呋喃唑酮人工抗原的制备

[目的]制备呋喃唑酮人工抗原。[方法]通过重氮化法和戊二醛法将半抗原FZ与载体蛋白质牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)耦联,制备人工免疫抗原和检测抗原,经SDS-PAGE电泳鉴定人工抗原是否耦联成功,用紫外可见分光光度计法测定耦联蛋白浓度。[结果]SDS-PAGE结果显示,用2种方法制备的人工抗原FZ-BSA和BSA、FZ-OVA和OVA的2组蛋白条带迁移距离均发生了变化,耦联物的迁移距离均小于其相对应的载体蛋白。[结论]通过SDS-PAGE鉴定呋喃唑酮人工抗原制备成功。     

标准SDS-PAGE图法测定大豆11S抗原蛋白含量的研究

分离纯化获得高纯度的大豆11S抗原蛋白后,以100μg/ml为浓度梯度差,制备100~2 000μg/ml浓度的11S抗原蛋白标准溶液,用SDS-PAGE电泳法制得梯度清晰的11S抗原蛋白浓度标准图。将待测定样品SDS-PAGE电泳后,通过与标准图比较可方便读出样品中11S抗原蛋白的浓度C0,并结合运用公式W=2.15×10-5.C0×100%,可快速计算出样品中11S抗原蛋白的含量。该测定方法具有方便、准确、灵敏度高等特点,适合进行大规模样品11S抗原蛋白含量的测定。     

旋毛虫肌幼虫排泄/分泌物抗原的研究

为了研究在特定条件下经体外培养的旋毛虫肌幼虫排泄/分泌物(ES)抗原的特性,通过体外培养将所收集到的ES抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、琼脂扩散试验进行分析。结果经SDS-PAGE分析出现了比较明显的2条蛋白带,其分子量为45 ku、49 ku;经琼脂扩散试验ES抗原与犬旋毛虫阳性血清出现了明显清晰的沉淀线,而与犬蛔虫阳性血清、犬绦虫阳性血清之间未出现沉淀线,ES抗原具有较强的特异性。表明研究结果为开展ES抗原的分子生物学的研究、分子生物学基因工程苗的研制打下了良好的基础。     

对多种口蹄疫疫苗有效抗原（146S）、总蛋白、内毒素三者含量测定的比较研究

对市场上流行使用几种口蹄疫灭活疫苗进行有效146S抗原、总蛋白及内毒素含量测定,同时对疫苗破乳后的水相进行了SDS-PAGE分析。不同疫苗的质量差异极其显著,有效146S抗原含量从未检出至8.53μg/头剂;总蛋白含量从未检出至4 325μg/头剂;内毒素含量从0.55至15.65 EU/头剂。运用SDS-PAGE、Western bolt技术分析表明各种疫苗所含杂蛋白含量及有效抗原量差异较大。部分疫苗的有效146S抗原含量不足,非抗原蛋白含量较大,大多数国产疫苗146S含量与非抗原蛋白之比在0.3%以下,这是造成很多口蹄疫疫苗免疫过程产生的副作用及免疫失败的主要原因之一。     

SDS-PAGE检测猪圆环病毒疫苗抗原含量的比较试验

疫苗免疫是防控2型圆环病毒感染的有效手段。目前,市售PCV2疫苗主要包括亚单位及全病毒灭活疫苗,但有效的抗原含量是疫苗质量的重要指征。本研究选取6种市售疫苗,通过不同提取方法,应用SDS-PAGE方法对其中抗原含量进行了检测比较。结果表明,应用柠檬酸钠法,经SDS-PAGE可进行PCV2亚单位疫苗中抗原含量的粗测。     

绵羊肺炎支原体Y98和丝状支原体丝状亚种PG3抗原的分析

用SDS-PAGE和双向电泳方法,对绵羊肺炎支原体标准株Y98和丝状支原体丝状亚种标准株PG3的全菌可溶性抗原进行分析.结果表明,用SDS-PAGE分析Y98有9条蛋白带,PG3有11条蛋白带,其中有2条相同蛋白带;用双向电泳分析Y98全菌可溶性抗原多肽斑点有288±9,主多肽斑点有47个,相对分子质量范围在27 000120 000;pI范围为4.436-7.164,PG3全菌可溶性抗原多肤斑点有243±11个,主多肽斑点有36个,相对分子质量范围在27 000～120 000,而pI范围为4.213-7.987,二者有21个相同多肽点,但其多肽含量略有差异.     

