用免疫组织学方法检测猫皮下伪肿瘤中的皮肤真菌

应用小鼠抗犬小孢子菌特异性多克隆抗体，以生物素－亲和素酶标免疫组织学方法检测猫皮下伪肿瘤病理切片中对应的犬小孢子菌抗原，并与其它病原真菌进行了对比。试验结果显示，将真菌体外培养物经轻度匀浆的混悬液给小鼠皮下接种，可获得高滴度的特异性抗体。１：５００￣１：１０００稀释的血清和１：１００的二抗，以氨基乙烯苄唑作底物进行免疫组织学检验，可将组织切片中对应的抗原染成红色。犬小孢子菌抗体与所检酵母型真菌的抗     

酸处理的沙门氏菌作为异种细菌抗原的免疫载体

用酸对鼠伤寒沙门氏菌进行处理,制成裸细菌,作为空肠弯曲菌共同抗原(CA)的载体.用这种裸细菌和CA的复合物免疫小鼠,以间接ELISA和琼脂糖凝胶扩散沉淀反应检测免疫反应的变化及血清效价.结果表明,用这种方法免疫的小鼠,其血清抗体的ELISA滴度与对照组(福氏完全佐剂+CA组,CA组)相差不显著,但能与可溶性CA形成沉淀线,并含有IgM和IgG两类抗体;而对照组则不与CA出现沉淀反应,且只含IgM一类抗体.这表明,酸处理的沙门氏菌作为异种细菌抗原的载体,在改变机体对某种抗原的免疫类型上具有一定的作用.     

J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立

利用抗J亚群禽白血病病毒（ALV—J）囊膜蛋白特异性单克隆抗体JE9，建立了检测ALV—J env抗原抗体免疫复合物的ELISA方法。应用该方法检测SPF鸡血清、鸡抗禽流感H9亚型阳性血清、鸡沙门氏菌阳性血清、鸡腺病毒阳性血清、鸡新城疫阳性血清．结果均为阴性，无交叉反应；抗ALV—J阳性血清与ALV—J特异性单克隆抗体JE9能相互阻断；ALV—J阳性血清经酸处理后，ELISA检测的D490差值明显下降。对部分攻毒鸡血清样本及田间ALV—J阳性血清样本进行电镜观察，可见ALV—J样病毒粒子及ALV—J样免疫复合物。经与间接免疫荧光（IFA）检测ALV—J env抗体结果比较表明，建立的ELISA方法与IFA方法两者具有较好的群体符合率，群体符合率为8／9。这些结果表明，本研究建立的ELISA方法在ALV—J的诊断中具有很好的应用前景。     

弓形虫新的表面抗原SRS20A的鉴定及特征化

克隆弓形虫上海SHR株SRS20A基因,构建原核表达体系,通过诱导表达和蛋白纯化,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,对蛋白进行特征化鉴定。采用PCR技术扩增弓形虫SRS20A基因,克隆至原核表达载体pET-30a（+）中,转化大肠埃希菌（E. coli）,IPTG诱导目的蛋白表达,采用镍亲和层析法获得纯化蛋白并免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,使用弓形虫阳性血清检测SRS20A蛋白的反应原性,应用纯化的rSRS20A蛋白通过ELISA方法对猪临床样品进行检测,利用Western blot技术检测多克隆抗体与弓形虫天然蛋白的反应性,通过间接免疫荧光观察SRS20A蛋白在虫体内的定位情况。成功从弓形虫基因组中扩增出SRS20A目的基因,构建了pET-30a-SRS20A重组质粒,利用小鼠感染弓形虫的阳性血清可以特异性识别重组蛋白rSRS20A,ELISA试验表明rSRS20A可以与猪临床血清特异性反应,证明SRS20A具有良好的反应原性。制备并获得了抗SRS20A重组蛋白的多克隆抗体,通过Western blot可检测出弓形虫天然蛋白SRS20A的特异性条带。通过间接免疫荧光方法鉴定S...     

