离体筛选抗疫病辣椒变异体研究

以辣椒自交系B17、B25为试材，用子叶外植体诱导愈伤组织，以辣椒疫病病原菌粗毒素作为选择剂，筛选抗疫病辣椒变异体植株。结果表明，辣椒疫病病原菌粗毒素对辣椒子叶愈伤组织的诱导、不定芽的分化具有抑制作用，且随着粗毒素浓度的增加抑制作用增强，获得的抗性愈伤组织变异系对辣椒疫病病原菌粗毒素具有稳定抗性。     

利用EMS和炭疽病粗毒素诱变筛选草莓抗炭疽病突变体

以甲基磺酸乙酯(EMS)和暹罗炭疽菌(C.siamense)粗毒素为诱变剂,‘晶瑶’组培苗叶柄为原始材料,建立了抗炭疽病草莓材料诱变筛选体系,并筛选出了抗草莓炭疽病的突变体。结果表明:以0.8%的EMS溶液处理2 h可获得半致死效应;炭疽菌粗提物浓度为4%时为适宜的抗病选择压。对532个不定芽进行2次不连续离体筛选后获得43个抗性芽,成活率为8.1%。抗性芽再生植株移栽存活后,经炭疽菌离体接种鉴定,初步获得了抗炭疽病的草莓‘晶瑶’突变体株系13株,为后续进一步研究草莓炭疽病抗性机制提供了材料。     

‘改良蒜’抗紫斑病变异株系的离体筛选

以‘改良蒜’品种带蒜瓣基部的茎盘为外植体,在含有不同浓度大蒜紫斑病菌粗毒素的MS培养基上采取分步筛选法筛选大蒜抗病变异系,并诱导形成小鳞茎;对小鳞茎繁殖的幼苗叶面喷施病菌粗毒素进行抗病性鉴定。结果表明,大蒜紫斑病菌粗毒素对‘改良蒜’愈伤组织的诱导有显著抑制作用,粗毒素浓度越高,抑制作用越强,抗病愈伤组织诱导的适宜病菌粗毒素浓度为30%;在粗毒素浓度10%、20%和30%的培养基上依次分步培养筛选获得了抗紫斑病变异系。粗毒素接种抗性鉴定表明,抗性系幼苗的抗病性比对照增强。     

香蕉枯萎病菌热带4号小种对番茄等3种模式植物的致病性分析

香蕉遗传转化体系效率低,难以满足大量鉴定基因的抗性功能的要求。为了借鉴模式植物成熟的遗传转化再生体系,对拟南芥、烟草、番茄3种模式植物的多个常用品种材料对强毒性香蕉枯萎病菌热带4号小种的敏感性进行评价。结果表明,仅番茄‘Money Maker’品种受侵染后表现出典型的枯萎病症状;从感病植株根颈附近茎段内部坏死组织可检测和再次分离出病原菌,说明病菌的致病性符合柯赫氏法则（Koch’s Rule）。进而以子叶为外植体建立了高效的Money Maker番茄不定芽再生体系。研究结果为借助模式植物番茄进行快速筛选鉴定抗香蕉枯萎病功能基因奠定了基础。     

香蕉品种对枯萎病菌感病性与对病菌毒素敏感性之间的相关性

为明确香蕉品种对香蕉枯萎病菌感病性与对病菌粗毒素敏感性之间的相关性,采用根部病菌孢子接种测定了36份香蕉品种苗对香蕉枯萎病菌4号生理小种的感病性,以及采用植株根部和叶片毒素处理测定了5份香蕉品种苗对病菌粗毒素的敏感性。结果表明,天宝角蕉(AAA)、柴蕉(AAA)、广粉1号(AAB)和贡蕉(AA)表现抗病,哥斯达黎加蕉(AAA)和抗枯5号(AAA)表现中抗;感病品种对毒素的敏感性高于抗病品种。通过香蕉不同品种的病情指数、萎蔫指数和叶片损伤面积的差别分析,发现香蕉苗期对枯萎病菌感病性与对病菌粗毒素敏感性之间存在正相关性,60d龄期的假植苗病情指数与其叶片损伤面积之间存在显著的正相关性。因而叶片毒素处理法测量香蕉假植苗中部叶片损伤面积可作为一种快速区别香蕉抗病能力的有效方法。     