胰吸虫与肝片形吸虫成虫抗原的酶联免疫印迹分析

用SDS-PAGE和酶联免疫印迹试验(ELIB)分析胰吸虫成虫(EP）及其与肝片形吸虫成虫(Fh)交叉／共同抗原的分子量和免疫活性。SDS-PAGE结果显示，胰吸虫和肝片形吸虫成虫抗原的多肽均达30余条，EP抗原分子量在123kd以下，主带4条；Fb抗原分子量在83kd以下，主带4条；两者具相同分子量的多肽6条。ELIB结果显示，抗原与同源抗血清呈现颜色较深、数量较多的区带，而与异源抗血清则呈现数量不等的交叉／共同反应区带，表明两虫之间存在交叉／共同抗原性多肽。     

小反刍兽疫H蛋白主要抗原表位的原核表达

目的表达小反刍兽疫病毒H蛋白的主要抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫病毒H基因的主要抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的H基因的主要抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经不同浓度的IPTG诱导表达PPRVH基因的主要抗原位点;用SDS-PAGE和Western-blotting分析所有蛋白的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-H66-249和PET-28b-H281-550酶切后,均出现预期相符的片段;DNA测序表明插入片段的序列与小反刍兽疫H蛋白基因完全一致,其大小分别为569bp和831bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和Western-blotting检测,证明所有的蛋白均得到表达。结论成功表达了PPRVH基因的主要抗原蛋白,为日后的检测与预防工作奠定了基础。     

牛白血病病毒成分分析及生物活性的研究 Ⅰ.牛白血病病毒琼脂免疫扩散抗原的质量评价

对12批琼扩抗原,以紫外吸收法测定总蛋白台量;以SDS-PAGE技术(以SDS-7为标)结合Cs-930凝胶扫描测定每批样品的蛋白组分数、各组分的分子量和相对百分含量;以琼扩试验测定抗原效价。结果,总蛋白含量在30.76～85.8mg/ml之间;有11～20种组分,主要是分子量为15、24、28、34～38、51～53、58～60、64、70、96Kd和大于100Kd的10种组分;糖蛋白主要成分是53Kd;抗原滴度,P抗原为1:16～32,gP抗原为1:4～32。抗原活性火小与P~(24)和gP~(51)含量有关。冻干,对P抗原无影响,可使gP~(51)含量降低。与美国抗原对比分析证明,我所制造的琼扩抗原在产品质量上有的接近,有的超过。     

流行性乙型脑炎病毒E蛋白主要抗原表位的原核表达

为了克隆乙型脑炎病毒E蛋白主要抗原片段基因的原核表达系统,试验采用RT-PCR方法扩增乙型脑炎病毒E蛋白上2个重要抗原域73~88 aa和292~402 aa,并将其定向连接至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-EAB,再将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,应用SDS-PAGE和Western-blot技术对表达产物进行检测与鉴定。结果表明:经SDS-PAGE分析,表达出的目的蛋白主要以包涵体形式存在;再使用Western-blot技术对纯化复性后的包涵体进行检测,证实其具有免疫活性。     

用于ELISA的牛白血病病毒抗原的制备

人工感染牛白血病病毒(BLV)的绵羊血清IgG与溴化氰活化的Sepharose4B偶联,制成免疫吸附柱Ⅰ:用兔抗牛血清IgG与之偶联,制成免疫吸附柱Ⅱ.将BLV粗提抗原经柱Ⅰ和柱Ⅱ亲和层析后获得无色透明抗原。该抗经AGID试验表明具有gp和P抗原活性,回收率分别为38.8％和51.8％;经SDS-PAGE分析表明,含有5种蛋白组分,分子量分别为15、24、64、70和80K道尔顿;经薄层扫描,测得5种组成的百分含量之和为72.08。将提纯抗原同提纯各阶段不同纯度的抗原同时进行ELISA测定,结果以提纯抗原最理想,本底很浅,工作浓度仅为5μg/ml。     

媾疫锥虫、伊氏锥虫差异抗原的分离鉴定

以50％饱和硫酸铵沉淀的兔抗伊氏锥虫高免血清球蛋白制备琼脂糖-4B免疫吸附柱,对马媾疫锥虫超声全虫可溶性抗原进行反亲和层析免疫吸附。当抗原量在抗体吸附范围内时,最先洗脱下来的成分即为媾疫锥虫特异性抗原(差异抗原)。该抗原与媾疫锥虫血清抗体反应较强,与伊氏锥虫血清抗体反应较弱,经SDS-PAGE检测,其为分子量大于68000的大分子蛋白。     

羊附红细胞体解离方法的比较研究

本试验为建立一种高效的羊附红细胞体解离方法,采集红细胞感染率大于90%的阳性抗凝血,分别应用水浴法和药物体外驱虫法对羊附红细胞体进行解离,观察分离前后附红细胞体感染率、红细胞感染强度、附红细胞体数、杂质含量和附红细胞体的运动性5项指标;提取附红细胞体抗原,制备全蛋白悬液,测定蛋白质含量,比较解离效果。将两种方法制备的羊附红细胞体抗原全蛋白进行SDS-PAGE试验,观察条带是否一致。结果显示,200 mL血液中加入1 mL双向红莲灭,4℃作用36 h,即可达到较好分离效果。与水浴法相比,解离后,红细胞感染率和感染强度明显下降,蛋白含量增加,收率高,纯度好。SDS-PAGE结果显示,体外驱虫法所制的羊附红细胞体抗原全蛋白悬液,其抗原蛋白带与水浴法相同,因此可用于粗制羊附红细胞体抗原。     