藻胆蛋白荧光探针在动物疫病检测中的应用展望

免疫荧光检测法是一种标记分析法,在预防疾病发生、发展以及致病机制研究和定位检测过程中发挥着十分重要的作用。免疫荧光检测法的灵敏性和特异性主要取决于抗体和荧光染色材料2个方面,传统的荧光染色材料FITC存在非特异性荧光干扰,在检测过程中常常存在无法准确判断的现象,而藻蛋白的发展和应用就为提高免疫荧光检测法的灵敏性和特异性提供了巨大的帮助。笔者主要结合实际情况,就藻胆蛋白荧光探针在鸡法氏囊病毒检测中应用进行了分析。     

间接血凝试验测定鸡多杀性巴氏杆菌抗体

用以超声波打碎的禽多杀性巴氏扦菌P1059致敏的醛化绵羊红细胞测定Vac禽霍乱弱毒苗免疫鸡的血清抗体滴度。结果表明间接血凝具有较好的特异性和敏感性。在免疫后14天,免疫鸡的血清抗体达到高峰,后逐渐降低,抗体的间接血凝滴度达免疫后的8周左右。结果证明,间接血凝滴度与对抗强毒攻击的保护作用是一致的。     

猪软骨多糖与H22鼠肝癌细胞共培养物对小鼠体液免疫保护作用的研究

本试验以猪软骨多糖与H22鼠肝癌细胞的共同培养物(PS&H22)为研究对象,探讨其对小鼠体液免疫的影响.结果表明:PS&H22组小鼠的生命延长率和存活率极显著高于模型组(P<0.01);免疫荧光检测结果显示PS&H22免疫小鼠血清可与H22细胞发生特异性结合,说明免疫小鼠体内存在抗H22细胞特异性抗体;ELISA检测表明PS&H22免疫小鼠抗体效价大于12800,进一步证明免疫小鼠血清中抗体含量高,且其抗肿瘤体液免疫得到增强.     

牛农夫肺炎

牛农夫肺炎(bovine farmer's lung)是由发霉干草的灰尘引起的舍饲成年牛(乳牛)的一种外因性变态反应性支气管肺炎。霉干草灰尘内含有来源于干草小多孢菌的变态原。临床表现突然发作,出现明显的呼吸加快和呼吸困难。剖检可见胸     

普通高温放线菌与饲草土尘致家兔实验性尘肺的研究

用从饲草中分得的土尘和从甘肃河西地区气喘病马肺中分到的一株普通高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris——T.v.),对50只家兔进行了实验性尘肺的研究。从病理形态可见,只有在土尘和菌尘先后感染或同时感染后其病理学改变才与河西地区马气喘病自然病例的病变更为相似。电镜检查,在实验兔肺泡巨噬细胞内可见到尘粒和T.v.孢子残骸。CIEP和ELISA检测,在染菌3次以上实验兔血清中检出了沉淀素抗体和循环免疫复合物。免疫荧光技术查明在肺组织内有T.v.孢子和IgG沉着。结果表明,在混合性尘肺的发病机理中,土尘和普通高温放线菌存在相互协同的关系,且尘肺的发生是机体对土尘所致肺泡损伤的非特异修复及对这种放线菌孢子侵害发生Ⅰ、Ⅳ型变态反应所引起的。     

普通高温放线菌与饲草土尘在家兔的实验尘肺研究

用从饲草中分得的土尘和从甘肃河西地区气喘病马肺中分到的一株普通高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris—T.v.),对50只家兔进行了实验尘肺的研究。病理形态上可见,只有在土尘和菌尘先后感染或同时感染后其病理学改变才与河西地区马气喘病自然病例的病变更为相似。电镜检查,在实验兔肺泡巨噬细胞内可见到尘粒和T.v.孢子残骸。CIEP和ELISA检测,在染菌3次以上实验兔血清中检出了沉淀素抗体和循环免疫复合物。免疫荧光技术查明在肺组织内有T.v.孢子和IgG沉着。结果表明,在混合性尘肺的发病机理中,土尘和普通高温放线菌存在相互协同的关系,且尘肺的发生是由机体对土尘所致肺泡损伤的非特异修复及对这种放线菌孢子侵害发生Ⅲ、Ⅳ型变态反应所引起的。     

