颠茄高频再生体系的建立及卡那霉素抗性筛选（摘要）

[目的]建立颠茄高频再生体系及筛选卡那霉素（Kan）抗性。[方法]以颠茄叶片及腋芽为外植体,研究了培养基中6-BA和NAA不同配比对其不定芽分化的影响以及叶片不定芽对Kan的敏感性。[结果]MS＋4.5mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA为叶片不定芽分化的最佳培养基,不定芽分化率达100%,在1.0cm×1.0cm叶块上的不定芽分化数平均达5.85;MS＋3.0mg/L6-BA＋0.1mg/LNAA为腋芽不定芽分化的最适培养基,不定芽分化率达100%,每个腋芽不定芽分化平均数为4～8个;400.0mg/LKan为颠茄叶片遗传转化的最佳筛选浓度。[结论]为颠茄无菌苗的快速繁殖以及基于叶盘法的遗传转化奠定了基础。     

茶菊再生体系及其卡那霉素筛选体系的建立

[目的]建立高效的茶菊再生体系和卡那霉素筛选体系。[方法]以茶菊叶盘和茎段为外植体,以MS为基本培养基,通过添加不同浓度的6-BA和N从设计不同的培养基,研究茶菊叶盘和茎段的最适分化条件,并进行卡那霉素敏感性试验,研究其对不定芽诱导和生根的影响。[结果]茶菊叶盘和茎段直接分化不定芽的最适培养基分别为MS＋6．BA1．0mg／L＋NAA0．3mg／L和MS＋6．BA2．0mg／L＋NAA0．1mg／L,茶菊生根较容易,在5种培养基上生根率均可达100％;茶菊对卡那霉素反应较为敏感,20．0mg／L卡那霉素即可抑制叶盘的分化,40．0mg／L的卡那霉素可抑制茎段的分化,30．0mg／L卡那霉素可抑制小苗的生根。6cm左右长的生根无茵苗经炼苗和移栽后成活率为100％。[结论]该试验为茶菊的进一步遗传转化提供了基础。     

辣椒子叶再生体系及其卡那霉素筛选体系的建立

以中椒2号辣椒为材料,建立了高效的辣椒子叶再生体系和卡那霉素筛选体系。结果表明,最佳的不定芽诱导培养基为MS+BA5.0 mg/L+IAA0.5 mg/L+AgNO36.0 mg/L,最佳的不定芽伸长培养基为MS+BA5.0 mg/L+IAA0.5 mg/L+GA32.0 mg/L+AgNO36.0mg/L,最佳的生根培养基为MS+IAA1.0 mg/L,卡那霉素最终筛选浓度为50 mg/L。     

盖杨叶片高频植株再生体系建立

[目的]利用生物技术手段提高盖杨抗寒性并扩大其栽培区域。[方法]以盖杨叶片为外植体,研究不同激素组合对盖杨叶片分化及生根的影响,建立盖杨叶片高频植株再生体系。[结果]盖杨不定芽分化最适培养基配方为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.20 mg/L+蔗糖25 g/L+琼脂6.0 g/L,p H 6.5,不定芽再生频率为96.67%,平均分化芽数20.3个;最适生根培养基配方为1/2MS+IBA0.3 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂6.0 g/L,p H 6.0,生根率可达100%,平均生根数15.8条。[结论]该研究建立了盖杨高效组织培养再生系统,为该杨树品种的快速无性繁殖和基因的遗传转化提供了依据。     

洋桔梗高频再生系统的建立及其卡那霉素敏感性测定

以Double Mariachi Pink洋桔梗叶片为外植体,研究了切割方式、培养基中6-BA与NAA配比对其不定芽分化的影响以及叶片不定芽分化对卡那霉素(Km)的敏感性。结果表明:五刀切与三刀切对不定芽分化数量的影响无显著性差异;MS 1.0 mg/L6-BA为叶片不定芽分化的最适培养基,不定芽分化率达100%,在1.0 cm×1.0 cm叶块上的不定芽分化数平均达25.4;25 mg/L Km为抑制叶片不定芽分化的最低浓度。     

