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花椒原生质体分离与培养研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显著影响。在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6~0.7 mol·L-1时分离效果最佳。以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-0.7 mol·L-1甘露醇+1.0%(w/v)纤维素酶R-10+1.5%(w/v)果胶酶,酶解时间为10 h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×105 个·g-1和72.74%。以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6 mol·L-1甘露醇+2.0%(w/v)纤维素酶R-10+0.5%(w/v)果胶酶,酶解12~14 h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×105 个·g-1、59.15%和53.87×105 个·g-1、63.92%。以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×105个·mL-1,培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3~5次,原生质体28 d后形成微细胞团,培养60 d后可形成2 mm左右的愈伤组织。 相似文献
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洋葱内表皮原生质体分离和纯化研究 总被引:1,自引:1,他引:0
通过酶解法降解洋葱细胞壁释放出原生质体,利用离心从粗提取液中纯化出原生质体,并通过血球计数板计数来比较制备洋葱内表皮原生质体的效果.结果表明:酶解时间、pH值、渗透压稳定剂(甘露醇)及酶的种类是影响原生质体制备的重要因素.酶解时间2 h,pH值5.0~6.0之间,甘露醇0.5~0.7 mol/L,纤维素酶含量1.5%、果胶酶含量0.1%和0.1%牛血清蛋白组合时原生质体的分离效果最佳. 相似文献
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毛葡萄原生质体分离与纯化研究 总被引:4,自引:0,他引:4
以毛萄萄愈伤组织、悬浮培养细胞,无菌苗幼叶为材料,研究了毛葡萄原生质体的分离纯化方法及影响因素.结果表明,毛葡萄原生质体分离材料以悬浮细胞和愈伤组织最好.毛葡萄愈伤组织在0.5 mol/L甘露醇中预处理90 min,CPW+13%甘露醇+2%纤维素酶+0.25%果胶酶+0.5%离析酶的酶液中酶解10 h,其原生质体产量最高可达6.24×106个/g,活力为86.83%. 相似文献
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以苹果试管苗叶片为原生质体分离材料,对影响原生质体分离和培养的因素进行了研究.结果表明适合叶片酶解的酶液组成是Cellulase-Onzuka R-10 0.8%+Pectinase 0.5%+PVP 1%+甘露醇0.65 mol/L+MES0.1%;以改良MT+BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+甘露醇0.65 mol/L+Vc 5.0 mg/L+Glu 500 mg/L+CH 100 mg/L+ME 500 mg/L+Arg 50 mg/L为培养基对原生质体进行培养,固液双层培养效果较好,最适培养密度为1×105个/ml,培养1~2天原生质体变形,3~4天第一次分裂,2周分裂3~5次.平邑甜茶原生质体一个月后形成微细胞团,两个半月形成肉眼可见的微愈伤组织.鲁加5号和M7均只形成7~10个细胞的细胞团,嘎拉未见细胞分裂. 相似文献
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通过对温室发病百合的田间症状观察、病害的初步诊断、病原物的分离纯化以及分离病原物的活体和离体接种试验,确定该病害为百合灰霉病,其病原是椭圆葡萄孢(Botrytis elliptica)。 相似文献
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以人参愈伤组织细胞悬浮系为材料,研究了人参原生质体的分离纯化方法及影响因素.结果表明:以人参愈伤组织细胞悬浮系为材料,在加入1%纤维素酶和0.5%果胶酶、甘露醇浓度0.7 mol/L的酶解液中酶解8 h分离得到的人参原生质体产量最高;采用人参与胡萝卜共培养培养基,进行看护培养成功地培养出愈伤组织. 相似文献
