番茄果实LeNCED2基因的克隆及其表达分析

为了解ABA对果实发育和成熟的调控作用,对与ABA合成相关的LeNCED2基因进行了克隆与分析.采用RT-PCR和RACE技术从番茄品种‘嘉宝'(Solanum lycopersicum cv.Jiabao)果实中克隆得到了一个LeNCED1基因的同源片段,定名为LeNCED2(基因库注册号:EU912387).该基因3'端序列为1635 bp,与LeNCED1基因的DNA序列同源性为72.7%,与马铃薯中的StNCED2基因(AY662343)碱基序列同源性高达95%.碱基序列推导的蛋白序列与LeNCED1基因的同源性为80%.RT-PCR分析显示LeNCED2基因在番茄植株的根、茎、叶、花和萼片上都有表达.Real-time RT-PCR分析显示LeNCED2基因在幼果期表达量较高,随着果实成熟逐渐降低,与ABA含量不一致.而LeNCED1基因在转色期表达量最大且与ABA含量相对应.     

苹果梨果实CHI基因cDNA克隆及表达分析

以苹果梨果实为试验材料,克隆得到CHI基因c DNA序列(片段),Gen Bank登录号:JN120854,其长度为444 bp,推断其编码148个氨基酸序列。生物信息学分析结果表明,该氨基酸序列与其他植物CHI氨基酸序列的同源性在90%左右,与砂梨CHI氨基酸序列聚类关系最近,该CHI基因c DNA序列含有常用的限制性内切酶Bam HI的识别位点。半定量RT-PCR分析结果表明,随着果实的成熟,套袋果与未套袋果CHI基因的表达量都不断增加,但套袋果在果实成熟期的表达量明显高于未套袋果。     

水稻盐胁迫相关基因sos 5的克隆与序列分析

采用RT-PCR扩增的方法,从水稻(Oryza sativa)中克隆获得了1 574 bp的cDNA片段.基因测序和序列同源性分析结果表明,所克隆的基因片段包含1 284 bp的开放阅读框,编码一个含有427个氨基酸的多肽,该蛋白与拟南芥SOS 5蛋白同源性达45.6%,与小麦同源性达71%.     

葡萄扇叶病毒外壳蛋白基因克隆和植物表达载体的构建

用RT-PCR法从葡萄扇叶病毒杭州分离物(GFLV-H)基因组RNA中扩增了该病毒分离物的外壳蛋白基因cDNA片段,并克隆到质粒pGEM-T-easy Vector.序列分析结果表明,该基因含有1515个核苷酸,编码504个氨基酸,其核苷酸和推导的氨基酸与GFLV法国分离物F13的同源性分别为88%和95%.目前该基因已成功地克隆到植物表达载体pBI121,经三亲交配导入到根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中.     

苹果梨果实着色相关PAL基因片段克隆及表达分析

以苹果梨果皮为试材,克隆了苹果梨果实着色相关PAL基因片段,GenBank登录号为JN120855。结果表明:该基因片段长度为407bp,与鸭梨PAL基因序列一致性达97%,与鸭梨氨基酸序列同源性最高,酶切位点分析表明,该PAL基因序列含有常用的限制性内切酶AccI的识别位点。半定量RT-PCR分析表明,随着果实的成熟,套袋果与未套袋果PAL基因的表达量都不断增加,但套袋果在果实成熟期的表达量明显高于未套袋果。     

羊草乙醛脱氢酶（ALDH）基因片段的克隆及表达分析

[研究目的]克隆羊草的乙醛脱氢酶ALDH基因片段,研究该基因在不同条件下的表达情况。[方法]采用RT-PCR技术克隆羊草的ALDH基因片段,并对其核苷酸和氨基酸序列进行分析,采用RealTimeRT-PCR方法研究该基因的表达。[结果]获得了羊草的ALDH基因片段,长度为675bp,编码225aa。核苷酸序列比较表明,与水稻ALDH1a序列(AB037421)同源性为86%,与玉米RF2C(AF348413)同源性为85%。BLASTp分析,该序列与水稻、玉米、拟南芥的乙醛脱氢酶一致性分别高达87%、86%、60%,含有醛脱氢酶基因家族的保守结构域。RealTimeRT-PCR数据表明,在诱导条件下该基因的表达量呈先升高后降低的趋势。总体上来说,该基因对盐的响应要高于干旱和冷冻。[结论]成功获得了羊草ALDH基因片段,并研究了该基因的表达情况,为进一步克隆羊草ALDH全长基因奠定了基础。     

