镰形扇头蜱肌钙蛋白Ⅱ基因的克隆及其分布

本试验从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的EST中筛选了1个含polyA尾的基因序列,经5′-RACE方法得到该基因全长序列。经同源性比较,该基因预测的氨基酸序列与长角血蜱肌钙蛋白（GI：14041807）的同源性为84.47%,肌动蛋白结合位点位于147～167氨基酸处,且与长角血蜱肌钙蛋白肌动蛋白结合位点完全相同,表明该基因是镰形扇头蜱肌钙蛋白基因。以镰形扇头蜱基因组DNA为模板扩增到编码肌钙蛋白的基因组序列,序列分析表明该序列不含内含子。RT-PCR分析表明该基因在镰形扇头蜱的卵及其幼蜱、若蜱、成蜱的壳、唾液腺和肠均有表达。     

镰形扇头蜱、亚洲璃眼蜱和血红扇头蜱Actin基因的克隆和序列分析

蜱,隶属节肢动物门蛛形纲蜱螨目,寄生于动物体表,以吸食动物血液为生.蜱广泛分布于世界各地,侵袭哺乳动物、爬行动物、鸟类,乃至两栖类等多种动物.蜱和其所携带的病原微生物,如螺旋体、巴贝西虫、贝纳柯克斯体等[1],对动物和人类的健康造成严重危害.肌动蛋白(Actin)是一类进化保守,在多数物种中存在的蛋白质超家族,其基因序列高度同源[2].Actin是细胞组成的基本单位,参与多种生理过程,如细胞运动、胞内运输、细胞质流动、内吞作用等[3].Actin基因及蛋白同时也是多数实验中的首选内参,对完善实验数据、数据分析和实验过程的逻辑性起到重要作用.目前少见对镰形扇头蜱成蜱、亚洲璃眼蜱和血红扇头蜱Actin基因的报道.据此,我们克隆了三种硬蜱的Actin基因,进行了序列分析.     

犬吉氏巴贝斯虫病的诊治

吉氏巴贝斯虫(Babesia gibsoni)病是寄生于犬的红细胞内所引起的血源性原虫病.传播本病的硬蜱主要有血红扇头蜱、镰形扇头蜱和长角血蜱,本病具有明显的季节性,多发生在5--9月份蜱盛行的季节.     

华南地区犬体寄生虫蜱调查及防治

寄生在犬体的蜱除叮咬吸血并分泌毒素引起“蜱麻痹症”外，还能传播多种自然疫源性疾病，危害极大，９５￣９８年，我们对华南地区七个军警犬队（基地）及部队养犬单位的犬和部分家犬的体表寄生蜱进行了初步调查，并开展了综合防治，共彩集犬体寄生蜱３０００余只，经鉴定，隶属３属６种。计有：血红扇头蜱、微小牛蜱、长角血蜱，台湾血蜱，豪猪血蜱。其中血红扇头蜱为广西硬蜱新记录，长角血蜱为广东硬蜱新记录。所调查７个单位的军     

新疆和田地区蜱种分布及蜱传立克次体分子流行病学调查

为了解新疆南部和田地区蜱种分布及蜱携带立克次体流行情况，本试验从和田市、和田县、墨玉县、皮山县、洛浦县、策勒县、于田县和民丰县8个县市的养殖绵羊采集体表寄生蜱，运用形态学观察和PCR检测技术对蜱种进行鉴定；运用PCR检测技术对立克次体进行检测；通过系统发育分析方法探究和田地区蜱携带立克次体的种间关系。结果显示，本试验共采集蜱914只，经鉴定包括图兰扇头蜱(Rhipicephalus turanicus)532只、亚洲璃眼蜱(Hyalomma asiaticum)304只、草原革蜱(Dermacentor nuttalli)78只。PCR检测发现，该地区蜱中存在暂定巴布瑞立克次体(Candidatus Rickettsia barbariae)、马赛立克次体(Rickettsia massiliae)、饶氏立克次体(Rickettsia raoultii),蜱传立克次体总体阳性率为59.13%。系统发育分析发现，本试验获得的立克次体均与已知立克次体同源。结果表明，和田地区的优势蜱种为图兰扇头蜱(Rhipicephalus turanicus),该地区的立克次体阳性率较高并且近年来呈上升态...     

