差为0.5%～5.0%(n=6)。该方法灵敏度、准确度高,可实现有机肥料中多元素的通量检测。     

磁性石墨烯固相萃取-液相色谱串联质谱法测定有机肥料中镇静剂类和β-受体激素类药物残留

采用磁性石墨烯固相萃取结合超高效液相色谱串联质谱技术,建立了有机肥料中8种镇静剂类和15种β-受体激素药物残留的分析检测方法。样品采用0.1%甲酸乙腈提取,通过磁性石墨烯粉固相萃取吸附目标物,除去杂质,然后再解吸目标物。经Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 (3.0 mm×100 mm,1.8 μm)色谱柱分离,串联质谱进行检测,标准曲线内标法定量。结果表明:23种目标物在0.5～10.0 μg/L范围内线性关系良好(R2>0.999)。在有机肥料样品基质中,目标化合物2、5、10 μg/kg 3个加标水平的平均回收率在75.1%～102.4%之间,相对标准偏差为4.3%～14.3%(n=6)。该方法净化效率高、适用范围广,可用于有机肥料中镇静剂类和β-受体激素类药物残留筛查和检测。     

柴油机多环芳香烃类污染物的测量方法

采用聚四氟乙烯滤膜及XAD-2吸附管采集、超声和索氏提取、气-质联用（GC/MS）分析等方法对柴油机排气中多环芳香烃类污染物进行了定性、定量分析。结果表明,在试验浓度范围内,多环芳香烃（PAHs）各组分的浓度与峰面积的线性关系良好,线性相关系数在0.99以上。线性范围较宽,为0.0125～80 μg/mL。该方法样品采集效率较高,样品提取效率均在95%以上。方法重复性较好,相对标准偏差低于15%,滤膜样品的回收率为70.1%～95.9%,吸附剂样品的回收率为77.0%～102.6%。灵敏度高,检出限在0.04 μg/m3以下。该方法适用于柴油机排气中PAHs含量的快速分析。     

双道原子荧光光谱同时测定土壤中砷、汞的方法研究

研究了土壤中总As、总Hg的同时测定方法,并对消化体系进行了筛选,利用正交试验设计法对测试条件进行了优化.建立了用王水消解样品,在10%盐酸溶液中用双道原子荧光光度计同时测定土壤中As、Hg的新方法.方法线性范围宽(As 0～200μg/L;Hg 0～10μg/L);检出限低(As 0.05μg/L;Hg 0.007μg/L);As的回收率为96.0%～101.0%,Hg的回收率为97.0%～103.7%;相对标准偏差(RSD)As为2.7%,Hg为4.5%.该方法准确、简便、快速,结果令人满意.     

抗苯巴比妥单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及ciELISA试剂盒的研制

用BSA-pAPB免疫Balb/c小鼠，用细胞融合技术制备并用间接ELISA和阻断ELISA筛选抗苯巴比妥单克隆抗体(PB mAb)杂交瘤细胞株，体内诱生腹水法生产PB mAb，应用PB mAb研制PB残留竞争ELISA(ciELISA)快速检测试剂盒(PB-Kit)，并测定其性能。结果表明，筛选出3株杂交瘤细胞，最好的3F6-C4株的PB mAb间接ELISA效价为1∶6.4×105，亲和常数(Ka)为1.96×1010 L/moL，半数抑制浓度(IC50)为5.7 μg/L，与巴比妥的交叉反应率(CR%)12.4%，与其它化合物无CR；PB-Kit的线性检测范围1.0～81 μg/L，灵敏度0.75 μg/L，检测限1 μg/L；饲料样和猪尿样的平均添加回收率85.8%和91.3%，平均批内和批间变异系数均<15%。PB-Kit具有快速、敏感、特异、简便等特点，适合PB残留快速检测的推广应用。     

The quantitative analysis of thiamin and riboflavin and their respective vitamers in fermented alcoholic beverages

This research aimed to develop a simple and effective method for analyzing thiamin (B(1)), riboflavin (B(2)) and their respective vitamers by high performance liquid chromatography (HPLC) in fermented alcoholic beverages. The method developed here employs a phosphate buffer/methanol gradient elution on a single reverse phase column, coupled with independent fluorescent detection regimes. It also employs a precolumn derivatization to convert thiamin to thiochrome via an alkaline potassium ferricyanide solution. The method described here allowed a spike recovery of better than 97%, with a typical linear detection range (R(2) ≥ 0.9997) between ≤ 5 and ≥ 500 μg/L for all vitamers studied. Lager style beers were found to contain significantly (p < 0.001) less thiamin than other tested styles of beers (lager, 35.7 μg/L; ale, 88.3 μg/L; stout/porters, 104.4 μg/L; wheat beers, 130.7 μg/L), which may be due to the raw material and extensive processing that occurs for this style. There was no statistical difference (p = 0.608) between the riboflavin content of each beer style. Furthermore, wines and ciders contain less thiamin and riboflavin than beer, which is also likely to be due to the base materials used and the differences in processing steps to produce these beverages.     

