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1.
将人尿激酶原(Pro-UK)基因cDNA分别插入到真核表达载体pcDNA3的CMV启动子和pSV2-neo的SV40启动子下游,构建了重组表达质粒pcDNA3-UK和pSV2-UK,分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染BHK21细胞。ELISA检测结果表明,pcDNA3-UK和pSV2-UK在哺乳动物细胞中能够表达,72h表达量分别为28.7ng/ml和13.5ng/ml。 相似文献
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诸葛菜基因启动子的分离 总被引:2,自引:0,他引:2
利用启动子探针型载体pSUPV2首次从诸葛菜总DNA中克隆了7个具有启动功能的DNA片段,转化E.coli表明最高卡那霉素(kna)抗性为140μg/ml,最低为20μg/ml。含启动子片段的7个重组质粒子分别命名为pSUPZ1-7,Southren印迹表明pSUPZ6对Kna的抗性功能来源于诸葛菜的10kb,5kb和3.9kb片段。 相似文献
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将组织型纤溶酶原激活剂基因cDNA经多次亚克隆插入到真核表达载体pSVL的SV40启动子和pcDNA3的CMV启动子下游,构建了重组表达质粒pSVL-tPA和pcDNA3-tPA。经酶切和Southern杂交鉴定,t-PA基因的插向正确,可用于哺乳动物细胞和个体表达系统中表达。 相似文献
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IBDV超强毒HZ株VP2基因的克隆和真核表达质粒的构建 总被引:3,自引:0,他引:3
利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增克隆传染性法低囊病病毒超强毒(vvIBDV)HZ株VP2基因,并VP2基因进行全序列测定、序列分析和聚类分析,同时将VP2基因与真核表达载体pcNDA3相连接。结果克隆到VP2基因全序列长1356bp,分析表明HZ株与欧洲超强毒株UK661高度相似,同时将VP2基因正向插入pcDNA3的CMV启动子下游,得到了VP2基因的真核表达质粒。为IBDV分子流行病学和基因工程疫苗的研究奠定了物质基础。 相似文献
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含有IBV S1基因的昆虫杆状病毒表达载体的构建 总被引:4,自引:0,他引:4
以含有鸡传染性支气管炎病毒Holte株S1基因的重组质粒pUC18-S1.Holte和pUC18-S‘1.Holte为材料,分别构建了可表达IBV S1基因的昆虫杆状病毒转移载体质粒pSXIVVI^+X3-S1.Holte(含IBV先导序列),pSXIVVI^+X3/4-S1.Holte(IBV先导序列为融合短肽),pAcGHL-C-S1,Holte。 相似文献
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鸡白细胞介素-2 cDNA克隆 总被引:7,自引:1,他引:7
用哺乳动物细胞表达克隆系统克隆了鸡IL-2cDNA。以ConA(20μg/mL)诱导SPF鸡脾脏淋巴细胞,第20小时收集细胞,提取mRNA,以SuperScriptPlasmidSystemforcDNASynthesis试剂盒合成cDNA,定向连结于穿梭质粒pSV·SportⅠ,构建cDNA文库。将文库分组提取重组质粒,转染COS-7细胞,表达cDNAs。以淋巴细胞增殖试验检测表达产物IL-2活性。经过3轮筛选,获得14个具有IL-2活性的克隆。选择其中4个进行酶切分析,结果显示这4个cDNA大小分别为1.5,1.0,0.8和0.8kb。 相似文献
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家蚕核多角体病毒Lef—1和DA26基因的克隆及部分序列分析 总被引:2,自引:1,他引:2
lef-1和DA26基因分别位于egt基因的上游和下游.从pUAc-egt中分离出EcoRI-XbaI1.1kb的egt基因片段,进行缺口平移标记,获得探针。与BmNPVDNA经HindⅢ酶切、电泳、转移至NC膜的DNA进行Southernblot杂交,发现BmNPVDNA的HindⅢD片段呈阳性。从BmNPV基因组中分离出10.4kb的HindⅢD片段,用EcoRI酶切得到HindⅢ-EcoRI2.2kb、EcoRI1.4kb和EcoRI-HindⅢ6.8kb3个片段,分别克隆于pUC19中,命名为pUHE2.2、pUE1.4和pUEH6.8。经双链测序并与AcNPV相关基因序列进行比较,发现lef-1基因被克隆于pUHE2.2中,DA26基因克隆于pUEH6.8中。从所测定的lef-1和DA26基因的启动子及5'端部分序列来看,它们在AcNPV和BmNPV之间有极高的同源性。 相似文献
