十堰地区连翘叶HPLC指纹图谱的建立及抗氧化抑菌谱效关系研究

试验旨在通过研究十堰地区不同产地连翘叶HPLC指纹图谱与抗氧化、抑菌活性之间的谱效关系，初步确定其抗氧化、抑菌活性物质基础，为其质量控制方法研究提供参考。试验构建十堰地区十个不同产地的连翘叶HPLC指纹图谱，运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）确定共有峰。2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸自由基（ABTS+）清除法测定抗氧化活性，牛津杯法测定连翘叶水提物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性；灰色关联度和主成分分析法相结合阐明指纹图谱中多成分和药效数据之间的谱效关系。结果显示，连翘叶水提物的指纹图谱确定了13个共有峰，灰色关联度法计算出12个共有峰与抗氧化和抑菌效果的关联度均大于0.6，主成分分析构建的主成分综合评分结果也与实际药理活性结果相符。研究表明，十堰地区连翘叶具备开发潜力，其中以化龙堰和青石村产地的质量最优。连翘叶的抗氧化和抑菌活性为多组分协同作用的结果，特征成分连翘酯苷A、连翘苷、芦丁为强关联药效基础物质，连翘叶水提物整体活性与这些特征成分含量呈正相关。     

嗜酸乳杆菌抗氧化活性评价及其对小鼠单核巨噬细胞氧化应激的影响

本试验旨在评价嗜酸乳杆菌抗氧化活性及其对小鼠单核巨噬细胞(RAW 264.7细胞)氧化应激的影响。制备嗜酸乳杆菌培养物上清液、完整细胞和胞内提取物,比较其对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、羟自由基和亚油酸的清除能力。筛选抗氧化能力较强的嗜酸乳杆菌培养物上清液,设置4个剂量(5、25、50和125μL)分别作用于RAW 264.7细胞,对照组加入1 mL完全培养液,检测RAW 264.7细胞中一氧化氮(NO)含量、活性氧(ROS)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,并进一步探究其对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7细胞氧化应激的保护作用。结果表明:1)嗜酸乳杆菌培养物上清液的DPPH、羟自由基和亚油酸清除率均显著高于嗜酸乳杆菌培养物完整细胞和胞内提取物(P0.05)。2)将嗜酸乳杆菌培养物上清液作用于正常RAW 264.7细胞,与对照组相比,25、50和125μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著提高了RAW 264.7细胞的细胞活力(P0.05),125μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著提高了RAW 264.7细胞中NO含量(P0.05),25和50μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著提高了RAW 264.7细胞中SOD活性(P0.05),125μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著降低了RAW 264.7细胞中GSH-Px活性(P0.05)。3)将嗜酸乳杆菌培养物上清液作用于LPS诱导的RAW 264.7细胞,与LPS组相比,25、125μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著降低了LPS诱导的RAW 264.7细胞中NO含量(P0.05),25μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著提高了LPS诱导的RAW 264.7细胞中SOD和GSH-Px活性(P0.05)。综上所述,嗜酸乳杆菌培养物各组分均具有DPPH、羟自由基和亚油酸清除能力,作为其中抗氧化活性较好的嗜酸乳杆菌培养物上清液可调节LPS诱导引起的RAW 264.7细胞氧化应激。     

人心果叶提取物抗氧化活性评价

本研究以热带水果人心果可再生资源——叶子为原料,以超声波提取技术对人心果叶中抗氧化成分进行提取,优化超声提取条件;采用不同抗氧化测定方法（清除DPPH自由基法、ABTS自由基法,FRAP法）测定人心果叶提取物抗氧化能力,并比较不同提取方法下所得提取物的抗氧化活性变化。     

紫花地丁总黄酮体外抗炎活性研究

试验研究了紫花地丁总黄酮（TFV）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞活力、细胞中炎症介质含量以及相关基因表达的影响,以期探讨其体外抗炎活性的作用。试验采用MTT法筛选出TFV对小鼠RAW264.7巨噬细胞活力具有促进作用的最佳添加浓度;用酶联免疫吸附法（ELISA）检测了TFV对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞释放到细胞培养液中NO、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）含量的影响;运用实时荧光定量PCR法检测了TFV对LPS诱导的炎性小鼠RAW264.7巨噬细胞TNF-α、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和环氧合酶2（COX-2）相对表达水平的影响;研究并分析了TFV的体外抗炎活性。试验结果表明,TFV在5~50 μg/mL浓度范围内能提高小鼠RAW264.7巨噬细胞的活力（P<0.05）;与LPS模型组比较,TFV能显著降低LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量,并能显著降低LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞内TNF-α、COX-2等炎症因子的mRNA表达量（P<0.05）。综上,TFV能显著下调LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子的释放量和下调TNF-α、COX-2 mRNA的表达量,说明抑制促炎性细胞因子基因的表达可能是实现其抗炎作用的原因之一。     

