双孢蘑菇褐变的酶学机理研究

采用凝胶电泳等生化技术 ,对菇体本身的褐变作了详细的研究 ,结果发现 ,多酚氧化酶 (PPO)是蘑菇采后引起褐变的主要原因之一 ,不同的双孢蘑菇菌株具有不同的PPO酶活性和不同的PPO同工酶谱 ,双孢蘑菇不同的组织部位具有不同的PPO酶活和PPO同工酶谱 ,在蘑菇生长内的整个时期 ,表现出不同的PPO酶活力和不同的PPO同工酶谱     

双孢蘑菇储藏中的褐变及相关酶活性研究

测定了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)储藏中的色差,总酚含量及多酚氧化酶(polyphenol oxidase, PPO)、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase, PAL)的活性变化.结果表明,双孢蘑菇储藏期间L值逐渐变小,褐变度不断增加.总酚含量在15 ℃储藏的第1～4天升高,之后逐渐下降,4 ℃储藏时,总酚含量变化不大.PPO在15 ℃储藏时活性水平较4 ℃储藏时高,在15 ℃时,第1天就显著上升,第3天达到最高值后下降,而4 ℃储藏时在第2天急剧上升,而后下降.双孢蘑菇在15 ℃和4 ℃储藏时PAL活性在第1～2天升高,而后的变化无规律.根据实验结果,双孢蘑菇中PPO与PAL可能参与了酶促褐变,其中PPO活性可能是引起双孢蘑菇褐变的主要因素.     

冻结条件对双孢蘑菇PPO和POD活性的影响

采用喷雾式流态化液态CO2速冻及缓冻技术,研究了冻结温度、速度对双孢蘑菇多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)活性的影响。结果表明:冻结温度、速度对酶的活性有明显的影响,在75℃、60℃、45℃及35℃(缓冻)下进行冻结时,双孢蘑菇的PPO活性分别下降了70.5%、66.3%、56.8%及19.6%,POD活性分别下降了74.3%、71.1%、64.5%及21.6%。     

双孢蘑菇褐腐病病原菌的分离及分子鉴定

对引起双孢蘑菇(Agaricus bisporus)褐腐病的病原菌进行分离和分子鉴定.分离培养褐腐病病原菌,采用CTAB法抽提其基因组总DNA,利用真菌通用引物ITS1和ITS4扩增菌株rDNA ITS区序列,扩增产物纯化后克隆转化至大肠杆菌,挑选克隆成功的菌株进行测序.测序结果在GenBank中进行同源性搜索,并下载部分具有代表性种的ITS序列,利用软件MEGA4 构建分子系统发育树,通过序列分析,鉴定出引起双孢蘑菇褐腐病的病原菌为Mycogone perniciosa.     

一氧化氮熏蒸处理对双孢蘑菇采后褐变及衰老的影响

以双孢蘑菇为试材,研究了在(10±0.5)℃条件下,不同浓度一氧化氮(NO) (30、60、90 μL/L)气体熏蒸处理对双孢蘑菇贮藏过程中感官品质、褐变度、多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)活性的影响.结果表明:外源NO熏蒸处理显著抑制了PPO活性的升高(8.90％～33.13％),减轻贮藏期的褐变程度.提高了贮藏后期POD活性(12.28％～76.27％),延缓了双孢蘑菇的衰老,有效延长了货架期(2 d).其中,NO浓度为60 μL/L时效果最好.     

双孢蘑菇分解基质能力退化的同工酶分析

采用同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gelelectrophoresis,PAGE)技术,对双孢蘑菇(Agaricus bisporus) 菌株0214及其分解基质能力退化菌株0214-3、0214-5在4种不同液体培养基中培养的菌丝体的酯酶(esterase,EST)、 多酚氧化酶(polyphenoloxidase,PPO)、细胞色素氧化酶(cytochrome oxidase, COD)同工酶进行分析,结果表明:在部分培养基中3个菌株的EST和PPO同工酶表型有明显差异,且2个退化菌株的同工酶表型变异一致,说明双孢蘑菇分解基质能力的退化与EST和PPO同工酶活性存在相关性.各菌株在不同培养基中的COD同工酶酶谱表型一致.     