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目的:从重组人Bcl-2质粒中制备对基因重组和DNA测序等有用的pBluescriptⅡKS(-)载体。方法:先将重组人Bc1-2质粒转化DH5α菌株,小规模制备此质粒DNA,然后从低熔点琼脂糖凝胶中回收其中用EcoRⅠ酶切的线性pBluescriptⅡKS(-)载体,用T4DNA连接酶催化连接并再次转化DH5α细菌,并用限制酶切鉴定,最后进行冻存和大量制备及纯化。结果:限制酶切分析证明两次转化的细菌分别是含重组人Bcl-2质粒和pBluescriptⅡKS(-)载体的工程菌。实验还大量制备了这两种质粒或载体DNA,并用聚乙二醇沉淀法进行了纯化。结论:利用分子生物学技术成功地从重组人Bcl-2质粒制备出pBluescriptⅡKS(-)载体。 相似文献
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本文报道采用反转录酶—聚合酶链式反应,体外扩增芜菁花叶病毒(TuMV)外壳蛋白基因及其克隆,并在大肠杆菌中获得表达的结果;从抗州市郊区感病的油菜上分离到一株致病力极强的芜菁花叶病毒分离物,提纯后,经50ng/mL蛋白酶K和0.5%SDS处理,苯酚/氯仿和氯仿抽提两次,酒精沉淀,获得了纯化的病毒RNA,该RNA与oligo(dT)_(15)退火后,在AMV反转录酶的作用下合成了单链cDNA,然后加入用以扩增TuMV-CP基因的上下游引物,35个循环后,得到了一条长约0.85kb的片段,将该片段克隆到pUC18质粒的SalⅠ限制性酶切位点,分析了限制性酶切图谱,分析表明该片段含有EcoRⅠ和XbaⅠ以及引物设计时带人的McoⅠ三个酶切位点,该片段克隆到大肠杆菌(Escherichiacoli)原核表达载体pKK233-2质粒的NcoⅠ和HindⅡ位点后,经IPTG诱导,以该病毒的抗血清为第一抗体,Westernblot检测该基因的表达产物,结果表明该基因的表达产物为TuMV-CP蛋白,因而认为所获得的扩增片段确为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因。 相似文献
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本实验所用的马传染性贫血病毒(EIAV)L株(EIAV-L)是我国研制成功的EIAV弱毒疫苗的原始强毒株。以EIAV-L感染马外周血液白细胞中DNA为模板,利用PCR技术,分4个片段扩增EIAV-L前病毒DNA,并分别克隆到载体质粒pBluescript SK中,得到 4个重组质粒p2.8、p2.4、p3.1和 p1.2,经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接,得到 EIAV-L前病毒基因组全序列。EIAV-L前病毒基因组全长 8235bp,其中 G+C含量为 38%。通过使用计算机软件DNASIS分析,EIAV-L与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为98.4%和96.9%。同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系,另外 EIAV-L与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性,这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程。基因组两端是长为316bp的LTR,其中U3为197bp,R为80BP,U5为39bp。前病毒基因组有 3个较大的开放阅读框架(ORF),分别编码 gag、pol和 env基因。gag基因位于 713~1912位碱基之间,全长1200bp;pol基因位于 1708~5109位碱基之间,全长 相似文献