镰形扇头蜱金属蛋白酶基因全长的克隆和序列分析

本研究从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的EST序列中筛选了一个含polyA尾的基因序列,经5′-RACE方法得到该基因全长序列。cDNA全长1 566 bp,编码区为23 bp～1 456 bp,编码478个氨基酸残基,该蛋白的预测分子量约为55 Ku,等电点为8.87。RT-PCR分析表明,该基因在镰形扇头蜱未吸血成蜱、半饱血成蜱以及唾液腺、肠中表达。     

上海警犬蜱病的调查

对上海市公安局警犬基地发生的警犬蜱病流行病学进行了调查,确认危害病原为血红扇头蜱(Rhipi-cephalussanguineus),并进行了蜱在警犬体表出没时间,感染率等方面的调查,为控制警犬蜱病提供了基础。     

牛蜱龙岩分离株的分子鉴定

为了解福建省龙岩地区牛场体表蜱的种类,试验采集龙岩地区牛体表寄生蜱样本,基于蜱的核糖体rDNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列PCR扩增方法进行分子鉴定,获得ITS1和ITS2基因序列,进行blastn相似性搜索,应用MegAlign和MEGA 7.0软件完成同源性分析及种系发育分析。结果表明,该蜱ITS1序列与中国甘肃微小扇头蜱分离株同源性达99.32%(JQ737124.1、JQ737125.1),与中国湖南微小扇头蜱HAI2分离株同源性达99.16%(MK224531.1);ITS2序列与中国河南、南非豪登微小扇头蜱分离株同源性均为100%(KX450287.1、KY457506.1);种系发育分析结果显示,龙岩地区牛体表分离的牛蜱ITS基因序列与扇头蜱属ITS基因序列聚类,与革蜱属和璃眼蜱属处于两个不同的分支。说明福建龙岩牛蜱分离株为微小扇头蜱。     

福州地区犬体寄生蜱虫调查与防治

通过对福州地区10家宠物诊疗点和10个集约化养犬场累计6052头次犬进行蜱虫感染情况调查.结果表明:在夏秋季节犬类易感染蜱虫,冬春季节则很少有;10家诊疗点全年平均带蜱率为19.71%、带蜱指数为5.26,10个犬养殖场全年平均带蜱率为15.96%、带蜱指数为4.42;不同品种犬种的带蜱率无明显差别,蜱虫种类以血红扇头蜱为主(约占98.79%),少数为微小牛蜱(约占1.20%),未检出全沟硬蜱.临床上采用辛硫磷溶液对防治犬体寄生蜱虫效果较好.     

镰形扇头蜱肌钙蛋白Ⅰ基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的克隆镰形扇头蜱肌钙蛋白Ⅰ(TnI)的cDNA并进行表达及鉴定。方法用RT-PCR方法从镰形扇头蜱总RNA中克隆编码肌钙蛋白Ⅰ的cDNA片段,将该cDNA连接到pET-32a( )表达载体,并转入宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并对表达产物进行Western blot分析。结果获得镰形扇头蜱的eDNA,并在大肠杆菌中以包含体的形式高效表达,Westem blot分析表明,抗TnI重组蛋白兔血清可以识别蜱体内的TnI,并在22 kDa和36 kDa之间有两条带。结论蜱体内可能同时存在两个大小不等的TnI,为进一步的研究打下基础。     

新疆图木舒克地区血红扇头蜱的鉴定

蜱既是常见的吸血体外寄生虫,又是人和动物许多重要疾病的传播媒介。本试验对图木舒克地区采集到的寄生于羊体表的蜱进行形态特征的观察和分析,确认该种蜱为硬蜱属血红扇头蜱。     

