香菇分子遗传连锁图谱研究进展

综述了香菇(Lentinula edodes)遗传连锁图谱构建的研究现状,对现有的连锁图所涉及的分子标记、作图群体、连锁群数量、图谱大小等进行了讨论,并对遗传连锁图谱意义和发展前景进行了分析与展望.     

利用RAPD 标记和种间杂交组合构建葡萄的分子标记连锁图谱

 利用随机扩增多态性DNA (RAPD) 在一个葡萄的种间杂交组合〔毛葡萄8324296 (Vitis quinquangularis) ×欧洲葡萄粉红玫瑰(V. vinifera) 〕的F1 群体中发展分子标记,共产生了89 个稳定的RAPD 标记,连同4 个形态标记(花型、霜霉病抗性、果皮颜色、果汁颜色) 构建了一个葡萄RAPD分子连锁图。该图覆盖基因组总长度为1 033 cM,标记间平均距离为17.8 cM, 为毛葡萄连锁图谱的构建提供了一个连锁框架。     

瓜类遗传连锁图谱构建的研究现状及比较分析

 截至目前,西瓜、黄瓜及甜瓜的全基因组测序工作已经基本完成,利用高密度饱和遗传连锁图谱将基因组序列锚定到染色体的具体位置并确定其在染色体上的方向,这为进一步开展基因组分析研究奠定了基础。本文中综述了瓜类遗传连锁图谱构建的研究现状并对遗传连锁图谱进行了比较分析。     

十六份姜花属花卉种质的SRAP分子标记指纹图谱构建

姜花属花卉种质来源广泛,包括栽培种、栽培品种及新育成品系等,从形态上常难以鉴定。该研究在全面收集姜花属主要花卉种质的基础上,采用SRAP分子标记方法,从多态性较好的12对引物中筛选出2对引物,构建了16份姜花属常见花卉种质的分子标记指纹图谱。结果表明:采用SRAP分子标记方法,条带清晰、结果稳定、重复性高,可用于姜花属花卉种质的快速、准确的鉴定。     

核果类果树遗传连锁图谱的研究进展

遗传连锁图谱构建是基因组研究中的重要环节,是基因定位与克隆乃至基因组结构与功能研究的基础。近20a来,分子生物学特别是分子标记技术的飞速发展为高饱和核果类遗传连锁图谱的构建和利用奠定了基础。目前国内外已经公布十几张核果类的遗传连锁图谱,但这些图谱均有不同的缺陷。因此,我们就核果类遗传连锁图谱的构建进展、性状的QTL定位及比较图谱应用进行了综述,并探讨了核果类遗传连锁图谱研究的前景和存在的问题。     

利用AFLP和RAPD标记构建桃的遗传连锁图谱

为了给进一步研究桃的遗传标记的定位打下基础,以毛桃北京2—7[Prunus persica(L．)Batsch．Beijing2-7]、山桃白花山碧桃[Prunus davidiana(Carr．)Franch．Baihuashanbitao]以及2者的F1代为试材,用RAPD、AFLP标记构建了北京2—7和白花山碧桃的遗传连锁图,分别覆盖221．7 cM(7个连锁群)、1238．8 cM(12个连锁群)。其中北京2—7的连锁图包含19个标记,标记间平均距离为11．7 cM;白花山碧桃的连锁图包含103个标记,标记间平均距离为12．0 cM。     

桃分子连锁图谱的构建

为建立桃的高质量遗传图谱,进一步研究桃的遗传标记,获得与桃农艺性状紧密连锁的分子标记以及更多更可靠的数量性状标记(QTLs)打下基础并提供保障,以油桃品种秦光2号和曙光的91株正交F1代为试材,用Join-Map3.0软件的CP作图模型构建了桃的AFLP分子标记遗传连锁图谱。该图谱覆盖桃基因组1034cM,共计122个AFLP标记和2个质量性状标记(核黏离性状Ff和果肉颜色性状Yy)定位于11个连锁群上,连锁群的平均长度为94cM,每个连锁群包含2～23个标记,标记间平均距离为8.34cM。     

利用SRAP分子标记分析结球大白菜的遗传多样性

利用SRAP技术对各种形态具有代表性的46个结球大白菜骨干自交系进行了DNA多态性分析。从170对引物中筛选出8对引物应用于扩增基因组DNA,共获得328条重复性好、清晰可辨的条带,大小在200～2500bp之间,其中283条为多态性带(86.28%)。其平均多样性指数为0.3840,每个位点的有效等位基因数是1.4170,遗传相异性系数分布在0.050～0.7553之间,平均0.5508,标准差为9.47×10-2。利用UPGMA方法聚类分析,可将试材分成五大类群,与传统的形态学分类有一定差异。第一、二、三类群为高桩材料,第四类群仅包括VB06-18,第五类群囊括绝大多数的矮桩材料。第五类群又明显分成两个亚群,春材料集中分布在一亚群之中。结果显示:结球大白菜自交系遗传背景复杂,类群内相似性程度较高。今后需加大国外资源引进力度,深入挖掘原始地方品种,才能使大白菜育种工作取得突破性进展。同时,该试验研究结果对大白菜的杂交育种工作具有一定的指导作用。     