枸杞炭疽病菌滤液对枸杞愈伤组织生长及分化的影响

采用Czapek-Dox培养液,通过振荡培养、过滤、离心,获得枸杞炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz.)培养滤液,配制含不同比例粗毒素液的枸杞愈伤组织培养与分化培养基,研究培养滤液对枸杞叶片愈伤组织生长和分化的影响.结果表明:枸杞炭疽病菌粗毒素液具有较强的生物活性,对枸杞愈伤组织生长及分化均具有一定的毒害和抑制作用;多步正选择法与一步正选择法相比,经过由低到高的选择压力逐级筛选后,可相对提高叶片愈伤组织对毒素的抗性,抗性细胞系筛选的上限浓度可定为浓度50％(v/v),抗性细胞变异系分化培养基中的粗毒素液含量可定为20％(v/v).     

香蕉对甘露糖和木糖的敏感性研究

以香蕉低代试管苗茎段薄层切片和香蕉吸芽薄层切片为外植体,分别设计了13个梯度,研究了香蕉在芽的再生和愈伤组织的诱导阶段对正筛选剂D-甘露糖和D-木糖的敏感性,为建立香蕉正筛选系统的遗传转化体系奠定基础。结果表明,(1)香蕉对D-木糖敏感,在D-木糖与蔗糖比例达到10∶20时,10 d开始显示出毒性,在D-木糖与蔗糖比例达到16∶14时能显著抑制香蕉芽的再生和愈伤组织的生长,当比例达到25∶5时完全抑制香蕉组织的生长,香蕉组织彻底死亡。因此,D-木糖能作为有效筛选剂对香蕉进行目的基因遗传转化;(2)香蕉对D-甘露糖不敏感,不适用于以D-甘露糖为筛选剂的遗传转化。     

宁夏三个葡萄品种高效再生体系的建立

以宁夏葡萄产业中大量种植的3个葡萄品种为试材建立再生体系.采用花药、茎尖进行愈伤组织诱导,比较了3种葡萄用花药、茎尖培养诱导愈伤组织形成、分化、生根的必须培养条件,获得不定芽分化再生植株.结果表明:葡萄花药愈伤组织形成胚性愈伤组织的能力很低,几乎不能分化成苗;而茎尖愈伤组织形成胚性愈伤组织的能力很高,分化成苗率极高,达100％.B5培养基诱导宁夏葡萄茎尖愈伤组织和分化丛生效果最好;KT有利于愈伤组织分化;茎尖浓度以0.8～1.0 cm最好.     

固化剂(Gelrite)浓度对草莓花药愈伤组织诱导及分化的影响

1971年Ｆｅｗｌｅｒ等首先由草莓花药经愈伤组织分化培养出不定芽并形成植株。 1979年 ,中国农业科学院果树研究所从草莓花药培养获得了单倍体植株(薛光荣等 ,1980 )。草莓花药培养可通过愈伤组织阶段经器官发生或胚状体形成完整植株 (ＩｓａｃＶ等 ,1994 ;徐振南等 ,1995 ) ,但愈伤组织不定芽分化率较低。影响愈伤组织分化能力的因素是多方面的 ,其中包括愈伤组织本身的结构及生理状况 (王海波 ,1991)。冯双华等 1998年曾报道琼脂浓度对水稻花药愈伤组织诱导率、愈伤组织的形态及其植株再生具有明显的影响。近年的研究表明 ,以Ｇｅｌｒｉｔ…     

香蕉抗枯萎病突变体的诱发与筛选

香蕉枯萎病(Fusarium oxysporum f.sp.Cubense,FOC)是我国华南地区香蕉生产中急需解决的几大病害之一,已造成极大的经济损失。培育优质、高产的抗病香蕉品种被认为是解决这一问题的最根本、最有效的措施。采用甲基磺酸乙酯(EMS)对优质巴西蕉(Musa spp,AAA)茎尖进行离体诱变处理,并以5×106个/mL枯萎病菌race4孢子悬浮液为选择压,分别在室外和温室内,对2个月苗龄的诱变处理苗进行抗病性筛选。结果表明,最佳诱变处理组合为:0.4%EMS浸泡3 h,其变异率为36.7%;诱变后,产生5类比较明显的变异类型;经2种不同方式筛选分别得到3.1%和6.3%抗性植株;另外,还发现在矮化变异和窄叶型中获得抗病突变体的比例较高。     

