广西黑山羊伪结核棒状杆菌的分离与鉴定

从广西某养殖户发病黑山羊的脓肿脓汁中分离获得1株无荚膜、不形成芽孢的革兰氏阳性球杆菌,该菌在含血液或血清的琼脂培养基上,可生长成直径1 mm左右、干燥、中央凸起、不透明呈灰白色、边缘不整齐、伴有β溶血环的菌落,而在普通培养基上生长不良,在麦康凯琼脂培养基上不能生长。经生化试验、PCR鉴定及测序分析,证实该菌为伪结核棒状杆菌,动物试验证实该菌为致病菌。最后根据药敏试验结果选择敏感抗生素对发病黑山羊进行治疗,并提出综合防控措施。     

山羊感染伪结核棒状杆菌病的诊断

贵州某羊场山羊群患有以淋巴结肿大、化脓为主要特征的疾病,疑似山羊伪结核棒状杆菌病.从10只患病羊的淋巴结脓肿中分离得到10株病原菌,经对该病原菌进行病原形态、培养特性、生化特性及致病性等鉴定,结果该病菌为致病性伪结核棒状杆菌,该病确诊为山羊伪结核棒状杆菌病.     

谷氨酸棒杆菌麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因的克隆与表达

从谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)基因组中克隆到麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因(treZ),将其插入大肠杆菌表达载体pRSET-B并转化宿主菌E.coli BL21(DE3)pLysS获得重组基因工程菌。经IPTG诱导表达,得到麦芽寡糖基海藻糖水解酶,溶解表达的目的蛋白约占胞内总蛋白的40%,有部分目的蛋白形成包涵体。经薄层层析与离子色谱共同检测证实,该麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase)与麦芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase)共同作用于糊精溶液,可得到产物海藻糖,具有工业应用前景。     

谷氨酸棒杆菌关键酶活性与苏氨酸高产的关系

从微生物代谢途径和关键酶活性的关系入手,分析了谷氨酸棒杆菌的两种关键酶活性及其与L-苏氨酸产量的关系.发现谷氨酸棒杆菌随着遗传特性的变化,其高丝氨酸脱氧酶的活性从原始菌株WS4006的0.124 9 U增加到Y-1(L-Met+L-Lys-+AHVr+Ile-)的0.416 0 U,是出发菌的3.33倍,天冬氨酸激酶的活性由24 U达到39 U,是出发菌的1.65倍,L-苏氨酸产量达到4.14g/L,比出发菌产量0.31g/L提高了14.03倍.     

稀土元素镧对Corynebacterium pekinense发酵赖氨酸的影响

[目的]研究稀土元素镧对北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)的生长及产物合成的影响。[方法]通过全因子试验设计,分析了在北京棒杆菌的发酵培养基中添加不同配比稀土元素镧对其赖氨酸产量的影响。[结果]低剂量的稀土元素镧可以促进北京棒杆菌生长并积累代谢产物赖氨酸,利用Matlab软件优化培养基中显著影响成分,得到稀土镧离子的最佳浓度为78 mg/L,葡萄糖为36 g/L,牛肉膏为4.5 g/L,蛋白胨为20 g/L。[结论]该研究初步确定了在北京棒杆菌培养中,La+的适宜添加量及该菌产生赖氨酸的最适培养基组成。     

谷氨酸棒杆菌麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因的克隆与表达

采用PCR方法从谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）基因组中分离得到2.4 kb的麦芽寡糖基     

谷氨酸棒状杆菌发酵生产L-精氨酸的溶氧条件优化

为了确定L-精氨酸发酵过程中最合适的溶氧浓度,通过控制5%、20%和35%这3种溶氧水平,探讨不同溶氧条件下的谷氨酸棒状杆菌ATCC14067-SG的L-精氨酸产量,并通过分析生长和关键代谢产物的方式,研究不同溶氧下精氨酸积累差异的原因。结果表明,在5%溶氧条件下,乳酸、丙氨酸、赖氨酸、鸟氨酸和谷氨酸的积累最高;35%溶氧条件下,乳酸、赖氨酸和鸟氨酸的积累有所改善,但丙氨酸和谷氨酸的积累仍然很高;在20%溶氧的发酵条件下,谷氨酸棒状杆菌的生长略好,且乳酸、丙氨酸、赖氨酸、鸟氨酸和谷氨酸的积累量显著降低。溶氧水平的不同,改变了谷氨酸棒状杆菌糖酵解和TCA循环的代谢流量。低溶氧条件下,TCA循环减弱,而过高的溶氧又会导致副产物的积累。在较为适中的20%溶氧下,谷氨酸棒状杆菌ATCC14067-SG的L-精氨酸产量最高,是35%溶氧水平的117.28%,5%溶氧水平的140.53%。     

