新城疫病毒致鸡胚成纤维细胞病变特性研究

为探讨新城疫Ⅳ系和Ⅰ系毒株对鸡胚成纤维细胞(CEF)致病变特性的影响,采用细胞病变观察(CPE)、血凝试验(HA)和半数细胞培养物感染量(TCID50)测定等方法对新城疫Ⅳ系和Ⅰ系毒株在CEF上的感染特性进行检测。结果表明:经鸡胚复壮的新城疫Ⅰ系毒株不管胰蛋白酶是否参与,均能在CEF上增殖并产生典型的细胞病变,主要以发生细胞融合和形成多核巨细胞为特征;而新城疫Ⅳ系毒株,必须在胰蛋白酶参与的情况下才能产生CPE,主要以胞浆内出现可见大小不等的空泡或颗粒为特征。新城疫Ⅰ系毒株与新城疫Ⅳ系毒株(胰酶参与)相比CEF培养上清液最高HA效价高2个滴度,TCID50也明显增高,证明新城疫Ⅰ系毒株在CEF细胞上的感染力更强。     

微量多孔板上培养鸡胚成纤维细胞及病毒的检测

利用９６孔软塑微量多孔板培养鸡胚成纤维细胞单层，效果良好，并在其上测菜病毒国外株毒价及中和试验，结果与玻璃细胞培养瓶所测一致，同时摸索出一套具体实施方法，对用过的多孔板，经适当的酸浸，冲洗及紫外线灭菌等处理，仍可正常重复使用，因此，该方法可以取代培养瓶。     

鸡胚成纤维细胞培养鸭瘟病毒的试验

将鸭瘟病毒强毒（DPV34）经12日龄鸭胚连续传2代，收获的尿囊液DPV34F2作为细胞培养的病毒接种于鸡胚成纤维细胞，连续传代5次。结果，从第2代开始，接种DPV的鸡胚成纤维细胞出现细胞病变，随首代次的增加，细胞病变愈加明显。经电镜观察，第5代细胞培养物中有典型的DPV病毒粒子；将第5代培养物接种鸭胚，出现典型鸭瘟病变；用PCR方法检测培养物，也出现DPV的特征DNA带。     

鸡胚成纤维细胞感染IBDV后SOD活性的变化

鸡胚成纤维细胞用传染性囊病病毒感染后,采用邻苯三酚自氧化法测定细胞超氧化物歧化酶的活性。ＣＥＦｓ感染ＩＢＤＶ后８ｈ,细胞ＳＯＤ活性有所上升。之后,随着时间的延长,细胞ＳＯＤ活性逐渐下降。试验结果表明,ＳＯＤ活性降低是ＣＥＦｓ感染ＩＢＤＶ之后发生的重要生化变化,在ＩＢＤＶ诱导细胞凋亡的过程中可能起关键作用。     

传染性法氏囊病疫苗的研究——Ⅰ.传染性法氏囊病病毒2512——弱毒株在鸡胚成纤维细胞培养内的适应

将引自国外的传染性法氏囊病(IBD)—2512鸡胚弱毒成功地适应于鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物。该病毒增殖对生长液要求不苛刻,并能对CEF培养物呈现规律性的稳定的致细胞病变作用(CPE);经反复传代及回归鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)重复性试验,都呈现出IBD病毒规律性变化。经毒价测定、安全实验、效力试验证明,该毒株没有因传代和其他因素而改变其特性,其滴度基本稳定在10~(5.50～5.75)EID50/0.2ml,TCID50/0.1ml为10~(7.83～8.17)。     

鸡胚成纤维细胞传代的探讨

鸡胚成纤维细胞传代的探讨王建华（江西生物药厂）鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）能否传代这一问题，有的资料说不能传代。为了减少生产用蛋，降低产品的成本，在生产中，对ＣＥＦ能否传代进行了试验性探讨。１材料犊牛血清、７．５％ＮａＨＣＯ３、双抗、０．５％的细胞生长液...     