双孢蘑菇子实体采后褐变及相关生化变化研究

实验研究了双孢蘑菇子实体贮藏期间褐变与总酚含量、酶(PPO和POD)活性、还原糖含量、Vc含量等生化指标之间的关系。结果显示,贮藏期间双孢蘑菇子实体菌盖表面色度L值持续减小、褐变程度加重,总酚和还原糖含量均呈先上升后下降的趋势,Vc含量持续下降,PPO活性在前5 d逐渐增加而后下降,POD活性先增加然后随着褐变的发生逐渐下降,而后期大部分褐变发生时又有所增加。相关性分析显示褐变程度与色度L值之间呈显著负相关,以色度L值来反映褐变程度可行;Vc含量的变化与色度L值呈显著负相关。     

双孢蘑菇低糖饮料的工艺研究

采用L9(34)正交设计,确定双孢蘑菇低糖饮料的最佳配方为:双孢蘑菇液99.1%,蛋白糖0.9%,柠檬酸0.3%,影响双孢蘑菇低糖饮料口味因素的主次关系依次为:柠檬酸>双孢蘑菇液>蛋白糖。     

石灰在双孢蘑菇出菇管理中的应用研究

对石灰在双孢蘑菇出菇过程中的作用及危害进行研究,结果表明适量石灰对双孢蘑菇生长有明显增产效果,而且可以促进原基形成,缩短出菇周期;过量将对双孢蘑菇生长产生明显危害作用;双孢蘑菇的不同出菇阶段对石灰的需求量不同。     

双孢蘑菇多糖的提取及其抗氧化功效研究

以双孢蘑菇为原料,用热水浸提双孢蘑菇多糖并研究其在抗衰老方面的功效;首先通过响应面试验对双孢蘑菇多糖的提取工艺进行优化,得到最佳提取条件,进一步将最佳提取条件下提取到的多糖进行浓缩、醇沉,冻干得到双孢蘑菇多糖干品,最后,测定双孢蘑菇多糖的抗氧化功效,包括对DPPH自由基、羟自由基以及超氧阴离子自由基的清除能力测定。结果表明:热水浸提双孢蘑菇多糖的最佳工艺条件是料液比为1∶50,温度为79.79℃,提取时间为2.6h,提取率可达到2.25%。得到的双孢蘑菇多糖干品为棕色粉末,易溶于温水,平均分子量为1.697×10^6(±1.992%)Da,并且双孢蘑菇多糖对DPPH自由基和羟自由基的清除效果存在一定的量效关系,其中对DPPH自由基的清除效果最好,当多糖浓度为2mg/mL时清除率达70%。     

双孢蘑菇褐变的酶学机理研究（续）

从图谱可以看出,从蘑菇开始扭结成小米粒大到开伞整个过程中,其ＰＰＯ同工酶图谱基本相似,但褐变程度却有些不同。在生长的开始阶段,电泳迁移率大的快泳区域（Ｒｆ０－６８～０－７０）具有较强的ＰＰＯ酶活力,褐变程度亦深,但随着蘑菇生长,其活性强带主要是集中的Ｒｆ中等区域（Ｒｆ０－２３～０－５３）,而随着蘑菇的成熟开伞,其活性强带主要是在Ｒｆ中慢泳区域（Ｒｆ０－２３～０－３７）。开伞菇薄菇始薄膜扣菇中菇小菇中豆菇小豆菇图２　蘑菇表层组织在常温中放置的ＰＰＯ同工酶图谱２－５　蘑菇采后ＰＰＯ酶活性变化　一般情…     

牛至精油-介孔纳米二氧化硅/海藻酸钠复合膜对双孢蘑菇保鲜效果研究

为了研究牛至精油-介孔纳米二氧化硅/海藻酸钠复合膜对双孢蘑菇保鲜效果的影响,本研究以海藻酸钠、介孔纳米二氧化硅(mesoporous silica nanoparticles,MSNPs)和牛至精油(oregano,OEO)为原料制备抑菌复合膜,对双孢蘑菇进行包装,以未添加OEO-MSNPs的纯海藻酸钠膜为对照组,未经...     