20种牡丹叶中总黄酮、总酚和芍药苷的含量测定及抗氧化活性研究

试验旨在测定20种牡丹叶中总黄酮、总酚和芍药苷含量及其抗氧化活性。试验以20个不同品种牡丹叶为研究对象，采用紫外分光光度法测定总黄酮、总酚含量，高效液相色谱法测定芍药苷的含量，采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、2,2-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)自由基清除试验评价其抗氧化能力；采用相关系数法对不同品种牡丹叶中总黄酮、总酚、芍药苷的含量与抗氧化活性相关性进行分析，主成分分析法进行聚类评价。结果显示，20种牡丹叶中总黄酮含量为20.71～54.03 mg/g，总酚含量为68.31～188.19 mg/g，芍药苷含量为20.50～45.10 mg/g。牡丹叶中总黄酮、总酚、芍药苷的含量与DPPH自由基、ABTS自由基清除率的半抑制浓度(EC₅₀)均具有显著负相关性；主成分分析将牡丹叶聚为4类，按花株色系差异存在一定的聚类。研究表明，牡丹叶中总黄酮、总酚和芍药苷的含量可作为评价其抗氧化能力的指标性成分。     

连翘酯苷药理活性研究进展

连翘酯苷作为中草药连翘中一个主要的有效成分,具有广泛的药理学活性。连翘酯苷不仅能抑制引起感染的各种革兰氏阳性菌和阴性菌,而且还具有较强的抗病毒作用。连翘酯苷通过调控各种细胞因子,发挥免疫调节作用,同时通过清除体内的自由基,发挥抗氧化作用。作者针对连翘酯苷药理学活性进行了综述。     

党参多糖的抗氧化活性研究及其对蛋鸡血清免疫、抗氧化功能的影响

试验旨在探究党参多糖（CPP）抗氧化活性及其对蛋鸡血清免疫、抗氧化功能的影响。研究通过体外试验检验CPP对1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、羟自由基和2, 2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS+）自由基的清除能力,体内试验检验CPP对蛋鸡血清新城疫抗体效价、抗氧化酶活性的影响。选取1日龄健康罗曼蛋鸡40羽,随机分为4组,每组10个重复,每个重复1羽蛋鸡,分别为CPP高浓度组（CPPH组）、CPP低浓度组（CPPL组）、免疫对照组（VC组）、空白对照组（BC组）。试验期35 d。结果显示,CPP对DPPH自由基、羟自由基和ABTS+自由基均具有不同程度的清除能力,且随着CPP浓度的增加,其抗氧化活性显著增强。首免后7、21 d,CPPH组血清过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及新城疫抗体效价显著高于VC组和BC组（P<0.05）。研究表明,CPP的抗氧化活性较强,能够提高蛋鸡血清抗氧化酶活性及新城疫抗体效价。     

饲料用连翘叶不同提取物体外抗炎抑菌活性的比较研究

研究旨在比较饲料用连翘叶不同提取物的体外抗炎活性和抑菌活性。运用脂多糖诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7研究连翘叶水提取物、连翘叶40%乙醇提取物和连翘叶80%乙醇提取物的体外抗炎活性,并通过抑菌试验对3种连翘叶提取物进行了体外抑菌活性的比较研究。采用Griess法检测一氧化氮（NO）生成水平,酶联免疫分析法（ELISA）检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生成水平。并使用纸片扩散法和微量肉汤倍比稀释法测定抑菌活性、最低抑菌浓度和最低杀菌浓度,结果表明：3种连翘叶提取物均能抑制NO、IL-1β、IL-6和TNF-α的生成,抗炎活性80%乙醇提取物>40%乙醇提取物>水提取物。抑菌活性40%乙醇提取物>水提取物>80%乙醇提取物,3种连翘叶提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强。饲料用连翘叶乙醇提取物具有较好的体外抗炎活性和抑菌作用,可作为新型饲料添加剂开发应用。     

海棠叶根皮苷药理活性的研究

为了研究海棠叶提取物根皮苷的药理活性,以本实验室提取的根皮苷为试材,利用清除自由基检测体系测定根皮苷的抗氧化活性;并以卵巢癌细胞(Skov3)为细胞模型,检测根皮苷的抗肿瘤活性。结果显示:根皮苷对各种自由基具有一定的清除作用,清除效果依次为2,2'-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基二苯代苦味酰基(DPPH)自由基羟基自由基金属离子Fe2+自由基,且具有一定的浓度依赖性;根皮苷可引起卵巢癌细胞(Skov3)细胞内活化氧(ROS)的表达量的增加,造成核DNA的泄露,并诱导细胞的凋亡。结果表明:根皮苷具有抗氧化作用和抗肿瘤活性,此为根皮苷用于肿瘤的治疗奠定了良好的基础。     