黄瓜磷脂酶D基因片段克隆及其反义表达载体的构建

采用RT-PCR方法,从新泰密刺黄瓜的幼叶中得到长为1018 bp的cDNA片段,编码339个氨基酸,与GenBank中甜瓜磷脂酶D基因相比核苷酸同源性为96%,氨基酸同源性为97%.克隆片段经双酶切消化,反向插入到植物表达载体pBI121的CaMV 35S启动子和NOS终止子之间,构成磷脂酶D基因的反义表达载体.     

水稻盐胁迫相关基因sos5的克隆与序列分析

采用RT-PCR扩增的方法,从水稻(Oryza sativa)中克隆获得了1 574 bp的cDNA片段。基因测序和序列同源性分析结果表明,所克隆的基因片段包含1 284 bp的开放阅读框,编码一个含有427个氨基酸的多肽,该蛋白与拟南芥SOS 5蛋白同源性达45.6%,与小麦同源性达71%。     

火龙果类锌指蛋白基因片段的克隆及表达分析

锌指蛋白在原核生物与真核生物基因转录的调控中发挥着重要作用.根据火龙果抗逆cDNA 芯片中的一个 EST设计一对引物,采用RT-PCR克隆火龙果类锌指蛋白基因片段,生物信息学分析表明,该片段长334bp,编码 1中含有109个氨基酸残基的肽链,命名为HuZF.该基因序列与其它植物锌指蛋白基因核苷酸序列的同源性均在 70%以上,推测的氨基酸序列与其它植物锌指蛋白的氨基酸序列的同源性达60%以上.RT-PCR分析表明,高盐和 干旱胁迫下,火龙果茎中HuZF 的表达增强,低温胁迫时,HuZF 的表达先减弱后增强,初步推测该基因的表达与 火龙果低温、高盐、干旱等逆境胁迫响应相关.     

鸭H-FABP基因的克隆及其组织表达

运用RT-PCR技术扩增鸭H-FABP基因序列,并用半定量RT-PCR方法研究该基因的组织特异表达规律.从35周龄母鸭心脏组织中首次克隆了H-FABP基因的cDNA序列,长度为606 bp,包含1个402 bp的完整编码序列,编码133个氨基酸.该序列与鸡H-FABP基因序列有约90.5%的同源性,而相应氨基酸序列的同源性为88.0%;与人、小鼠、牛、猪和山羊等哺乳动物的H-FABP基因序列的同源性在71.9%和76.6%之间,而相应氨基酸序列的同源性在72.9%和76.7%之间.半定昔RT-PCR结果表明,该基因在心脏组织中的表达量最高,在骨骼肌、脂肪、小肠、腺胃、肌胃、肺、间脑和肾组织中均有中度或微量表达,而在肝、脾和卵巢中不表达.表明H-FABP基因在动物进化中具有高度保守性,具有相似的生物学功能,该基因的表达具有组织特异性.     

留树保鲜对‘纽荷尔’脐橙果实糖酸及色泽的影响

为研究留树保鲜与低温冷藏对‘纽荷尔’脐橙果实糖酸及色泽的影响,以‘纽荷尔’脐橙为试验材料,对留树保鲜和低温冷藏过程中果实色差指数、可溶性固形物、可溶性糖及有机酸含量变化进行测定。在2种贮藏方式下,‘纽荷尔’脐橙果实色差指数和总糖含量呈上升趋势,可滴定酸含量在整个贮藏过程中不断下降,而可溶性固形物含量变化不大;留树保鲜的果实糖酸比在贮藏40 d前低于低温贮藏,但在40 d后留树保鲜的糖酸比值迅速增加并超过冷藏果实的糖酸比;‘纽荷尔’脐橙果实蔗糖含量最高,其次是果糖和葡萄糖,且果实蔗糖、葡萄糖和果糖含量变化趋势表现一致,均随贮藏时间变化呈上升趋势;果实柠檬酸含量呈现下降趋势,酒石酸含量比较稳定,奎尼酸和苹果酸含量呈先下降后上升再下降的趋势。与低温冷藏相比,留树保鲜能显著提高‘纽荷尔’脐橙果实色差指数,延缓果实有机酸含量的下降,但可溶性固形物和可溶性糖含量无显著性差异,说明留树保鲜能提高‘纽荷尔’脐橙果实的贮藏品质。     