大豆、玉米幼苗根细胞壁的制备与表面性质

根细胞壁对于植物养分吸收积累以及植物的环境抗性或耐性方面的作用和影响与细胞壁表面性质密切相关。本研究采用改进的匀浆洗涤法提取大豆（Glycine max L.,Type I细胞壁类型植物）、玉米（Zea mays L.,Type II细胞壁类型植物）幼苗的根细胞壁物质,获得了较好的细胞壁材料纯度。测定了根细胞壁材料以及整根的阳离子交换量（CEC）,并通过拟合解析根细胞壁的电位滴定曲线求解根细胞壁表面基团的解离常数pKa以及数量。结果表明,大豆的根细胞壁CEC显著（p0.05）高于玉米的根细胞壁CEC,分别为425±5、162±7 μmol/g,DW;大豆的根CEC也显著（p0.05）高于玉米根,与两种植物根细胞壁CEC的差异一致。从两种植物的根细胞壁上均识别出一种表观pKa值约为5.78的羧基基团。大豆根细胞壁的羧基含量也显著（p0.05）高于玉米根细胞壁,分别为604±15、252±4 μmol/g,DW,大豆根或根细胞壁的CEC较高与Type I细胞壁富含羧基有关。本文还进一步讨论了不同细胞壁类型植物的根细胞壁表面性质对于植物的营养过程以及环境胁迫抗性或耐性方面的影响与意义。     

Bovine colostrum: determination of naturally occurring steroid hormones by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS)

The aim of this study was to collect further data about levels of endogenous hormones in foodstuffs derived from animal production. Because of expected higher concentrations of especially estrogens in colostrum compared to other foodstuffs, our investigation focused on this matrix. For evaluation of endogenous steroid hormones in separated colostrum (fat and defatted fraction) and colostrum powder, the relevant free and conjugated estrogens (estradiol-17β, estradiol-17α, estrone, and estriol) androgens (androstendione, 19nor-androstendione, 19nor-testosterone-17β, 19nor-testosterone-17α, testosterone-17β, and testosterone-17α), and progesterone were determined by means of liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Upmost determined concentrations were found in the fat fraction, with 25.56 and 7.59 μg/L for estrone and androstendione, respectively. In defatted milk and colostrum powder, conjugated estrogens dominated, whereas total (free and conjugated) estrone (5.51 μg/L; 15.0 μg/kg) exceeded estradiol-17α (2.66 μg/L; 7.5 μg/kg) and estradiol-17β (2.28 μg/L; 3.3 μg/kg). Neither 19nor-steroids nor estriol were detected in colostrum fractions or processed colostrum.     

铁炉渣施加对稻田水养分动态的影响

为了阐明铁炉渣施加对稻田水养分动态的影响,对福州平原稻田不同铁炉渣施加水平下稻田水养分动态进行测定与分析。结果表明:对照、处理一、处理二、处理三样地稻田表层水中磷酸盐含量分别为657.3,622.2,546.8,474.1μg/L;铵氮含量分别为3.9,3.5,3.1,2.4mg/L;硫酸盐含量分别为82.8,69.1,66.0,69.6mg/L;溶解性有机碳含量分别为13.1,14.4,14.2,13.4mg/L。0-10cm土壤水中磷酸盐含量分别为135.4,141.7,161.1,201.4μg/L;铵氮含量分别为3.0,4.8,5.5,5.1mg/L;硫酸盐含量分别为84.6,59.1,81.6,70.6mg/L;溶解性有机碳含量分别为37.6,46.0,44.5,43.6mg/L。10-20cm土壤水中磷酸盐含量分别为68.6,100.3,113.8,141.6μg/L;铵氮含量分别为4.7,4.9,8.7,5.6mg/L;硫酸盐含量分别为81.9,75.1,62.8,60.0mg/L;溶解性有机碳含量分别为55.5,43.8,58.3,48.8mg/L。20-30cm土壤水中磷酸盐含量分别为138.0,156.1,166.6,188.6μg/L;铵氮含量分别为2.3,2.3,4.2,4.7mg/L;硫酸盐含量分别为78.6,61.5,70.2,73.3mg/L;溶解性有机碳含量分别为49.4,42.8,50.1,45.4mg/L。表层水中磷酸盐、铵氮和硫酸盐含量对照样地高于处理样地,0-30cm土壤水中磷酸盐、铵氮对照样地低于处理样地,硫酸盐含量高于处理样地,溶解性有机碳变化特征不明显。     