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以花生(Arachis hypogaea L.)品种花育20为材料,探讨不同的酶液浓度、酶解时间及渗透压对花生原生质体分离的影响.结果表明:原生质体分离的适宜酶液配比是2%纤维素酶(Cellulase Onozuka Rs)、0.2%果胶酶(Pectolyase Y-23),甘露醇渗透压调节剂的浓度为0.7mol/L,暗处理10h,叶片原生质体产量为4.86x105个/ml,存活率75.6%,愈伤组织原生质体产量为4.97x105个/ml,存活率75.4%.将分离的原生质体培养在添加1mg/LNAA和4mg/LBAP的改良MS液体培养基中.培养约2~3天后,细胞开始分裂.然后部分细胞继续分裂,并形成细胞团.培养5~6周后,将培养物转移到添加2 mg/L2,4-D和3 mg/L BAP的MS液体培养基(pH5.8)中进行培养.7~8周后,将形成的直径为1~2 mm的小愈伤组织转移到添加1 mg/LNAA和5 mg/LBAP的MS固体培养基上培养,小愈伤组织迅速生长.转移3-4周后,愈伤组织长至7~9mm. 相似文献
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陈昌生 《厦门水产学院学报》1993,15(2):1-6
用蛋白酶和细菌酶分离出来的小红毛菜原生质体,在适宜的温度,光照下,具有很强的再生能力,培养2-3天,原生质体产生细胞壁,然后分裂成二个独立的细胞,经培养,这些细胞有的还能重复同样的分裂,使单细胞数目剧增,这些细胞经诱导培养能萌发成小红毛菜。 相似文献
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初步探讨了栎叶枇杷胚培养获得愈伤组织,从胚愈伤组织分离原生质体以及原生质体的早期培养方法,着重研究了酶混合液对栎叶枇杷原生质体分离和培养的效应.结果表明:以1%纤维素酶和2%果胶酶配合使用效果最好,得率和成活率分别为(9.8±0.03)×10 ̄6和96.0%.作为酶混合液中渗透压稳定剂的甘露醇浓度则以11%-12%为好.从合适的酶混合液中得到的原生质体培养已获得愈伤组织. 相似文献
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山桃原生质体培养再生愈伤组织 总被引:7,自引:1,他引:6
以山桃县浮培养物为分离材料,在CPW+1.0%ELLULASoNZUKAr-10+0.5%MacerozymeR-10+0.7mol/L甘露醇+1%PVP的酶解液中酶解12h生质体产量和活力分别达到3.5*10^7个/g.FW和96%。 相似文献
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裙带菜配子体原生质体培养 总被引:1,自引:0,他引:1
从裙带菜配子体分离出原生质体,产量在1.5 ̄2.5×10^7个/g鲜重范围内。原生质体形成细胞壁并分裂,4 ̄5周后再生成为与普通配子体大小和形状相同的新的配子体。 相似文献
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罗勒(Ocimum basilieum)原生质体的分离和纯化 总被引:4,自引:0,他引:4
以罗勒愈伤组织、悬浮培养细胞、无菌苗幼叶为材料,研究了罗勒原生质体的分离纯化方法及影响因素。结果表明:材料的起始状态对原生质体分离的产量、质量均有明显影响;以泥状愈伤组织为材料,其原生质体的产量(以鲜重测)可达1.25×107个/g,存活率大于94%。该原生质体可进一步用于罗勒的原生质体培养与细胞融合。 相似文献
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枣树原生质体分离条件的研究 总被引:10,自引:0,他引:10
枣树原生质体分离研究是其原生质体培养与融合、外源遗传物质转化等研究的基础工作。用胚性悬浮培养细胞、细粒状胚性愈伤组织、未细切愈伤组织和已细切愈伤组织等4种材料进行原生质体分离。结果表明,枣树胚性悬浮培养细胞是最佳起邕材料,用浓度为10g/L纤维素酶+1g/L离析酶+CPW盐(1320mg/L CaCl2·2H2O和100mg/L KH2PO4·H2O组成的混合液)+0.7mol/L甘露醇组成的混合 相似文献
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栎叶枇杷原生质体的分离与培养 总被引:4,自引:0,他引:4
初步探讨了栎叶枇杷胚培养获得愈伤组织,人胚愈伤组织分离原生质体以及原生质体的早期培养方法,着重研究了酶混合液对栎叶枇杷原生质体分离和培养的效应。结果表明:以1%纤维素酶和2%果胶酶配合使用效果最好,得率和成活率分别为(9.8±0.03)×10^6和96.0%。作为酶混合液中渗透压稳定剂的甘露醇浓度则以11%-12%为好,从合适的酶混合液中得到的原生质体培养已获得愈伤组织。 相似文献