布氏姜片虫排泄分泌抗原的提取及其免疫化学特性研究

利用体外无菌培养技术，制备了布氏姜片虫的排泄分泌抗原(ES)。经梯度PAGE和SDS-PAGE分别分离出7条蛋白质区带和9条多肽区带，其中包括1条糖蛋白和1条糖脂蛋白，说明布氏姜片虫ES含复杂的蛋白组分。免疫电泳、免疫扩散即迹试验表明，布氏姜片虫ES含有较多与虫体抗原相同的抗原成分，也含有少数与虫卯抗原相同的抗原成分。     

猪流行性腹泻病毒S蛋白抗原表位区基因克隆、分析及原核表达

从患流行性腹泻的病猪小肠中分离猪流行性腹泻病毒(PEDV),设计一对引物用于扩增PEDV S蛋白的抗原表位区,将扩增产物克隆到原核表达载体pET-32a,构建了重组表达质粒pET32a-PEDV-S1;在IPTG的诱导下表达,经SDS-PAGE分析,Western blotting鉴定,结果表明该抗原表位区蛋白得到了重组表达.该研究可为PEDV抗原表位区的相关研究提供参考.     

有效检测发酵豆粕中抗原蛋白的新方法

为有效检测发酵豆粕中的抗原蛋白水平,试验选择0.6%的KOH来破坏发酵豆粕因干燥形成的蛋白质变性表层,有效释放可溶性蛋白,使用Gelanalyzer软件对其SDS-PAGE电泳图进行蛋白质条带分析,从而得出抗原蛋白所占可溶性蛋白比例及其降解程度。     

新疆绵羊种布鲁氏菌外膜蛋白OMP36的表达蛋白OMP2b基因的克隆与表达

以表达新疆绵羊种布鲁氏菌外膜抗原蛋白OMP36的表达蛋白OMP2b,探索其作为诊断抗原和分子疫苗的可能性。采用PCR扩增技术,从新疆绵羊种布鲁氏菌基因组DNA中扩增出OMP2b基因片段,将该片段克隆于原核表达载体PE-28a(+),构建成重组质粒,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测有无蛋白的表达。结果表明,获得长约1 083bp的PCR片段,序列分析结果与已知绵羊种OMP2b同源性达89.72%;SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量39 ku获得了新疆绵羊种布鲁氏菌外膜蛋白OMP36的表达蛋白OMP2b基因片段,并在大肠杆菌中实现了表达。     

牛种布氏杆菌82/45菌种细胞膜蛋白组分的提取

本文着重介绍了提取牛种布氏杆菌82/45菌种细菌膜蛋白组分的一种方法:菌细胞经超声波粉碎,再生后以溶菌酶和无离子表面活性剂(去氧胆酸)处理,用 SDS-PAGE 将其不溶性产物中的组分蛋白泳动分离开,切取组分蛋白条带,用圆盘电泳装置分别收集不同区段的组分蛋白。用 SDS-PAGE 鉴定蛋白纯度,取经转移吸印电泳证实对商品单克隆抗体 BR_(25)要特异反应的组分9作为抗原.通过间接 ELISA 检测证明抗原反应性良好.     

马波沙星人工抗原的合成及其免疫原性的鉴定

合成、鉴定了马波沙星(MBF)人工抗原,为马波沙星单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。以牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清蛋白(OVA)为载体蛋白,采用碳二亚胺法分别合成马波沙星免疫抗原(MBF-BSA)和包被抗原(MBF-OVA),并使用紫外分光光度法、SDS-PAGE、ELISA方法鉴定人工抗原合成效果。初步鉴定结果显示,MBF-BSA与MBF-OVA均偶联成功;用免疫抗原MBF-BSA免疫小鼠,经ELISA方法检测,五免后血清中抗体效价可达1∶5.12×105,半数抑制率为90.20 ng/m L。研究表明,马波沙星人工抗原合成成功,其免疫抗原具有良好的免疫原性,免疫小鼠可获得高效价、高特异性多克隆抗体。     

类金属砷螯合物人工抗原的合成与鉴定

为了合成砷元素人工免疫抗原及人工鉴定抗原,制备砷的多克隆抗体,建立ELISA快速检测方法,以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)为螯合剂,将砷与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备人工免疫抗原As³⁺-ITCBE-BSA和人工鉴定抗原As³⁺-ITCBE-OVA;经核酸蛋白仪浓度的检测、紫外分光光度计扫描以及SDS-PAGE定性鉴定,用原子荧光光谱法检测抗原中As³⁺的含量。结果显示:合成的As³⁺-ITCBE-BSA和As³⁺-ITCBE-OVA蛋白浓度分别为4. 692和5. 726 mg/mL;紫外扫描最大吸收峰发生偏移,电泳条带对于各自载体蛋白稍微滞后,均显示抗原合成成功; As³⁺的含量分别为0. 254、0. 190 mg/mL,偶合率达到70. 67%和52. 81%。提示:抗原合成成功,可用于重金属砷多克隆抗体的制备。