纽荷尔脐橙果实套袋品质分析

【目的】探讨果实套袋技术对纽荷尔脐橙果实外观质量和内在品质的影响,为贵州南亚热带低热河谷地区纽荷尔脐橙无公害栽培提供参考依据。【方法】以纽荷尔脐橙果实为材料,分别采用黄色单层纸袋和内层黑色双层纸袋进行套袋,对套袋果实的主要品质指标进行分析。【结果】纽荷尔脐橙果实套袋后,能促进果实生长发育,明显改善果实外观;果形指数与未套袋果实无显著差异;套袋后果实可溶性固形物、总糖、维生素C和酸含量均有所下降,除酸含量外,内层黑色双层纸袋与未套袋处理之间均存在极显著差异。【结论】纽荷尔脐橙进行套袋后能促进果实生长发育,改善果实外观品质,减少病虫为害,增加果品商品价值,减少投入成本,且黄色单层纸袋套袋效果优于内层黑色双层纸袋。因此,在贵州南亚热带低热河谷地区生产纽荷尔脐橙时,宜采用黄色单层纸袋进行果实套袋。     

纽荷尔脐橙果实套袋品质分析

【目的】探讨果实套袋技术对纽荷尔脐橙果实外观质量和内在品质的影响,为贵州南亚热带低热河谷地区纽荷尔脐橙无公害栽培提供参考依据。【方法】以纽荷尔脐橙果实为材料,分别采用黄色单层纸袋和内层黑色双层纸袋进行套袋,对套袋果实的主要品质指标进行分析。【结果】纽荷尔脐橙果实套袋后,能促进果实生长发育,明显改善果实外观;果形指数与未套袋果实无显著差异;套袋后果实可溶性固形物、总糖、维生素C和酸含量均有所下降,除酸含量外,内层黑色双层纸袋与未套袋处理之间均存在极显著差异。【结论】纽荷尔脐橙进行套袋后能促进果实生长发育,改善果实外观品质,减少病虫为害,增加果品商品价值,减少投入成本,且黄色单层纸袋套袋效果优于内层黑色双层纸袋。因此,在贵州南亚热带低热河谷地区生产纽荷尔脐橙时,宜采用黄色单层纸袋进行果实套袋。     

有机液肥施用对纽荷尔脐橙幼树生长及其养分吸收的影响

【目的】研究动植物源有机液肥单施或与化肥配施对纽荷尔脐橙幼树生长及养分吸收的影响,以期为丘陵山地脐橙园液态有机肥灌溉施用技术标准的研制及其推广应用提供技术支撑。【方法】进行大田试验,以2年生纽荷尔脐橙幼苗为试材,以（100%化肥氮）为对照（CK）,设T1（100%动物源氮）、T2（100%植物源氮）、T3（50%动物源氮+50%化肥氮）和T4（50%植物源氮+50%化肥氮）处理,测定不同处理纽荷尔脐橙树体生长及养分吸收等指标,并进行主成分分析。【结果】与CK相比,动植物源有机液肥单施或与化肥配施（T1~T4处理）整体上均能促进纽荷尔脐橙幼树生物量积累。T4处理纽荷尔脐橙幼树接穗茎、砧木茎、根系干重和整株干重均高于其他处理,其中较CK分别显著增加62.42%、40.14%、42.08%和47.21%（P<0.05,下同）。在对纽荷尔脐橙幼树生长量影响方面,T1~T4处理主要影响幼树基径和春梢叶片叶绿素相对含量（SPAD值）;与CK相比,T1~T4处理均显著促进基径增大,增幅最高可达29.17%（T4处理）;除T2处理外,其他3个处理均显著促进春梢叶片SPAD值增加,其中T4处理作用最明显,增幅为9.19%。除T3处理外,其他3个处理均促进脐橙幼树春梢长和比叶重显著增加,其中T2处理作用最显著,较CK分别增加36.67%和12.10%。此外,T4处理显著促进幼树根总长和根总表面积的增加,但显著降低根平均直径,降幅为18.42%。T1~T4处理均在不同程度上影响脐橙幼树不同器官对氮磷钾元素的吸收。主成分分析结果表明,各施肥处理对脐橙幼树树体生长及其养分吸收综合评价得分排序为T4>T1>T3>T2>CK。【结论】动植物源有机液肥单施或与化肥配施均可促进纽荷尔脐橙幼树干物质量增加和树体生长,以50%植物源有机液肥+50%化肥（T4处理）对脐橙幼树生长及养分吸收效果最佳,可在赣南脐橙幼龄园液态有机肥灌溉施用系统中推广应用。     