苦木不同药用部位抗氧化活性研究

试验旨在研究苦木根、茎、枝、叶4个不同药用部位的体外抗氧化活性。试验采用DPPH法、ABTS法和普鲁士蓝法测定苦木根、茎、枝、叶4个不同药用部位体外抗氧化能力。结果显示：苦木4个药用部位均具有较好的体外抗氧化能力,苦木叶的抗氧化活性最强。在ABTS法抗氧化评价中,苦木叶的活性显著高于对照组VC(P<0.05),呈现极强的抗氧化能力。苦木茎对DPPH、ABTS自由基清除能力优于根,根与茎对铁离子的还原能力相当,苦木枝的抗氧化活性最弱。研究表明,苦木不同入药部位的体外抗氧化活性存在差异,均可以作为动物生产的抗氧化应激剂使用。     

牛磺鹅去氧胆酸对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞凋亡的影响

为了探讨牛磺鹅去氧胆酸（TCDCA）对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的抗凋亡作用,试验采用二苯胺法及实时荧光定量PCR技术分别检测了针对RAW264.7细胞凋亡百分率及凋亡抑制蛋白CIAP-1、CIAP-2和XIAP的mRNA表达影响。结果显示,剂量为0.05、0.10和10 μg/mL TCDCA可以极显著地对抗地塞米松（DEX）诱导的RAW264.7细胞系凋亡（P < 0.01）。1 μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1和XIAP表达有显著的促进作用（P < 0.05）;10 μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和 XIAP表达均具有显著的促进作用（P < 0.05）。TCDCA给药后对DEX诱导的RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和 XIAP表达均具有极显著的促进作用（P < 0.01）,但不同给药剂量的TCDCA作用有所差异。以上研究结果表明,TCDCA具有对抗DEX诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡作用,且与上调凋亡抑制蛋白mRNA表达有关。     

响应面法优化荔枝叶成分提取工艺及其抗炎作用研究

试验旨在采用响应面法优化提取荔枝叶成分的工艺并探究其抗炎作用。以液料比、提取时间、提取溶剂浓度为考察因素，以没食子酸、儿茶素、表儿茶素、芦丁、紫云英苷、槲皮素、山柰酚含量的综合评分为考察指标，结合响应面法中Box-Behnken设计原理，优化荔枝叶成分的提取工艺。采用脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型评价荔枝叶的抗炎作用。结果表明，荔枝叶成分的最佳提取工艺参数为甲醇浓度72%、液料比18 mL/g、提取时间70 min。在此工艺条件下，荔枝叶成分的综合评分为88.99，与预测综合评分的84.53分相比误差较小。荔枝叶提取物可降低脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞导致的一氧化氮（NO）、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放量；对诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达也具有抑制作用；荔枝叶提取物能够上调Toll样受体4(TLR4) mRNA的表达量与下调核因子κB(NF-κB) mRNA表达量。研究表明，此试验方法简单、稳定可靠，为荔枝叶成分的提取工艺研究提供了一定的参考依据。     

取代基对黄酮类化合物抑制脂多糖诱导巨噬细胞释放一氧化氮活性的影响

为给黄酮类非甾体抗炎药的研发提供试验依据,本试验以脂多糖诱导巨噬细胞(RAW264.7)释放一氧化氮(NO)为试验体系,研究了5种取代基对黄酮类化合物体外抗炎活性的影响。具体评价了黄酮、5,7-二羟基黄酮、5,7,4'-三羟基黄酮、芹菜素-7-葡萄糖苷及蒙花苷的体外抗炎活性。结果表明5,7,4'-三羟基黄酮能明显抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞NO的释放,5,7,4'-三羟基黄酮的4'羟基是其活性的必需基团。     

连翘酯苷的研究进展

连翘酯苷作为连翘属植物中的主要有效成分之一,目前被广泛研究.连翘酯苷是一种还原剂,具有多种药理作用,包括有很强的抗菌活性,其抗菌谱广,并有较强的抗病毒和抗氧化活性,还有解热镇痛和免疫调节作用,为此,是一种多功效的中药活性成分,具有较大的研究价值.     

连翘酯苷对LPS诱导的肉鸡法氏囊中NO及抗氧化酶活性的影响

本试验研究了连翘酯苷对内毒素(LPS)诱导的肉鸡法氏囊中一氧化氮(NO)、总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量的影响.结果表明:连翘酯苷组中T-AOC、T-SOD和GSH活性明显升高,与正常组比较差异显著(P＜0.05)；LPS组中NO和MDA含量明显升高,T-AOC、T-SOD和GSH活性明显降低,与正常组比较差异显著(P＜0.05)；连翘酯苷治疗组中NO和MDA含量明显降低,T-AOC、T-SOD和GSH活性明显升高,与LPS组比较差异显著(P＜0.05).研究结果表明:连翘酯苷可提高肉仔鸡抗氧化功能,并且可以抑制由LPS引起的氧化反应.     