利用鸡胚成纤维细胞培养禽脑脊髓炎病毒的研究

利用鸡胚成纤维细胞 (CEF)培养禽脑脊髓炎病毒 (AEV) ,经过六次盲传发现 :AEV在 CEF上无细胞病变 (CPE) ,但利用 CEF细胞上清接种 SPF鸡胚 ,可产生不同程度的 AE鸡胚病变。分别取不同时间的感染细胞上清 ,测定 AEV浓度 ,结合培养条件 ,进而确定 AEV培养的最佳时机。结果表明 :以 AEV在 CEF上培养 7天最好 ,病毒滴度可达 10 2 .8EID50 / 0 .2 ml。将经 CEF培养的 AEV差速离心 (浓缩约 5 0 0倍 ) ,接种 SPF鸡胚 ,可产生典型的鸡胚病变 ,其滴度为 8× 10 5.0 EID50 / 0 .2 m l。通过 Cs Cl密度梯度离心提纯病毒 ,在电镜下观察到了大小基本一致的病毒粒子 ,病毒直径约为 2 5 nm。利用 AEV感染的 CEF或通过“细胞飞片”制备荧光片 ,建立了间接免疫荧光快速检验 CEF是否感染 AEV的方法。     

对鸡胚接种鸡传染性支气管炎病毒后收获时间的探讨

对鸡胚接种鸡传染性支气管炎病毒后收获时间的探讨苗玉和，张万林（辽宁省兽医生物药品厂辽宁辽阳，１１１０００）鸡传染性支气管炎（ＩＢ）是鸡的一种急性、高度接触性的呼吸道疾病。目前防制本病的主要措施是疫苗接种，疫苗的效价决定了疫苗的质量，因此，制备高效价疫...     

抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其特性的研究

本实验将鸡传染性支气管炎病毒（澳大利亚Ｔ株）进行纯化,制成抗原,应用杂交瘤技术建立了５株分泌抗鸡传染性支气管炎病毒的杂交瘤细胞株,其免疫球蛋白的亚类分别属于ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＭ。杂交瘤细胞分泌抗体的能力稳定,长期传代对其抗体分泌能力没有影响。５株单克隆抗体与其它１２株鸡传染性支气管炎病毒标准株之间存在不同程度的交叉反应,但对鸡新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、产蛋下降综合征病毒及禽流感病毒均无交叉反应。用此杂交瘤细胞制备腹水的ＥＬＩＳＡ效价为１０－６～１０－７,抗体对热的稳定性有一定的差别。抗体纯化后,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳表明具有单克隆抗体的特征,经快速蛋白分析鉴定其纯度为８９．４９％。竞争ＥＬＩＳＡ法证明其中４株的单抗与抗原结合位点并不完全相同。采用单抗夹心ＥＬＩＳＡ法,对抗原的检测方法进行了初步探索。     

鸡腺胃型传染性支气管炎的诊断

本文首次报道了四川省境内发生鸡腺胃型传染性支气管炎的发病及确诊情况。经流行病学调查、临床症状观察、病理学剖检、鸡马立克氏病实验室检验及常规细菌分离培养和病毒分离鉴定等,确诊了病原为嗜腺胃型传染性支气管炎病毒,指出了由该病原引起的病鸡不能用Ｍａｓ株和Ｔ株保护,而必须用分离株制备的疫苗才有免疫保护作用。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒分离及鉴定

青岛地区暴发主要以侵害鸡肾脏的疾病,引起肾脏肿大、苍白,肾小管和输尿管有白色尿酸盐沉积,伴有下痢。产蛋鸡产蛋下降,雏鸡的死亡率达25%-90%。从感染鸡分离到1株疑为鸡肾型传染性支气管炎病毒,接种鸡胚,鸡胚出现侏儒化、蜷曲等特征性病变,暂定名为NIBV-AH111     

应用三重聚合酶链反应同时检测NDV、IBV、MG的研究

本文建立了一种同时检测NDV、IBV和MG三种病原体的三重PCR技术。根据NDV、IBV和MG的基因文库,设计了三对分别与测NDV、IBV和MG某段基因序互补的引物,用这三对引物对同一样品中的测NDV、IBV、MG核酸模进行多重PCR扩增。结果均同时得到了三条特异性大小与实验设计相符的310bp（NDV）、1720bp(IBV)和732bp(MG)多重PCR扩增带,而对其他6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,多重PCR技术能检出10pg的IBV、1pg的NDV RNA模板和1pg的MG DNA模板。     