黄瓜高频再生体系的建立

【目的】建立黄瓜的高频再生体系,为黄瓜种质的遗传转化奠定基础。【方法】分别以华北型黄瓜种质26号、欧洲型黄瓜种质14-1为材料,研究不同激素组合、AgNO3质量浓度、苗龄、子叶切割方式及外植体接种方式对黄瓜子叶节不定芽诱导的影响。【结果】华北型黄瓜种质26号再生的最适激素组合为4.0mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA+1.0mg/L AgNO3,再生率与再生系数分别可达85.00%和2.51;欧洲型黄瓜种质14-1再生的最适激素组合为3.0mg/L 6-BA+2.0mg/L ABA+1.0mg/L AgNO3,再生率与再生系数分别可达86.70%和2.77;5d苗龄的黄瓜子叶作为外植体时诱导不定芽的状态最佳;切除子叶端部2/3且基部附带有1mm子叶柄、以叶背向下子叶柄微插入的方式进行接种再生效率最高。【结论】建立了黄瓜种质14-1和26号材料的高频再生体系,再生率均可达85%以上。     

马铃薯茎段高频再生体系的建立

以大西洋、春薯3号、春薯5号、吉薯1号马铃薯脱毒试管苗为试验材料,对茎段再生体系进行研究,筛选与优化马铃薯再生体系的条件,以期建立马铃薯高频再生体系。结果表明:大西洋的愈伤组织诱导及分化效果最佳,诱导的愈伤组织呈鲜绿色,诱导出芽用时最短,诱导率和分化率分别为100%和95%。春薯3号、春薯5号、吉薯1号的分化率分别达79.4%、68.75%、85.7%。其中在添加2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.4 mg/L KT的MS培养基中,四个品种马铃薯的茎段均能形成愈伤组织,20 d愈伤组织诱导率均达100%。     

非洲紫罗兰花梗高频再生体系的建立

以非洲紫罗兰的花梗为外植体进行组织培养,建立了高频再生体系。实验结果表明:非洲紫罗兰的花梗是理想的外植体;改良的MS+1.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.1 mg·L~(-1) NAA培养基既适宜初代培养又适宜继代培养,在初代培养可以诱导出愈伤组织,出愈率高达100%,在继代培养中可再分化不定芽,出芽率100%,在改良的MS+NAA0.1-0.5 mg·L~(-1)范围均可诱导生根,生根率100%。     

绶草高频再生体系建立的研究

[目的]建立绶草高频再生体系.[方法]以野生绶草的花序轴为外植体,对外植体进行消毒和预培养后,以MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA筛选最适诱导培养基;以MS为基本培养基,添加不同浓度6-BA和IAA筛选最适增殖培养基;以1/2 MS为基本培养基,添加不同浓度NAA筛选最适生根培养基.[结果]最适诱导培养基为MS＋ 6-BA2.0,最适增殖培养基为MS＋ 6-BA15＋IAA0.4,最适生根培养基为1/2MS＋ NAA1.5.[结论]该研究对绶草优良品种的改良和次级代谢产物研究有重要意义.     

大白菜真叶高频再生体系的建立

【目的】建立大白菜真叶高效再生体系。【方法】选择‘06J28’、‘92S105’、‘06J30’、‘06J31’4种不同基因型大白菜作为试验材料,以刚长出第2片真叶的大白菜幼苗的第1片真叶为外植体,研究不同激素(6-BA、NAA、TDZ)组合、外植体切割与接种方式以及不同基因型对真叶不定芽再生的影响。【结果】在MS+4.0mg/L 6-BA+0.14mg/L NAA培养基上培养时,‘06J28’真叶不定芽再生率和再生系数达到最大分别为87.63%和2.62;在MS+0.3mg/L TDZ+0.14mg/L NAA培养基上培养时,‘06J28’真叶不定芽的再生率和再生系数分别为80.73%和1.89,表明TDZ的作用与6-BA相似。在真叶柄基部和下胚轴交接处横切,保留完整真叶作为外植体为最佳切割方式,以真叶柄的下端竖直向下插入培养基为最佳接种方式。在供试的4种基因型材料中,‘06J28’真叶的再生率最高,达87.63%;‘92S105’的再生系数最高,达3.76。【结论】建立了大白菜真叶高效再生体系,为大白菜转基因研究奠定了基础。     