白僵蚕不同浓度乙醇提取物的体外抗氧化作用研究

以对DPPH自由基和羟基自由基的清除活性以及还原力为指标,测定白僵蚕不同浓度乙醇提取物的体外抗氧化作用.结果显示,白僵蚕65％、80％、95％乙醇提取物均具有较强的还原力以及对DPPH自由基和羟基自由基的清除作用,其中以白僵蚕80％乙醇提取物的体外抗氧化作用更强.结果表明,白僵蚕80％乙醇提取物富集了白僵蚕的主要抗氧化作用药效成分,可用于白僵蚕的抗氧化资源深度开发.     

番木瓜叶多酚的提取及抗氧化性能研究

本文以甲醇溶液作为提取试剂,以山奈酚和抗坏血酸为参照物,通过DPPH和ABTS自由基清除能力、总还原能力以及铁离子还原/抗氧化能力测定 (FRAP) 研究了番木瓜叶的抗氧化能力。结果表明该种方法提取总酚产率较高,并且番木瓜叶具有良好抗氧化活性和自由基清除能力。进一步试验表明木瓜叶的自由基清除能力与溶液中总酚的浓度成正比关系。该研究不仅能提高番木瓜的整体利用价值,还为果叶等废弃物利用提供可靠理论依据。     

马链球菌兽疫亚种烯醇化酶对小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响

旨在研究马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi ssp.zooepidemicus，SEZ）烯醇化酶（enolase，Eno）对小鼠肺泡巨噬细胞（RAW264.7）吞噬能力的影响。通过构建原核表达质粒获得重组烯醇化酶（rEno），采用台盼蓝活细胞计数法，判定在不同处理浓度和时间下rEno蛋白对RAW264.7细胞的细胞毒性。将rEno蛋白与RAW264.7细胞共孵育后，用SEZ作用于细胞并检测细胞吞菌数量，判断RAW264.7细胞对SEZ的吞噬活性。进一步通过活细胞稳定同位素标记技术（SILAC）和蛋白质谱分析技术（LC-MS/MS），筛选到RAW264.7细胞中可能与SEZ Eno存在相互作用的候选蛋白。结果发现，10 μg·mL^-1 rEno蛋白处理对RAW264.7细胞有明显的细胞毒性，且10 μg·mL^-1 rEno蛋白处理RAW264.7细胞2和4 h可显著抑制其对SEZ的吞噬作用（P<0.01、P<0.05）。初步筛选到RAW264.7细胞中动力蛋白激活蛋白亚单位蛋白（dynactin subunit protein 2，Dctn）、整合素α-M蛋白（integrin alpha-M）等17种可能与Eno发生互作的蛋白。本研究获得了rEno重组表达蛋白，发现rEno可减少RAW264.7细胞对SEZ的吞噬，互作蛋白的初步筛选也为进一步揭示Eno在SEZ抗吞噬中的作用机制奠定了基础。     

植物乳杆菌胞外多糖的单糖组成及抗氧化活性

分析植物乳杆菌胞外多糖的单糖组成,同时对其抗氧化活性进行研究。以植物乳杆菌发酵液为原料,通过水提醇沉方法得到植物乳杆菌粗多糖（DZ）,经DEAE-52纤维素柱分离纯化收集得到DZ-1与DZ-2 2 种多糖组分,采用气相色谱法对DZ-1与DZ-2中单糖组成进行分析,测定其1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基和2,2’-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）阳离子自由基清除率,对2 种多糖组分的抗氧化活性进行研究。结果表明：DZ-1为仅含葡萄糖的均多糖,DZ-2则为由阿拉伯糖与半乳糖组成的杂多糖,其单糖组成及百分比含量比值为阿拉伯糖∶半乳糖=46.03∶53.89;抗氧化实验结果表明,DZ-1与DZ-2均具有一定的DPPH自由基、羟自由基和ABTS阳离子自由基清除能力。     

地黄渣色素抗氧化性与稳定性研究

试验旨在研究地黄渣色素抗氧化性及色素稳定性。试验采用超声辅助浸提法提取地黄渣色素，检测地黄渣色素对2, 2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基、1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基和羟基自由基的清除率，考察温度、光照、金属离子和pH值对地黄渣色素稳定性的影响。结果显示，地黄渣色素具有较强的抗氧化活性，且对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基均具有一定的清除能力。稳定性试验结果表明，地黄渣色素具有较好的热稳定性和宽泛的pH值稳定性，耐受紫外光照，强酸和金属离子会降低色素稳定性。研究表明，地黄渣色素的抗氧化性和稳定性较好，具有开发成为饲用色素的潜力。