甘西鼠尾草ISSR-PCR反应体系的建立与优化

采用单因素试验和4因素3水平的正交试验相结合的方法,建立和优化甘西鼠尾草稳定的ISSR-PCR反应体系。结果表明,甘西鼠尾草20 ul ISSR-PCR体系中各因素的最佳浓度:10×Buffer(Mg2+)2μl,d NTPs 0.4 mmol/L,Tag酶1.0 U,引物0.3μmol/L,DNA 30 ng。     

高加索三叶草ISSR-PCR反应体系的建立与优化

高加索三叶草(Trifolium ambiguum Bieb.)是许多干旱和寒冷地区可以种植并在各方面表现优良的三叶草种,建立适用于高加索三叶草的ISSR反应体系,将为ISSR标记技术在三叶草属品种资源研究中的应用提供参考.本试验通过优化影响高加索三叶草ISSR-PCR的主要参数,建立适于高加索三叶草的ISSR反应体系和扩增程序.在25μL体系中各反应物的最适含量为:20 ng模板DNA,0.2 mmol/L dNTP,0.8μmol/L ISSR引物,1.0 U TaqDNA聚合酶,2.5μL 10×PCR Buffer,2.0mmol/L MgC12.PCR扩增程序为:94℃预变性2 min,94℃变性30s,55℃退火45s,72℃延伸1 min,共30个循环;72℃延伸7min,4℃保温.     

蕺菜ISSR-PCR反应体系的建立及条件优化

[目的]针对蕺莱ISSR的反应特点,建立稳定可靠的ISSR分子指纹标记反应体系,为进一步研究蕺菜的居群遗传多样性奠定基础。[方法]通过筛选引物并设定影响蕺菜ISSR反应各因素的浓度,检测ISSR不同反应体系的扩增效果;通过分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立蕺菜ISSR稳定可靠的反应体系。[结果]建立了可用于蕺菜ISSR—PCR分析的最适宜反应体系。砌酶质量、退火温度、Mg^2＋浓度、dNTP浓度均对ISSR反应结果具有较大影响。[结论]建立的蕺菜ISSR反应体系具有省时、经济、简便、扩增条带清晰而稳定以及重复性好等特点,可以较好地应用于蕺菜的居群鉴别及居群分子生态的研究。     

福建含笑ISSR-PCR反应体系的建立与优化

以福建含笑叶片提取的基因组DNA为材料,对影响ISSR-PCR扩增效果的一些因素,如dNTPs浓度、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶用量、引物用量、模板DNA用量以及退火温度等指标进行筛选和优化,确立了可用于福建含笑ISSR-PCR分析最适宜的PCR反应条件:20μL PCR反应体积中含0.4 mmol.L-1dNTPs,2.5 mmol.L-1Mg2+,1.5 UTaqDNA聚合酶,0.6μmol.μL-1引物,30 ng模板DNA。PCR扩增程序:94℃预变性2 min,94℃变性30 s,47.3℃退火30 s,72℃延伸1 min,45个循环,72℃延伸7 min,4℃保存。应用ISSR体系对5份福建含笑种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性。     

百合ISSR-PCR反应体系的优化

为优化百合ISSR - PCR反应体系,利用正交试验设计,对百合ISSR - PCR反应体系中的5种主要因素进行优化筛选.结果表明:优化的25μL百合ISSR - PCR反应体系为dNTP 0.2 mmol/L、Mg2+ 2.0 mmol/L、引物0.5 μmol/L、模板DNA 60 ng和Taq酶1.0U,最佳退火温度为52.2℃.该体系以38个品种(种)百合进行扩增验证,得到的条带清晰、多态性高,且具有良好重复性.说明优化的百合ISSR - PCR反应体系适用于百合资源的品种(种)鉴定及遗传多样性研究.     

青海云杉ISSR-PCR反应体系的建立与优化

1材料与方法1．1材料供试材料为祁连山区青海云杉天然分布区内的优良单株,基本能反映出祁连山青海云杉分布区的特点。1．2试剂所用TaqDNA聚合酶、dNTPs等均购于兰州佰澳生物公司;ISSR选择引物来自University of British Columbia Biotechnology Lab（UBCBL）primer set UBC9,由北京赛百盛公司合成。     