豫南地区颠茄草害虫及其天敌种类的初步调查

在颠茄草生长季节,定期、定点调查颠茄草害虫及其天敌种类和发生情况,结果表明,豫南地区颠茄草害虫(包括螨、贝)有20种,颠茄草害虫天敌有11种,严重危害颠茄草的害虫主要是铜绿丽金龟、枸杞负泥虫和棉铃虫。     

颠茄H6H基因的克隆及高效植物表达载体的构建（摘要）

[目的]克隆颠茄（Atropa belladonna）H6H基因并构建高效植物表达载体。[方法]采用RT-PCR方法从颠茄（Atropa belladonna）中克隆莨菪碱-6β-羟化酶和1,4-丁二胺-氮-甲基转移酶基因编码区,插入经改造后获得双元三价植物高效表达载体p2301-gus,构建植物表达载体p2301-H6H,并将该表达载体导入根癌农杆菌LBA4404和发根农杆菌C58C1。[结果]获得了可直接用于遗传改良的颠茄工程菌p2301-H6H-LBA4404和p2301-H6H-C58C1。     

颠茄H6H基因的克隆及高效植物表达载体的构建

[目的]克隆颠茄（Atropa belladonna）H6H基因并构建高效植物表达载体。[方法]采用RT—PCR方法从颠茄中克隆莨菪碱-6β羟化酶和1,4丁二胺-氮-甲基转移酶基因编码区,插入经改造后获得双元三价植物高效表达载体P2301-gus,构建植物表达载体p2301-H6H,并将该表达栽体导入根癌农杆菌LBA4404和发根农杆菌C58C1。[结果]获得了可直接用于遗传改良的颠茄工程茵p2301-H6H-LBA4404和p2301-H6H-C58C1。[结论]为利用植物基因工程技术提高颠茄中生物碱含量奠定了基础。     

原种黑麦草组培再生体系建立初探

[目的]探索原种黑麦草愈伤组织诱导和植株再生方法,为多年生黑麦草原种的转基因研究奠定基础。[方法]以多年生黑麦草原种成熟种子为外植体,在组织培养条件下,施以不同浓度的激素进行培养,研究不同激素组合对愈伤组织诱导以及植株再生的影响。[结果]MS基本培养基中添加5.0 mg/L 2,4-D时愈伤组织诱导率最高,达64.85%;愈伤组织在MS附加1 mg/L 6-BA和0.5 mg/L IBA的分化培养基中分化率最高,为37%;不定芽在添加0.1 mg/L IBA的生根培养基中生根率为96%。[结论]黑麦草原种愈伤组织再生体系成功建立。     

白三叶草高频率植株再生系统的研究

通过对白三叶草子叶和下胚轴植株再生系统的研究发现 ,白三叶草胚轴生长点的再生能力最强 ,子叶和下胚轴再生能力极低 ;胚轴生长点直接再生频率在 6 6 %以上 ,以 6BA 3mg/L时再生频率最高 ,达 95 % ;再生植株的快速繁殖以 6BA 1～ 2mg/L ,NAA0 .5～ 0 .8mg/L较适宜 ;生根培养以IBA0 .1～ 0 .3mg/L ,NAA0 .1～ 0 .2mg/L较适宜     

贯叶金丝桃离体培养及植株再生体系的建立

[目的]研究贯叶金丝桃的组培快繁技术,以提高其繁殖率和生根率,并建立一套高效的离体培养再生体系。[方法]以贯叶金丝桃幼芽为外植体,对适宜的丛生芽繁殖和生根培养基进行了筛选。[结果]适宜的繁殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L;适宜的生根培养基为1/2 MS+IAA 0.5 mg/L+ABT 0.2 mg/L。[结论]研究结果为贯叶金丝桃的种质保存和良种选育工作奠定了基础。     

金鱼草高效植株再生体系的建立

[目的]探索利用组织培养技术对优良品种的金鱼草进行快速繁殖的研究。[方法]以金鱼草无菌苗不同部位为外植体,在MS+2.0mg/LBA+0.2mg/LNAA的培养基上进行再生频率比较。[结果]结果表明,下胚轴的再生率最高;把下胚轴再生的芽接种到增粗培养基上进行再生芽的诱导,可以得到100%的再生率。[结论]该研究为金鱼草的高效转化提供了试验依据。