啤酒糟发酵牛粪栽培双孢菇的研究

以啤酒糟为栽培原料,研究灭菌过程及不同配方对双孢菇菌丝生长、子实体性状及产量的影响。结果表明:装袋灭菌法可降低栽培的染菌率,配方中加入啤酒糟可以提高菌丝生长速度。啤酒糟与牛粪、玉米芯共同培养双孢菇的子实体性状较好且产量最高。     

双孢蘑菇POD酶学特性及其与褐变的关系

为了研究POD在双孢蘑菇褐变过程中的作用,对POD酶学特性进行了测定,并对不同贮藏条件下双孢蘑菇中POD活性变化与褐变的关系进行了分析。结果表明：以愈创木酚为底物时,双孢蘑菇中POD的米氏常数（Km）为5.704 mmol ? L-1,最适反应pH为5.0,最适反应温度为45 ℃;低温可以显著抑制POD的活性,20 ℃和10 ℃时其相对酶活性分别为68%和55%,2 ~10 ℃范围内的酶活性差异不显著;20 ℃贮藏1 d和2 d时POD酶活分别是10 ℃贮藏的4.8倍和10.9倍。7种化合物对POD活性的抑制作用由强到弱依次为：DTT > AsA > L-Cys > SDS > 无水亚硫酸钠 > 柠檬酸 > NaCl。贮藏过程中,虽然POD抑制剂处理双孢蘑菇的褐变程度和气调处理没有显著性差异,但其POD活性显著高于气调处理,说明POD活性高不是引起双孢蘑菇组织褐变的主要因素。     

荷兰引进双孢蘑菇品种比较筛选试验初报

为了引进筛选适宜北京地区种植的双孢蘑菇新品种,本试验将7205、7206、7207、7215、7219五个荷兰双孢蘑菇品种与目前当地的主栽品种258,在菌丝生长、产量和品质等方面进行了综合比较。结果表明,7206出菇最早,产量最高,但其薄皮菇较多,易开伞,品质较差。7205和7207与对照相比,出菇性状和产量品质都没有优势。通过综合性状比较,7215兼具出菇较早,产量较高,品质较好的特性。其次为7219,初步认为二者可以用作258的替代品种。     

几种双孢蘑菇菌株对稻草降解能力的研究

以蘑菇属的5个菌株为试材,采用Bavendamm显色反应、RB亮蓝平板变色反应、Eriksson变色圈试验及木质降解试验等方法,研究双孢蘑菇对稻草的降解能力。结果表明:通过Bavendamm平板和RB亮蓝平板显色试验,初步判断2796及A5,优于其它菌种,有较高的木质素降解相关酶系(木质素降解酶;木质素过氧化物酶;锰依赖过氧化物酶)活力;这2种菌种进一步通过变色圈和降解试验,表明2796为选择性降解纤维素的菌种,而A5为选择性降解木质素的菌种,但2796对木质素的降解率为39.82%,A5仅为20.91%,说明菌种对木质素的选择性降解与否与其降解率之间没有相关性。     

双孢蘑菇和姬松茸灭活原生质体融合育种研究

以双孢蘑菇和姬松茸为亲本菌株,通过灭活原生质体融合,经过初筛和复筛,1株新的稳定的双孢蘑菇和姬松茸杂交高产菌株被选育出来。双孢蘑菇原生质体被热灭活（65％,30rain）,姬松茸原生质体被紫外线灭活（30w,30cm,10min）,双亲存活率为3．1×10^-7～3．3×10^-8。在聚乙二醇诱导下融合继续生存,亲本原生质体融合被实现,重组频率为4．8×10^-5。     

玉米秸秆栽培双孢蘑菇夏季出菇试验

玉米秸秆栽培双孢蘑菇夏季出菇试验结果表明，双孢蘑菇新品种9801的产量、质量和抗逆性均有明显提高；培养料内添加食用菌专用发酵剂可以缩短发酵周期，提高发酵质量；培养料中和覆土内活加双孢蘑菇专用添加剂能提高双孢蘑菇子实体质量。玉米秸秆栽培双孢蘑菇的生物学效率可达到50%以上，产量可达10kg/m^2以上。     

一个与双孢蘑菇子实体品质相关的DNA片段的克隆

利用20个十碱基随机引物,在基因组水平上对双孢蘑菇（Agaricus bisporus）的优质低产型（G型）及低抽高产型（H型）菌析进行了RAPD差异显示,获得了一个与双孢蘑菇子实体品质相关的大小约为2000bp的差异DNA片段,将其克隆,并应用点杂交及RFLP技术对其区分两类菌株的有效性进行了检验。这为进一步建立和的特异性探针或PCR引物,从分子水平上提高双孢蘑菇菌种性状早期预测的准确性奠定了基础。