桑树ISSR-PCR反应体系建立及优化

采用正交试验设计L₁₆(4⁵)对桑树ISSR-PCR反应体系中的模板DNA、引物、Mg²⁺、dNTPs和rTaq酶5个因素及反应程序中变性时间、退火时间、延伸时间和循环数进行优化分析。结果表明,各因素水平变化对反应体系的影响大小依次为DNA模板>rTaq酶>Mg²⁺>引物>dNTPs。最终确立了最佳反应体系,即在10μL反应体系中,含25 ng/μL DNA模板1μL、10×PCR buffer 1μL、20μmol/L引物0.2μL、2.5 mmol/L Mg²⁺ 0.8μL、2.5 mmol/L dNTPs 1μL、5 U/μL rTaq 0.1μL。优化得到的反应程序为94℃预变性5 min;94℃变性40 s,合适的退火温度退火45 s,72℃延伸90 s,40个循环;72℃延伸10 min,16℃保存。通过梯度PCR,确定引物ID37的退火温度为49.5℃。稳定性检测表明该体系能用于桑树ISSR分析。     

温郁金ISSR-PCR反应体系的建立及条件优化

[目的]寻找一个可用于温郁金ISSR-PCR的最适宜反应体系。[方法]利用CTAB法提取基因组DNA,同时利用PCR扩增技术和方法,对引物、模板DNA、Mg2+d、NTP、Taq聚合酶等反应条件进行优化。[结果]反应体系的最佳条件是总体积为25μl,其中Mg2+浓度(25mmol/L)2.2μl,Taq聚合酶(5 U/μl)0.4μl,引物浓度(20μmol/L)1.5μl,模板DNA(5 ng/μl)1.5μl,dNTP(2.5 mmol/L)2.2μl,10×PCRbuffer2.5μl;PCR扩增程序为:1个循环的94℃预变性5 min;94℃变性35 s,相对应的引物退火温度退火1 min,72℃复性1.5 min,共36个循环;最后72℃延伸10 min。[结论]该体系是适合温郁金ISSR-PCR反应的最适宜体系,具有省时、经济、简便以及扩增条带清晰而稳定等特点,为今后温郁金遗传多样性的研究奠定了基础。     

菠菜ISSR-PCR体系的建立与优化

以菠菜雌雄成株的幼嫩叶片为材料,用改良2×CTAB法提取基因组DNA,研究影响菠菜ISSR-PCR的因素,分别对模板浓度、Mg2+浓度、引物浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶浓度进行优化,建立了适用于菠菜ISSR-PCR的反应体系(25μL):模板用量为60 ng、引物浓度为0.4 μmol/L、Mg2+浓度为2.0 mmol/L、dNTPs用量为0.2 mmol/L、Taq酶用量为0.5U.扩增程序为95℃预变性5 min,94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸2 min,循环35次,72℃延伸8 min.该体系以菠菜雌雄株进行扩增验证,得到的条带清晰、多态性高、重复性高,且在雌株中发现特异条带.     

茶树ISSR-PCR反应体系优化研究

通过优化影响茶树ISSR PCR的主要参数,确立适合于茶树的ISSR反应体系和扩增条件。结果表明,在20μl反应体系中模板DNA的用量、T aq酶用量、引物浓度、M g2 浓度、dNT p浓度分别为:模板DNA为40 ng;T aq酶为0.5 U;引物为0.25μm o.lL-1;M gC l2为1.5 mm o.lL-1;dNT p为0.2 mm o.lL-1。适宜退火温度比Tm值高2~3℃。     

不同海拔梯度对菊芋果聚糖代谢的影响

[目的]研究不同海拔梯度下菊芋各器官的果聚糖代谢特点。[方法]以青芋2号、青芋3号菊芋为试验材料,研究在不同海拔梯度下菊芋各器官中果聚糖的代谢。[结果]随着海拔高度的增加,菊芋各器官果聚糖总含量减少,地上部植株果聚糖聚合度（DP）降低、块茎内果聚糖积累总量和自地上部植株向地下部块茎转移分配率减少。海拔在2 600 m及以下,随海拔的升高菊芋块茎果聚糖聚合度降低,地上部植株果聚糖积累量降低;海拔在2 900 m以上,菊芋块茎果聚糖聚合度高、地上部植株果聚糖积累量高。[结论]该研究为拓展菊芋的种植区域和促进菊芋资源的开发利用提供了参考。     

菊芋腌制护色技术研究

研究了菊芋腌制过程中色变的原因 ,及 Vc,Na HSO3,柠檬酸和热烫对色变的影响。结果表明 ,最佳护色方法为 0 .1g/L的 Na HSO3浸泡原料不少于 5 m in,也可用 0 .3g/L的柠檬酸浸泡原料不少于 5 min     