谷氨酸棒杆菌乳酰谷胱甘肽裂合酶基因克隆、表达及活性分析

乳酰谷胱甘肽裂合酶是生物体内降解丙酮醛的重要酶之一。食品级微生物谷氨酸棒杆菌ATCC13032基因组上的NCgl0106预测为乳酰谷胱甘肽裂合酶基因,但尚缺乏实验验证。本试验首先通过pCR技术扩增出预测的谷氨酸棒状杆菌ATCC13032乳酰谷胱甘肽裂合酶基因lac,并将之与表达载体pET-28a连接,转化BL21(DE3)感受态细胞,成功获得工程菌E.coli BL21(DE3)/pET-28a-lac。然后,使用IpTG诱导E.coli BL21(DE3)/pET-28a-lac表达重组蛋白Lac。SDS-PAGE试验结果表明:重组Lac蛋白在大肠杆菌进行了可溶性表达,其分子量约为14 kDa。最后对重组Lac蛋白进行了分离纯化、活性检测及酶学特性分析。应用His-tag纯化获得的重组蛋白溶液浓度为604.9μg/mL;活性检测显示重组Lac蛋白能催化丙酮醛和谷胱甘肽生成S-D-乳酰谷胱甘肽,表明谷氨酸棒杆菌lac基因是乳酰谷胱甘肽裂合酶基因;酶学特性分析表明重组乳酰谷胱甘肽裂合酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为7,金属离子K~+和Ca~(2+)对其活性略有增强作用,Ba~(2+)对酶活性几乎没有影响,Zn~(2+)、Mg~(2+)和Fe~(2+)对酶活性有一定的抑制作用,Co~(2+)和Mn~(2+)几乎完全抑制其活性,酶反应米氏常数K_m值为0.223 2 mmol/L,最大反应速率为0.025 mmol/(L·min)。     

谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因强启动子的鉴定

鉴定强启动子可为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)代谢工程育种及重组蛋白生产提供高效的基因表达调控元件,但谷氨酸棒杆菌内源性强启动子的鉴定鲜有报道。本试验进行谷氨酸棒杆菌ATCC13032菌株细胞全蛋白二维电泳并对高表达蛋白质斑点进行质谱分析,选取分子量大小约为30 kDa、等电点约为4.6的斑点作为研究对象,分析其所对应蛋白编码基因的启动子。启动子预测结果表明,谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因启动子P0864转录活性强。将强启动子Ptac-M和启动子P0864分别插入启动子探测载体pDXW-11,转化ATCC13032菌株感受态细胞,获得工程菌株C. glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C. glutamicum/pDXW-11-P0864。氯霉素耐受性试验结果显示,菌株C.glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C.glutamicum/pDXW-11-P0864的氯霉素耐受性分别为30和40μg/mL;报告蛋白CAT氯霉素酰基转移酶活性检测结果显示,C.glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C.glutamicum/pDXW-11-P0864菌株细胞抽提物上清液CAT蛋白氯霉素酰基转移酶比活力分别为4.50和6.12 U/mg;氯霉素乙酰基转移酶基因cat转录水平的荧光定量PCR试验检测结果显示,cat基因在启动子P0864的控制下,其转录水平是在Ptac-M控制下转录水平的1.84倍。以上结果表明,谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因启动子P0864是强启动子。     

谷氨酸棒状杆菌gdh基因在黄色短杆菌C-11中的克隆及表达

[目的]研究谷氨酸脱氢酶的表达对L-丝氨酸产率及发酵效率的影响.[方法]从谷氨酸棒杆菌模式菌株C.glutamicum ATCC39135中克隆出gdh基因,以大肠杆菌-黄色短杆菌穿梭表达载体pEC7为基础,构建重组质粒pEC7G,并转化黄色短杆菌B.flavum C -11,获得重组菌株C-11G.[结果]重组菌株C-11G的GDH酶活力提高32.7;,产酸率为15.28 g/L,比原宿主菌提高了33.80;.[结论]成功构建重组菌株C-11G,所克隆的gdh基因有较高表达活性,并对L-丝氨酸产量的提高有促进作用.     

峄城石榴产业比较优势测算及地域对比分析

运用2005～2012年的数据,测算出峄城石榴产业的效率比较优势指数、规模比较优势指数、效益比较优势指数和综合比较优势指数,并与峄城周围其他地区的石榴产业进行比较优势对比分析,总结峄城石榴产业的比较优势发展状况。结合实际情况,发现土壤环境恶化、劳动力不足、品种结构混杂是造成峄城石榴产业比较优势下降的主要原因,对此提出了加大科研投入、鼓励农户以合作社方式生产、石榴的集约化生产等措施来提升峄城石榴产业的比较优势。     

梅花鹿瘤胃液中棒状杆菌的分离鉴定与系统发育树的构建

营养琼脂平板上需氧、厌氧培养梅花鹿瘤胃液中的细菌,挑取菌落,纯化培养,观察个体和菌落形态特征,同时进行生理生化特征鉴定;对细菌16Sr DNA测序,建立系统发育树。结果表明,分离出18株棒状杆菌科棒状杆菌属菌株,其中11株与瘤胃棒状杆菌同源性达99.93%以上,2株与嗜甘氨酸棒状杆菌同源性达99.71%,5株与极小棒状杆菌同源性为96.83%;结合生理生化鉴定结果,分离的18株细菌均为棒状杆菌科棒状杆菌属细菌。     