石河子地区宠物犬蜱的种类鉴定及其携带布鲁氏菌的检测

为了解新疆石河子地区宠物犬体表寄生蜱的种类及蜱携带布鲁氏菌情况,本试验在形态学分类的基础上,基于线粒体基因12S rRNA和细胞色素氧化酶Ⅰ（COⅠ）对宠物犬体表采集寄生蜱进行分子生物学检测,使用DNAMAN软件比对分析序列同源性,并应用序列分析软件Mega 7.0邻接法构建蜱种系统发育进化树,分析蜱种的遗传进化关系;基于布鲁氏菌外膜蛋白Omp22基因对宠物犬体表寄生蜱进行布鲁氏菌PCR检测,确定宠物犬蜱布鲁氏菌携带情况。结果显示,宠物犬体表寄生的436只蜱的形态学与线粒体基因（12S rRNA和COⅠ）分子生物学鉴定结果一致,均为新疆优势蜱种之一——图兰扇头蜱（Rhipicephalus turanicus）。基于12S rRNA基因构建的蜱种系统发育树显示,本试验所得宠物犬体表寄生图兰扇头蜱序列与GenBank中已知图兰扇头蜱的序列聚为一大支。基于布鲁氏菌Omp22基因的巢式PCR扩增结果显示,宠物犬体表寄生图兰扇头蜱携带布鲁氏菌的阳性率为4.82%（21/436）,且同源性为100%。BLAST比对显示,本试验所得宠物犬图兰扇头蜱携带的布鲁氏菌与新疆流行株YC31（GenBank登录号：MK201679.1）、QH5（GenBank登录号：MK201678.1）、EM3（GenBank登录号：MK201677.1）和ML9（GenBank登录号：MK201676.1）的同源性均为100%。本研究通过形态学及分子生物学探讨了新疆石河子地区宠物犬体表寄生蜱的种类及携带布鲁氏菌基本情况,为宠物犬体表寄生蜱的种类及蜱传疾病的监测和控制等研究工作提供了基础资料。     

镰形扇头蜱肌钙蛋白I基因的克隆及其分布

本试验从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的EST中筛选了1个含polyA尾的基因序列,经5LRACE方法得到该基因全长序列.经同源性比较,该基因预测的氨基酸序列与长角血蜱肌钙蛋白I(GI14041807)的同源性为84.47%,肌动蛋白结合位点位于147-167氨基酸处,且与长角血蜱肌钙蛋白I肌动蛋白结合位点完全相同,表明该基因是镰形扇头蜱肌钙蛋白I基因.以镰形扇头蜱基因组DNA为模板扩增到编码肌钙蛋白I的基因组序列.序列分析表明该序列不含内含子.RT-PCR分析表明该基因在镰形扇头蜱的卵及其幼蜱、若蜱、成蜱的壳、唾液腺和肠均有表达.     

镰形扇头蜱P0基因的克隆表达及初步鉴定

P0分子是一种核糖体蛋白,具有抗蜱免疫作用。本文采用RACE技术从镰形扇头蜱(Rhipicephalus haemaphysaloides)中获得了P0全长基因。通过对P0全长基因序列进行分析发现,P0全长基因为1 118 bp,具有一个编码319个氨基酸的开放阅读框,没有信号肽序列。推测P0的蛋白大小约为35 ku。P0与其他蜱种具有很高的同源性,与微小扇头蜱(Rhipicephalus microplus)和长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)的P0基因同源性分别为94%和87%。编码区克隆到表达载体p GEX-4T-1中,转化表达宿主菌BL21,可表达出分子量约为60 ku的重组融合蛋白。表达的蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。表达产物经GST树脂纯化后可得到纯度较高的目的蛋白。抗P0重组蛋白鼠血清可以识别蜱体内的P0蛋白,大小在35 ku。研究结果将为镰形扇头蜱新型防治技术研究提供基础。     

镰形扇头蜱微管蛋白基因的分离和cDNA序列分析

分离和鉴定镰形扇头蜱（Rhipicephalus haemaphysaloides,Rh）新基因,为防治镰形扇头蜱提供药物靶标或候选疫苗。从镰形扇头蜱唾液腺抑制消减杂交文库中筛选了一条编码微管蛋白的基因片段,通过3＇-RACE的方法得到全长序列;采用生物信息学技术等对该cDNA进行分析。获得1个镰形扇头蜱新基因-微管蛋白基因（RhM1）,全长680bp,开放阅读框（ORF）全长537bp,编码179个氨基酸。编码蛋白的理论分子量为20KDa,等电点为4.71;抗原表位可能位于cDNA序列N末端第18~25氨基酸处。     