脐橙早熟芽变及其亲本幼苗矿质元素含量差异分析

以赣南地区主栽的枳砧纽荷尔脐橙及其早熟芽变品种赣南早脐橙幼苗为材料,利用盆栽试验进行早熟脐橙幼苗各部位元素含量差异分析。结果表明,赣南早脐橙幼苗根中的磷和镁,老叶中的磷、钾、镁以及新叶中的钙和镁含量均显著高于纽荷尔脐橙相应部位的元素含量。砧木茎和接穗茎中的磷、钾、钙含量也表现为赣南早显著高于纽荷尔。对于微量元素而言,除根以外,赣南早脐橙各部位硼含量均显著高于纽荷尔脐橙相应的各部位。根和新叶中的锰含量也均表现为赣南早显著高于纽荷尔脐橙。     

柑橘果实贮藏期咪鲜胺和抑霉唑残留量的动态变化

用不同浓度的咪鲜胺及抑霉唑分别浸果处理柑橘果实,采用UPLC和气相色谱(gas chromatography,GC)检测咪鲜胺、抑霉唑在柑橘果实贮藏过程中的残留量。结果表明:咪鲜胺和抑霉唑在脐橙果皮中的残留量均高于椪柑果皮;咪鲜胺和抑霉唑在脐橙和椪柑果肉中的残留量均非常低。咪鲜胺在脐橙果皮中的降解趋势先慢后快,在椪柑果皮中的降解趋势则先快后慢;抑霉唑在椪柑果皮中的降解趋势与咪鲜胺在椪柑中的降解趋势类似。咪鲜胺(0.5、1.0、1.5mg/mL)和抑霉唑(0.5、1.0、1.5mg/mL)分别浸果2min后常温贮藏,柑橘全果中的残留量在整个贮藏期内均低于GB 2763-2014标准规定的5.00mg/kg最大残留限量(MRL)值,贮藏过程中柑橘可随时出库上市。     

纽荷尔脐橙及其芽变系的RAPD分析

采用RAPD分析,从60个引物中筛选出能稳定扩增的12个引物,对2个纽荷尔脐橙品种(系)进行了扩增,共扩增出91条带,1条具有多态性,多态性比例占1.10%.利用NTSYSpc 2.1软件进行统计分析,得到品种(系)间的遗传距离极小,为0.0055.     

纽荷尔脐橙果实生长规律Logistic模型探究

在纽荷尔脐橙花期用不同生长调节剂进行处理,然后采用Logistic模型拟合了其果实体积生长动态。结果表明:各个处理的拟合模型的相关系数均达到了极显著水平;根据所拟合的Logistic曲线的两个特征点,将纽荷尔脐橙果实体积生长划分为3个阶段:幼果期、果实膨大期、果实成熟期。     

电场诱导融合再生两个柑桔种间体细胞杂种

通过电场诱导融合方法分别获得了续荷尔脐橙与粗柠檬、纽荷尔脐橙与夔柑两个组合的体细胞杂种。纽荷尔脐橙＋粗柠檬级合获得了４５棵再生植株。对其中的３０棵株进行染色体检查,结果表明,全为四部体,２ｎ＝４ｘ＝３６。过氧化物同工酶及ＲＡＰＤ分析表明再生植株为体细胞杂种。续荷尔脐橙＋夔柑组合获得了２５株再生植株。染色体检查结果表明,全为四倍体,２ｎ＝４ｘ＝３６。ＲＡＰＤ分析表明再生植株为体细胞杂种。     

纽荷尔脐橙变异株系果实品质分析研究

对9份纽荷尔脐橙试材(6个变异株系+3个对照)进行了果实品质的测定分析,研究结果表明,与对照纽荷尔脐橙相比,6个变异株系在可食率、可溶性同形物含量、固酸比、Vc含量、出汁率等多项果实品质指数上表现出优势,且变异株系母子代果实品质性状具有较好的稳定性.