双峰驼假结核棒状杆菌病的间接红细胞凝集试验诊断

用间接红细胞凝集试验测定了以假结核棒状杆菌人工感染的1峰和本茵甲醛明矾菌免疫的6峰双峰驼的血清抗体,并绘制了产生的曲线。注射前抗体滴度均在1∶20以下,注射后约20天抗体滴度最高,有些达到1∶1280或1∶2560。以后滴度逐渐降低。6个月以后降到1∶20或更低。血清的第一管稀释度为1∶20。临床健康的双峰驼血清检查了69份。其中1份是曾患假结核棒状杆菌病痊愈者,抗体滴度为1∶80,另2份滴度为1∶20。其余66份均在1∶20以下。并检查本病患驼的血清10份,其中9份为1∶80或更高,1份为1∶40。因此初步提出间接红细胞凝集试验诊断双峰驼假结核棒状杆菌病的判定标准:抗体滴度1∶20为阴性,1∶40为可疑,1∶80为阳性,说明用本法进行诊断本病是快速而可靠的。     

论比较原理与比较思想史

比较原理是理解一切比较活动的基础，也是比较思想史方法论的基础。比较原理是一个有待专门探讨的普遍问题。第一种意义的比较，就是树立反绝对化的态度、信念和方法。第一种意义的比较用到比较思想史研究领域，一方面是要打破各种“中心主义”观、“绝对主义”观，另一方面，是要在相对、平等和开放的原则下探讨各国各种思想文化形态。第二种比较是寻求特质的认知，通常人们将这种比较理解为辨析同异，我们姑且把它叫做特质比较。这个意义上的比较和“类比”有一定的相通性。这种比较用到比较思想史上有利于区分思想的社会历史原因、形态和类型。第三种比较是找关系，也就是说在关系的视野中看问题，或者说是通过比较揭示与建构多种思想对象的关系之网。用到思想史比较研究中，是要通过比较建立系统的、复杂的思想关系网络。将比较关系和比较思维带入思想史研究，必然的结论就是要树立“世界思想史”的目标，或者说比较思想史的根本目的就是为了重建“世界思想史”。     

谷氨酸棒菌DC1对重金属污染土壤的低温修复及其稳定性

耐冷菌在低温下能通过诱导作用形成重金属的碳酸盐沉淀,在寒区重金属污染土壤修复方面具有重要的应用潜力,但目前缺乏对多种重金属污染土壤的修复及其稳定性的研究.试验研究了1株耐冷碳酸盐矿化菌(谷氨酸棒菌DC1)在低温条件下对土壤中4种重金属的固定作用及其稳定性.结果 表明:菌株DC1的发酵液可通过诱导作用将土壤中的可交换态C...     

沾化冬枣产业比较优势测算及地域对比分析

根据2007~2014年数据,采用综合比较优势指数模型测算沾化各镇冬枣产业的比较优势,总结各镇冬枣产业发展现状。结果表明,由于土壤肥力、技术水平、种植规模和政府支持力度不同,造成了各镇冬枣产业比较优势的差异。对此提出了沃土工程、技术更新、精细管理、政府引导、合理分工等建议,促进沾化冬枣产业的协调发展。     

高效液相色谱法测定谷氨酸棒杆菌发酵液中17种氨基酸

[目的]建立一种简单高效、可同时检测发酵液中17种氨基酸的方法,并利用此方法对发酵液中的氨基酸进行定量分析。[方法]以2,4-二硝基氟苯为衍生试剂,使用Phenomenex Gemini NX C18(250.0 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温30℃,流动相A为0.05 mmol/L乙酸钠溶液,流动相B为乙腈-水(1∶1,V/V),梯度洗脱,检测波长为360 nm。[结果]17种氨基酸在0.01~2.00 g/L线性相关良好,各相关系数在0.990以上,各氨基酸的加样回收率为87.4%~105.1%。采用该方法对发酵液中的氨基酸进行分析,有10种氨基酸积累,其中谷氨酸、瓜氨酸、精氨酸积累量较大。[结论]该研究建立了一种简单高效、可同时检测发酵液中17种氨基酸的方法,为精氨酸进一步代谢改造提供理论依据。     

谷氨酸棒状杆菌乙酸盐代谢PTA、AK、ICL和MS酶活性研究

从谷氨酸棒状杆菌乙酸盐代谢中涉及的磷酸转乙酰酶PTA、乙酸盐激酶AK、异柠檬酸裂解酶ICL和苹果酸合成酶MS 4种酶入手,建立了一套稳定的酶活性测定方法,并对这些酶在葡萄糖和乙酸盐不同碳源代谢中的酶活性特征进行了比较分析,发现碳代谢中存在葡萄糖效应;乙酸盐对谷氨酸棒状杆菌PTA、AK、ICL和MS酶活性有明显的诱导作用.