应用多重反转录-聚合酶链反应检测鸡新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的研究

本文建立了一种同时检测NDV和IBV二种病原体的多重PCR技术。根据NDV和IBV的基因文库 ,设计了两对分别与NDV和IBV某段基因序列互补的引物 ,用这两对引物对同一样品中NDV和IBVRNA模板进行多重RT_PCR扩增 ,结果均同时得到了两条特异性的大小与实验设计相符的 31 0bp(NDV)和 1 72 0bp(IBV)多重的RT_PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果表明 ,该多重RT_PCR技术能同时检出 1 0pg的NDV和 1 0 0pg的IBVRNA模板。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒分离及鉴定

某鸡场暴发主要以侵害鸡肾脏的疾病,引起肾脏肿大、苍白,肾小管和输尿管有白色尿酸盐沉积,伴有下痢。产蛋鸡产蛋下降,雏鸡的死亡率达25%～90%。从感染鸡分离到1株疑为鸡肾型传染性支气管炎病毒,接种鸡胚,鸡胚出现侏儒化、卷曲等特征性病变。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒BK株的分离与鉴定

通过ＳＰＦ鸡胚传代培养、ＳＰＦ鸡胚气管环组织培养和鸡胚肾原代细胞培养,从一起有明显呼吸症状且又表现严重肾病变的鸡传染性支气管炎病例中分离到一株肾型传支病毒ＢＫ株。电镜观察表明,病毒粒子呈球状,直径９０～１００ｎｍ,纤突长１５ｎｍ,为典型冠状病毒。在ＳＰＦ鸡胚上盲传至５代,在ＴＯＣ上测其ＣＤ５０为１０－６．２。动物回归试验结果,试验鸡出现典型“花斑肾”,表明ＢＫ株具有较强嗜肾脏致病性。     

鸡肾型传支病毒RZ株的分离及鉴定

从某一疑似鸡肾型传染性支气管炎发病鸡场的病死鸡的肾、肝组织中分离到一株病毒，经鸡胚连续传代和动物回归实验，初步确定该病毒为鸡肾型传染性支气管炎病毒，命名为IBV-RZ株。     

内蒙古地区鸡传染性法氏囊病病毒生物学特性的研究

从内蒙古地区分离到３株ＩＢＤＶ（分别命名为Ｊ、Ｗ、Ｈ株）并对其进行细胞培养特性、理化特性、形态特性、动物回归试验和血清学鉴定，研究结果表明：适应鸡胚的Ｊ、Ｗ、Ｈ株可迅速适应ＣＥＦ，继而适应于Ｖｅｒｏ和ＲＫ＿（－１３）细胞，在ＲＫ＿（－１３）细胞上的感染滴度最高；３个毒株能抵抗氯仿、耐热（６０℃１小时）、耐酸（ｐＨ２）、对碱（ｐＨ１２）敏感；负染样品在电镜下看到正六边形，直径约５５～６５ｎｍ，有实心和空心的病毒颗粒；回归鸡后表现典型的临诊症状和特征性病理变化，发病率为８０～１００％，病死率为２６．６～４６．６％；法氏囊超薄切片在电镜下观察到法氏囊淋巴细胞浆内呈晶格状排列或包涵体形式存在的病毒颗粒。微量交叉中和试验结果表明：Ｊ、Ｗ、Ｈ株为血清Ⅰ型ＩＢＤＶ的３个不同亚型毒株。     

蛋鸡应重视传染性支气管炎的防制

本文介绍了蛋鸡感染传染性支气管炎是对产蛋性能造成的影响,列举了笔者见到的一些鸡场鸡群感染本病后的危害,简述了本病的病原、流行情况等,并论述了该病的防制方法,提示广大饲养种鸡、商品蛋鸡养殖者应高度重视本病的防制。