烟草根系分泌物酚酸类物质的鉴定及其对根际微生物的影响

【目的】烟草连作已导致土传病害发生、 烟株生长受抑制、 产量下降和品质恶化等问题。烟株对自身及土壤微生物产生的化感作用,是烟草产生连作障碍的一个重要原因,其中化感物质中的根系分泌物是烟株与土壤微生物间相互作用的重要物质,探索烟草根系分泌物对根际微生物生长的影响是生物防控烟草青枯病的理论依据。【方法】本文利用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术,分离、 鉴定烟草根系分泌物中主要酚酸类物质的种类和含量; 通过添加外源酚酸类物质,研究在液体培养基中烟草根系分泌物中的主要酚酸类物质对病原菌及拮抗菌的影响,并在土壤中添加鉴定出的主要酚酸类物质; 通过土壤培育试验,研究其对土壤微生物多样性和数量变化,特别是对烟草青枯病菌及其拮抗菌生长的影响。【结果】1)烟草根系分泌物粗提物对病原菌(茄科劳尔氏菌)生长的促进率为16.8％,对拮抗菌(短短芽孢杆菌)的生长抑制率达到29.4％; 2)UPLC-Q-TOF/MS检测根系分泌物中主要酚酸类物质为苯甲酸和3-苯丙酸,含量分别为0.25 μg/g干根重和1.15 μg/g干根重; 3)液体培养外源添加低浓度的苯甲酸(≤ 2 μg/L)和3-苯丙酸(≤ 3 μg/L)促进病原菌和拮抗菌的生长; 4 μg/L的苯甲酸对病原菌生长抑制作用不显著,对拮抗菌生长的抑制率达到90.2％,6 μg/L的 3-苯丙酸对病原菌的生长具有促进作用,对拮抗菌的生长抑制率达到81.1％,外源高浓度苯甲酸(≥4 μg/L)和3-苯丙酸(≥ 7 μg/L)抑制病原菌与拮抗菌的成长; 4)土壤中添加3 μg/kg土的苯甲酸时,土壤中病原菌的数量增加12.3％,而拮抗菌的数量减少21.0％,土壤细菌、 放线菌和真菌的数量分别降低37.5％,41.9％和55.6％; 3-苯丙酸浓度达到8 μg/kg土时,拮抗菌生长量减少14.5％,对病原菌没有显著影响,土壤细菌、 放线菌和真菌的数量分别降低69.9％,57.2％和80.7％; 5)土壤添加4 μg/kg的苯甲酸和7 μg/kg的3-苯丙酸后,土壤微生物Shannon指数、 Simpson指数、 McIntosh指数显著下降,分别仅为对照的57.7％、 94.1％、 88.1％和97.6％ 73.3％、 80.0％。【结论】烟草根系分泌物粗提物促进病原菌生长抑制拮抗菌生长,根系分泌物中酚酸类物质主要为苯甲酸和3-苯丙酸,液体培养中4 μg/L的苯甲酸或6 μg/L的 3-苯丙酸浓度是对病原菌生长抑制不明显但显著抑制拮抗菌生长的分界点,土壤外源添加3 μg/kg的苯甲酸或8 μg/kg的3-苯丙酸时,是土壤增加病原菌减少拮抗菌数量的分界点,同时土壤微生物功能多样性显著下降,病原菌对根系分泌物中苯甲酸和3-苯丙酸的利用优于拮抗菌,这也是烟草长期连作引起青枯病暴发流行的机理之一。     

Novel application of square-wave adsorptive-stripping voltammetry for the determination of xanthohumol in spent hops

This paper reports the development of a novel electrochemical assay for xanthohumol (XN) by square-wave adsorptive-stripping voltammetry (SWAdSV) with a hanging mercury drop electrode. The method showed good repeatability (CV < 2%) and linearity (between 10 and 250 μg L(-1)), as well as suitable limits of detection (2.6 μg L(-1)) and quantification (8.8 μg L(-1)). The method was applied for the quantification of this compound in spent hops, and the results obtained were compared with the HPLC-UV method. XN contents determined by the SWAdSV method were 16 ± 1 and 100 ± 4 μg L(-1) for aqueous and methanolic extracts, respectively. The developed new methodology considerably reduces the analysis time, approximately from 25 min (HPLC-UV method) to 7 min, enabling a high sample throughput. In addition, the detection and quantification limits were approximately 5-fold lower than those obtained with the chromatographic method.     

太湖地区典型水稻土FDA水解酶活性的剖面分布特征

本文主要对太湖地区12个典型水稻土剖面的荧光素二乙酸酯(FDA)水解酶活性及其它相关酶活性进行了分析。耕作层的FDA水解酶活性最高,随土层加深活性明显下降,其中部分土壤在犁底层已经很难检测到其活性。部分样点的酶活性在剖面中呈明显的梯度下降趋势。高产水稻土壤表层FDA水解酶活性差异较大,在50～100g/(g.h)范围内,多数为60～80g/(g.h)。土壤酶活性最高与最低间的差异达到近一倍左右。同时FDA水解酶活性与-葡糖苷酶、脲酶、脱氢酶、酸性磷酸酶和芳基硫酸酯酶活性之间有极显著正相关关系(P0.01),与碱性磷酸酶呈显著相关(P0.05);与土壤养分指标如全氮、全磷、速效氮、有机碳之间有极显著相关性,与土壤pH呈显著负相关(P0.01)关系。