一批泰国进境板材中截获的囊形扇头蜱的鉴定和检疫

囊形扇头蜱是一种重要的人兽共患传染病的媒介生物。本文介绍了从泰国进境板材中截获的囊形扇头蜱,概述了该蜱的形态特征、检疫方法与意义,以供检疫工作者参考。     

镰形扇头蜱-新基因的分离、克隆、表达和抗蜱免疫保护作用

目的分离、克隆镰形扇头蜱一新基因。方法本实验从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的100个EST（Expressed Sequence Tag）序列中选取一个带有polyA尾的序列，经5’RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）得到此序列的全长基因，命名为RhHp2，基因全长1002bp，开放阅读框（ORF）从31bp至879bp，共848bp，编码282个氨基酸。经序列比较，RhHp2基因与其它序列在核苷酸水平上基本无同源性，但在氨基酸水平上与其它物种同源性最高可达50．81％。RhHp2基因连接于PET32a（＋）载体后克隆于表达菌B121，1mM IPTG诱导表达，产生分子量约为55kD的融合重组蛋白，并以不溶性包涵体形式存在。经纯化和体外复性的重组蛋白三次免疫新西兰兔后，将镰形扇头蜱未吸血成蜱和若蜱接种于此免疫兔耳，并对接种48h后的蜱上体数、蜱的饱血数量、饱血时间、饱血重量等进行记录。结果发现蜱的吸血行为受到一定影响，若蜱在48h的减虫率（上体数减少）为58％，在整个吸血过程中的死亡数增加，成蜱的饱血体重显著降低。结论此结果表明RhHp2基因的重组表达产物具有一定的免疫保护作用。     

镰形扇头蜱丝氨酸蛋白酶SP30基因的克隆及原核表达

根据丝氨酸蛋白酶保守性氨基酸序列设计引物,以镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA为模板,经PCR扩增得到SP30基因的保守区,通过5’RACE(rapid amplification of cDNA Ends)和3’RACE技术得到全长基因。将该基因连入原核表达载体pGEX-4T-1,经IPTG诱导纯化得到重组蛋白。以镰形扇头蜱卵、幼蜱、若蜱、成蜱各发育阶段的cDNA为模板进行Real-timePCR实验。结果显示,SP30基因全长1194 bp,开放阅读框长900 bp,编码299个氨基酸,预计蛋白分子质量30 kDa。Real-time PCR分析结果表明,该基因在四个不同的发育阶段均有不同程度的表达。     

不同吸血时段蜱粪便蛋白组学比较分析

为了解蜱血液消化特征,通过耳袋饲养法分别收集镰形扇头蜱雌性成蜱吸血d4、d8的粪便。提取粪便蛋白质,进行SDS-PAGE和LC/MS-MS分析。用非标定量分析蛋白组学技术对蜱不同吸血时段粪便进行差异蛋白质表达谱分析。结果共鉴定蜱源肽段数628个、蛋白质总数196个;鉴定兔源肽段数6173个、蛋白质总数659个。对组间差异蛋白分析发现,除一些未知蛋白外,其中蜱源蛋白主要是热休克蛋白、免疫蛋白相关亚基和一些蛋白酶类等。兔源差异蛋白主要为一些凝血因子、糖蛋白,以及一些物质和能量的消化与合成的相关酶类,如兔丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶、三磷酸肌苷焦磷酸酶、S-(羟甲基)谷胱甘肽脱氢酶等。本研究中的粪便蛋白质组反应了蜱血液消化过程的复杂性,丰富了蜱消化方面的研究数据,同时为抗蜱疫苗研究提供了一个思路。     

犬的蜱传播性疾病

一、犬巴贝氏虫病 犬巴贝氏虫和吉氏巴贝氏虫是犬巴贝氏虫病的病原,血红扇头蜱是犬巴贝氏虫的传播媒介,犬是犬巴贝氏虫的储存宿主。摄入犬巴贝氏虫的任何时期的血红扇头蜱都具有传染性。血红扇头蜱摄入犬巴贝氏虫后2～3天就可以传染给犬。