抗原-抗体复合物疫苗研究进展

抗原-抗体复合物疫苗是由特异性高免血清按照恰当的比例与抗原混合而制成。免疫复合物疫苗能够增强抗原递呈细胞的递呈能力,能有效的提高机体的免疫能力。近年来国内外研究者做了大量的相关研究,在鸡新城疫和传染性法氏囊病等禽病的复合物疫苗研究中取得了一定成果,在乙型肝炎复合物疫苗研究中取得了突破性的进展,为病毒性疾病的防控开辟了一条新的途径。论文就免疫复合物疫苗研究方面的优点、作用机制及应用前景进行了综述。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

本研究将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)HuN4株的N基因克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中,经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达了重组His-N蛋白,蛋白分子量为14 kDa,能被PRRSV阳性血清特异性识别。经超声裂解和SDS-PAGE检测后,重组蛋白主要以可溶性形式表达。随后利用磁珠纯化重组蛋白,采用背部皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,经四次免疫后获得多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光检测结果表明,制备的多克隆抗体具有良好的免疫反应活性,能够与真核表达或病毒的N蛋白发生特异性反应。     

放射免疫法检测急性弓形体病猪血清中循环免疫复合物和抗体

本文用放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)检测急性弓形体病猪血清110份,经感染后第五天血清中出现明显的弓形体特异性抗体和免疫复合物,而健康对照猪血清10份全部阴性。此种抗体与免疫复合物连续测定26天,其结果一直保持在阳性范围之内。急性弓形体病的临床期诊断尤其对人的弓形体病更为重要。目前国内外都采用血清学方法检测康复后血清抗体,但是此法未能做出快速确诊,从而拖延时间影响了对症治疗。放射免疫法以抗原和抗体特异性免疫反应为基础,是一种超微量分析技术,它能够探测101~(-12)克水平元素,其方法具有灵敏、精密度高,特异性强等的优点。上述研究将为今后建立快速诊断弓形体病提供新的测试手段,值得推广使用。     

抗原─抗体复合物疫苗

抗原抗体复合物疫苗（ａｎｔｉｇｅｎａｎｔｉｂｏｄｙｃｏｍｐｌｅｘｖａｃｃｉｎｅ）,又称病毒抗体复合物疫苗（ｖｉｒｕｓａｎｔｉｂｏｄｙｃｏｍｐｌｅｘｖａｃｃｉｎｅ）或免疫复合物疫苗（ｉｍｍｕｎｅｃｏｍｐｌｅｘｖａｃｃｉｎｅ）,是一种新兴疫苗,由特异性高免血清（抗体）按照恰当的比例与抗原（如传染性病毒）混合而成。目前此项技术己成功用于鸡传染性法氏囊病、新城疫的免疫。对呼肠孤病毒也进行了类似实验,只是疫苗配制技术尚未最优化。本文对禽用抗原抗体复合物疫苗的研究情况做了概述。研究概况抗体和传染性…     

病毒 - 抗体复合物疫苗应用研究进展

病毒－抗体复合物疫苗应用研究进展ＣｒａｉｇＥ．Ｗ．等著赵有编译傅先强校利用特异性高免血清或抗体按照适当的比例与传染性病毒混合做成病毒－抗体复合物，可作为疫苗（ＩＢＤＶ－Ａｂ）给动物接种。目前此项技术已成功地用于鸡传染性法氏囊炎的免疫。但对病毒和抗体的...     