单雌蓖麻ISSR-PCR反应体系的建立和优化

以单雌蓖麻提取的基因组DNA为材料,采用单因子试验方法,分别研究了Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶以及模板DNA用量5种因素对ISSR-PCR反应的影响;建立了适合单雌蓖麻IS-SR-PCR扩增的反应体系,即在20μL反应体系中,10×PCR buffer 2.5μL(Mg2+free),模板DNA 20 ng,2.0mmol/L MgCl2,引物浓度1.0μmol/L,dNTP 0.4 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U。     

桑叶ISSR-PCR反应体系的建立与优化

[目的]建立和优化桑叶稳定的ISSR-PCR反应体系和扩增程序。[方法]采用5因素4水平的正交试验和单因子梯度优化相结合的方法对最适因素水平进行筛选。[结果]适用于桑叶的25μl ISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度分别为:dNTPs 0.35 mmol/L、Mg2+2.5 mmol/L、Taq酶1.25 U、引物0.4μmol/L、DNA 100 ng。[结论]对于桑叶ISSR-PCR试验,一次正交试验基本可以建立满足要求的ISSR-PCR体系。     

菊芋的生物学特性与开发潜力研究进展

菊芋是当今一种新型多功能的能源植物,具有抗旱、抗寒以及耐盐碱等优良特性。对菊芋的生态学特征、菊芋的开发潜力进行了综述,以期为菊芋研究者提供参考。     

菊芋中菊粉提取工艺优化研究

以菊芋为原料,采用热水浸提法提取菊粉,在提取温度、时间、料液比、pH值和提取次数等单因素试验的基础上,采用均匀设计对热水提取菊粉的工艺参数进行优选,并进行了验证试验.结果表明,在提取温度68℃,提取时间70 min,料液比1∶21,提取次数2次的条件下,菊粉提取率可达到16.04%.     

菊芋不同部位DNA提取的比较研究

分别以菊芋的茎段、叶片和块茎为材料,采用改良CTAB法分别提取菊芋3个部位的基因组DNA,用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,分别测定3个部位的DNA在A260和A280下的吸光值,根据A260/A280的值检测DNA的浓度和纯度,并以3个部位提取的DNA为模板进行ISSR扩增。结果表明：采用菊芋叶片提取DNA的产率最高,茎段次之,块茎最低。三个部位提取的DNA纯度均相近,提取叶片获得的DNA浓度最大,为163.2 ng·μL-1;其次是茎段,为137.4 ng·μL-1;块茎获得的DNA浓度最低,为95.5 ng·μL-1。菊芋不同部位提取的DNA模板对ISSR扩增没有明显影响,DNA浓度都能达到扩增的要求。菊芋3个部位提取的DNA质量均较好,可以进行后续的酶切和PCR扩增等实验。     

马齿苋ISSR-PCR反应体系与反应条件的优化

[目的]优化马齿苋ISSR-PCR反应体系与反应条件。[方法]以马齿苋为试验材料,采用改良的CTAB法提取总DNA,对ISSRPCR引物进行筛选,同时进行ISSR-PCR反应体系和反应条件的优化,电泳检测ISSR-PCR产物。[结果]8个ISSR引物适合马齿苋的ISSR-PCR分析;最适反应体系为总体系25.0μL,其中2×Taq Platinum PCR Master Mix 12.5μL,10μmol/L引物2.0μL,40 mg/L DNA模板1.0μL,dd H_2O 9.5μL;最适反应条件为94℃预变性360 s;94℃变性60 s,54℃退火60 s,72℃延伸90 s,30次循环;72℃再延伸300 s。[结论]建立了马齿苋ISSR-PCR扩增的最佳反应体系和扩增程序,为进一步研究马齿苋提供基础资料。     

不同盐碱区菊芋植株K~+和Na~+的分布特征

[目的]研究不同盐碱区域对菊芋离子分布的影响。[方法]以红块茎菊芋品种JY1及白块茎菊芋品种NY1、BY1为试验材料,研究了非盐、轻盐、重盐3种不同盐碱区条件下块茎、茎干和叶片的离子分布特征。[结果]随着土壤盐分的增加,菊芋茎干和叶片的K~+含量均增加,其中茎干中K~+含量显著增加,重盐下达到16.1 mg/g,达叶片的7.0倍以上;块茎K~+含量的变动幅度不大。随土壤盐分的增加,茎干、叶片、块茎的Na~+含量逐渐升高,其中茎干的增加幅度最大,重盐条件下Na~+含量较非盐条件下增加11.0倍以上;叶片Na~+含量的变化幅度不显著;重盐条件下,各部位Na~+含量从高到低依次为:茎干、块茎、叶片。植株各部位的K~+/Na~+从高到低依次为叶片、块茎、茎干。[结论]该研究可为耐盐品种的筛选及不同盐碱地条件下的菊芋栽培提供理论基础。