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采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子-Ⅰ(huIGF-I)基因的4条寡核苷酸 片段,再通过片段1、2与3、4末端互补配对和Klenow酶促补平及酶切连接成为完整的huIGF-IDNA片段,用 EcoR I/PstI酶切后克隆于 pGEM T-Easy Vector,经测序证明所得 DNA序列与设计的序列完全一致;选用植物 偏爱密码子校正了启始密码子ATG下游的6个密码子,并在ATG处增加Kozak序列后,插入pBI121的BamHI/ SacI位点,构建了以 35S为启动子的植物表达载体;以 Hind II/EcoRI切下“35S-Kozak-IGF-I-NOS(ter.)”插入 pCAMBIA2300之Hind II/EcoR I位点,构建成huIGF-I植物表达载体;通过CaCl2直接转化法将表达载体导入农 杆菌EHA105(Rif.r),并以菌落原位杂交技术和 DNA dot blot对重组农杆菌进行了筛选,所获得的重组农杆菌菌株为培育huIGF-I豆药用植物奠定了基础。 相似文献
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用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ,从克隆载体pUTSⅡ中切出一个0.988kbTSPGⅡ基因,经EcoRI和BstXI酶切鉴定,同时表达载体也用相同的酶进行酶切,经琼脂糖凝胶电泳,分别回收TSPGⅡ基因和pSV·SPORTⅠ表达载体,用T4DNA连接酶定向连接,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取重组子,经EcoRⅠ,BstXⅠ和HindⅢ酶切鉴定,构建了重组表达质粒pSV·TSⅡ. 相似文献
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旋毛虫肌幼虫ES抗原基因TSPGⅡ在真核细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ从克隆载体pUTSⅡ中工出一个0.988kbTSPGⅡ基因,经EcoRⅠ和BstXⅠ酶切鉴定;表达载体用相同的酶切,经琼脂糖凝胶电泳,分别回收TSPGⅡ基因和PSV.SPORTⅠ表达载体,用T4DNA连接酶定向接连,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取重组,经EcoRⅠ,BstXⅠ和HindⅢ酶切鉴定,构建了重组表达质粒PSV.TSⅡ。利用脂质体作载体,将重且表达质粒转 相似文献
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利用低融点琼脂糖凝胶电泳,回收牛生长激素cDNA全序列,克隆于原核表达载体PT77-7中T7启动子下游,转化大肠杆菌E.coliDH5α,经分离,酶切分析,获得6个牛生长有质粒PTGH1-6,选取其中两质粒PTGH11-2,转化E.coliK83=pG1-2,42℃诱导30min,收集,破裂菌体,SDS-PAGE电泳检测,于22KD处有一特异性蛋白带,经ShamadzuCS930扫描测定,其表达量 相似文献
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本文作者构建了pXM1和pGCY6两个质粒,其中质粒pXM,含有高赖氨酸基因和GUS报告基因,质粒pGCY6则由裂解多肽Cecropin B基因和GUS基因组成。这两个基因均以CaMV35S作为启动子,以NOS作为终止子。经纯化的质粒DNA以PEG法导入4个水稻品种:89-2、Laccasin、Cypress、台北309细胞悬浮系的原生质休中,组织化学检测结果表明,GUS基因在原生质体、愈伤组织及 相似文献
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目的:从重组人Bcl-2质粒中制备对基因重组和DNA测序等有用的pBluescriptⅡKS(-)载体。方法:先将重组人Bcl-2质粒转化DH5α菌株,小规模制备此质粒DNA,然后从低熔点琼脂糖凝胶中回收其中用EcoR Ⅰ酶切的线性pBluescriptⅡKS(-)载体,用T4DNA连接酶催化连接并再次转化DH5α细菌,并用限制酶切鉴定,最后进行冻存和大量制备及纯化。结果:限制酶切分析证明两次转化 相似文献
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利用含有苜蓿花叶病毒中国分离株(AIMV-Ch)复制酶(P2亚基)基因编码区5’端cDNA(1306bp)的重组质粒pAM5和编区3’端及其非编码区(1234bp的重组质粒pAM3构建了含有复制(P2亚基)基因全长cDNA及其3’端非编码区的重组质粒pAM35,并将其重组于植物表达载体pGA643,构建其正链RNA的表达载体pGA35,为进一步开展转基因研究创造条件。 相似文献