鸡抗REV血清的制备与检定

用网状内皮组织增生症病毒（REV）HA9901株免疫SPF鸡,无菌采血制备鸡抗REV血清。通过ELISA、IFA、AGP、HI等方法对制备的血清进行检测,未检出禽类常见的其他17种（或亚型）病毒的抗体,该血清具有良好的特异性。通过测定,该血清用于间接免疫荧光试验（IFA）的效价为1：2000,用于IFA检测REV的染色效果与REV单抗（11818和11854的混合物）相当。试验结果表明,该批血清1000倍稀释可作为一抗,用于REV的间接免疫荧光检测。     

人参皂苷Re多克隆抗体的制备

为了制备半抗原人参皂苷Re的特异性多克隆抗体,用过碘酸钠法构建了Re和牛血清白蛋白（BSA）的偶联物作为抗原,分5次免疫新西兰大白兔、取免疫前的新西兰大白兔血清作为空白对照,第5次免疫后采取血清,通过酶联免疫法（ELISA）鉴定血清中Re多克隆抗体的效价,再用竞争性抑制法检测抗体的灵敏性和特异性。,结果表明,抗原Re—BSA偶联物制备成功,第5次免疫后,抗体的效价达到1：40960,与其他人参皂苷交叉反应率低于2％,特异性强,可用于人参皂苷Re的检测。     

国外猪增生性肠炎诊断方法研究进展

猪增生性肠炎（Porcine Proliferative Enteritis，PPE）在全球大部分国家的养猪地区均有分布，是影响养猪业的世界性疾病之一。感染猪发病时临床表现大多不明显或缺乏特异性，使得该病的诊断出现一定难度。国外曾先后建立多种检测技术，用病理剖检、组织染色、免疫组化等方法检测肠损伤情况，用酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光抗体试验、免疫过氧化物酶单层试验等方法检测血清中胞内劳森菌抗体水平，用PCR等方法直接检测粪便中病原。以上方法根据其不同特点适用干不同场合的诊断。目前对ELISA和PCR方法的研究有较大进展，已有大量临床应用方面的报道。     

驴抗犬细小病毒IgG的研制

用关中驴制备抗犬细小病毒（CPV）免疫球蛋白，预防和治疗犬CPV感染。制备CPV抗原复合物，通过免疫驴，用纯化方法从驴血清中提取特异性抗体（IgG），经过物理化学检定、血清学、免疫金电镜技术、动物效力实验。免疫驴均可产生特异IgG，免疫金电镜可观察到抗原抗体免疫复合物；血凝抑制试验（HI）≥1：512（IgG浓缩浓度为60mg/mL)；可保护犬免受CPV攻击；室温保存半年，4℃两年效价不变。已成功地应用CPV免疫驴制备出高效价特异性抗CPV－IgG。     

携带DEV-gB/NP28重组减毒沙门氏菌诱导鸭的免疫应答研究

为探究表达鸭肠炎病毒(DEV)gB/NP28双基因重组减毒沙门菌口服疫苗在鸭体内诱导免疫应答能力,本研究将构建的重组菌(pcDNA3.1-DEV-gB/NP28)/SL7207、DVE弱毒疫苗、重组质粒pcDNA3.1-DEV-gB/NP28及PBS分别免疫雏鸭,通过间接免疫荧光法检测免疫鸭脾脏、胸腺、法氏囊、哈德氏腺组织中的抗原表达;双抗体夹心ELISA方法检测肠道黏膜sIgA;间接ELISA方法监测血清中DEV特异性抗体、外周血T淋巴细胞增殖及IFN-γ、IL-4细胞因子含量,对该口服疫苗进行免疫学评价。结果表明,重组菌能够诱导鸭产生良好的黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫应答;攻毒试验显示,在DVE强毒攻击下重组菌免疫可提供75%以上的保护,表明重组菌免疫对DEV攻击具有一定的免疫保护作用。