香蕉对尖孢镰刀菌热带4号小种的抗性评价方法的建立

为了准确快速地评价香蕉对枯萎病病原菌尖孢镰刀菌古巴专化型（Fusarium oxysporum f. sp. cubense）热带4号小种（Tropical race 4,Foc TR4）的抗性,在温室条件下以浸根法和改良的灌根法将Foc TR4接种至不同抗性的香蕉品种,比较分析接种后香蕉的发病情况,并检测了两个Foc TR4的特异引物的扩增效率,以完善评价方法。结果显示,利用两种方法接种都能体现香蕉的抗性,但改良的灌根法在孢子浓度为1 × 10⁴时的接种效果最好,接种后各品种发病情况与品种本身的实际抗性最为接近。特异引物Foc TR4 F/R的扩增效率较高,1次和2次PCR分别能有效检测发病等级为3和1以上的香蕉球茎。     

香蕉枯萎病抗性离体接种鉴定方法的优化

前期研究明确了影响香蕉生根试管苗离体接种Fusarium oxysporum f. sp. cubense（Foc）进行抗病性鉴定的4个主要因素：产孢培养基、试管苗接菌前在MIS（Medium for interaction system）培养基上生长的时间、MIS培养基的组成、Foc菌株的致病力等。在此基础上，采用正交试验设计对离体接种鉴定方法进行优化。Logistic回归分析结果表明：影响发病最重要的因素是Foc菌株的致病力（P < 0.001），其次是产孢培养基和MIS培养基的组成（P < 0.05），试管苗接菌前在MIS培养基上生长的时间对鉴定结果也有一定的影响。上述4个影响因素的最优组合为用马铃薯葡萄糖水作产孢培养基，香蕉试管苗接菌前在MIS培养基上生长7 d，MIS培养基的组成为1/2MS不含有机物，接种菌株为Foc热带4号小种复壮3代菌株。分析得到的最优组合与验证试验的结果一致。     

香蕉枯萎病菌4号生理小种毒素解毒剂的筛选及对香蕉防御酶活性的影响

从15种候选解毒剂中筛选出对香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)4号生理小种(简称Foc 4)毒素解毒效果最好的2种解毒剂——硫酸锌和井冈霉素。在2 g.L-1浓度下,硫酸锌和井冈霉素对Foc 4毒素的钝化率分别为76.67%和71.33%,而在5 g.L-1浓度下,它们的钝化率分别为90.33%和80.00%。探索了毒素—硫酸锌和毒素—井冈霉素处理体系在2 g.L-1和5 g.L-1浓度下对香蕉苗5种防御酶(PAL、POD、PPO、SOD和CAT)活性的影响。结果表明,在这个处理体系中,香蕉苗PAL和PPO酶活高峰出现的时间(PAL 36 h、PPO 36 h和48 h)较毒素单独处理(PAL 48 h、PPO 60 h)早;SOD和CAT酶活高峰出现的时间与对照基本一致;而POD酶活高峰出现的时间较复杂。总体上,这个处理体系的酶活高于毒素单独处理和无菌水对照。"毒素—硫酸锌处理体系"在PAL、SOD整体酶活上高于"毒素—井冈霉素处理体系",而后者在其他3种酶活上普遍高于前者。     

香蕉枯萎病菌4号生理小种粗毒素特性的研究

 对香蕉枯萎病病菌粗毒素进行高温高压（121 ℃,0.103 MPa）、不同pH值、紫外线照射以及甲醇沉淀处理后,测定其致病活性的变化,以明确其基本理化性质。结果表明：该毒素具有很强的热稳定性,经高温高压处理20 min后仍然保持强的致病活性;偏酸（pH 3 ~ 6）或偏碱（pH 8 ~ 10）条件均会降低毒素的致病活性;紫外线照射对该毒素的毒性具有削弱作用;经甲醇沉淀处理后,上清液具有致病活性,而沉淀不具有致病活性：说明该毒素属于极性较高的一类小分子非蛋白物质。香蕉枯萎病菌粗毒素对不同种类作物种子的萌发和胚芽生长都有不同程度的抑制作用,是一种非寄主专化性毒素。     

不同抗性香蕉品种根系分泌差异酚酸对尖孢镰刀菌的抑制

通过高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）测定香蕉枯萎病感病品种‘巴西蕉’和抗病品种‘南天黄’根系分泌物中10种酚酸物质的含量，并选取含量具有明显差异的酚酸物质验证其对尖孢镰刀菌古巴专化型（Fusarium oxysporium f. sp. cubense，Foc）4号生理小种菌落生长的抑制效果。研究发现，接种Foc4诱导后，对羟基苯甲酸和肉桂酸仅在抗病品种‘南天黄’根系分泌物中检测到，邻苯二甲酸的含量在抗病品种中高于感病品种近2倍。在PDA培养基中邻苯二甲酸、对羟基苯甲酸和肉桂酸对Foc4菌落生长的抑制率随着含量的增加而显著增强。研究结果表明香蕉根系分泌物中酚酸物质与香蕉品种抗性之间存在密切的相关性。     

韭菜对香蕉枯萎病菌4号生理小种的抑制作用及对香蕉枯萎病的防控研究（英文）

以香蕉枯萎病4号生理小种（Foc4）及巴西香蕉（AAA）和广粉1号粉蕉（ABB）为材料,研究了韭菜对Foc4的抑制作用及其对香蕉枯萎病的防控效果。结果表明,韭菜粗提取液能显著抑制Foc4菌丝的生长,孢子的萌发。透射电镜和激光共聚焦显微镜观察显示,韭菜对Foc4菌丝细胞结构有极大的破坏作用,并对其孢子有极高的杀灭作用。大...     

魔芋浅层液体组织培养体系研究

采用不同激素配比的液体和固体培养基对花魔芋进行了组织培养研究。结果表明：浅层液体培养基在花魔芋组织培养时较固体培养基具有褐变率低、愈伤组织生长速度快、平均出芽数高、根粗壮、成本低等优势;初代培养基应选择MS+6-BA 0.5 mg?L-1+NAA 0.5 mg?L-1+蔗糖3.0 %+0.1 % PVP（pH 5.8）,出芽培养基应选择MS+6-BA 2.0 mg?L-1+NAA 0.5 mg?L-1+蔗糖3.0 %+0.1 % PVP（pH 5.8）,待出芽后转入MS+6-BA 1.0 mg?L-1+NAA 0.5 mg?L-1+蔗糖3.0 %+0.1 % PVP（pH 5.8）,二者交替培养可连续批量获取组培苗,生根培养基应选择1/2MS+IAA 0.5 mg?L-1+蔗糖1.5 %+0.1 % PVP（pH 5.8）。花魔芋愈伤组织继代3次后发现了A型、B型、C型3种愈伤组织,三者在外观、组织结构和分化能力上存在差异,试验和生产上选择A型和B型愈伤组织进行分化培养可得到高效稳定的分化体系。     

应用侧芽平切刻伤方法建立牡丹植株再生体系

以牡丹品种‘乌龙捧胜'5～6年生苗中下部饱满的侧芽为外植体,探讨了平切刻伤方法对侧芽诱导不定芽的影响,并研究了侧芽消毒方法、不同植物生长调节剂对不定芽继代增殖与生根的影响。结果表明:先用75%酒精消毒30s,再用0.1%升汞消毒7min,褐化率与污染率较低;采用平切刻伤的侧芽不定芽诱导率显著提高,诱导率为对照的2.6～4.8倍,最高达96%;不定芽增殖最佳的培养基为WPM+6-BA3.0mg·L-1+IAA0.2mg·L-1,增殖率可达到787.05%;生根最佳培养基为1/2改良MS+IBA4.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1,生根率达81.33%,移栽成活率为90%。