利用重组自交系群体构建番茄AFLP 遗传连锁图谱

 以普通栽培番茄（Solanum lycopersicum）99165-30为母本,野生多毛番茄（Solanum habrochaites）LA1777为父本进行杂交,通过单粒传得到了含有80个F_5︰6家系的重组自交系分离群体,利用荧光AFLP分子标记技术构建番茄分子遗传连锁图谱。AFLP标记采用MseⅠ和EcoRⅠ两种内切酶及荧光标记（IRD-700或IRD-800）的E + 3和非荧光标记的M + 3引物组合进行选择性扩增,扩增结果经95 ℃预变性后在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳2.5 h,运用LICOR 公司的NEN Global Edition IR² DNA Analyzer（Model 5200 LI-COR Biosciences,Lincoln,NE）荧光扫描检测DNA多态性。对RILs群体中产生分离的274个AFLP标记运用JoinMap 3.0软件分析,得到一张番茄分子遗传连锁图谱,图谱总长度为662 cM,共包括18个主要连锁群,125个多态性分子标记。每条连锁群上的标记数在3 ~ 22个之间,连锁群的长度在14.0 ~ 58.0 cM的范围内,平均图距在 2.27 ~ 13.3 cM。总平均距离5.3 cM,本研究中构建的番茄永久遗传图谱,为番茄分子辅助育种及重要农艺性状的定位奠定了基础。     

杏杂合位点共显性标记的分离方式及连锁图谱构建

以‘串枝红’ב金太阳’杏的F1代为材料,在分析共显性标记分离方式的基础上利用简单重复序列（SSR）和相关序列扩增多态性（SRAP）标记,构建了两张杏分子连锁图谱。‘串枝红’图谱共14个连锁群,包含37个SSR标记和32个SRAP标记,连锁群总长度为1086.6cM,每连锁群平均长度77.6cM,标记间平均连锁距离为1...     

利用多种分子标记构建龙眼高密度分子遗传图谱

 以龙眼特优质品种‘凤梨朵’为母本, 大果型主栽品种‘大乌圆’为父本, 杂交创建了‘凤梨朵’ ב大乌圆’F₁群体。从该杂种群体中随机选用94个单株作为作图群体, 连同两个亲本品种, 进行了RAPD、ISSR、SRAP和AFLP分子标记分析, 并运用JoinMap3.0进行连锁分析, 分别构建了‘凤梨朵’和‘大乌圆’的分子遗传图谱, 其中, ‘凤梨朵’的遗传图谱为21个连锁群, 包含183个标记位点,覆盖总图距965.1 cM, 位点间平均遗传距离为5.84 cM; ‘大乌圆’的遗传图谱为22个连锁群, 包含251个标记位点, 覆盖总图距1 064.8 cM, 位点间平均遗传距离为4.65 cM。这是龙眼上首次报道的高密度分子遗传图谱, 为后续的基因定位及辅助选择奠定了良好的基础。     

应用RAPD、SRAP及AFLP标记构建荔枝高密度复合遗传图谱

以荔枝（Litchi chinensis Sonn.）特迟熟品种‘马贵荔’为母本,特早熟品种‘焦核三月红’为父本,杂交获得F1群体,利用该群体的76个单株为作图群体,连同两个亲本,进行了RAPD、SRAP和AFLP分子标记分析,并运用Joinmap3.0进行连锁分析,分别构建了‘马贵荔’和‘焦核三月红’的分子遗传图谱,其中‘马贵荔’的遗传图谱为20个连锁群,包含238个标记位点,覆盖总图距1 096.59 cM,位点间平均遗传距离为4.61 cM;焦核三月红的遗传图谱为19个连锁群,包含239个标记位点,覆盖总图距881.36 cM,位点间平均遗传距离为3.69 cM。     

白术种质资源遗传多样性的SRAP分析

以湖北咸丰、湖南平江、安徽亳州等8个白术主产地的52份不同株型(紧凑型、中间型、松散型)白术种质资源为试材,采用SRAP分子标记法,研究了其遗传多样性,以期为白术种质资源有效利用及品种选育提供参考依据。结果表明:14对SRAP多态性引物共检测到184个位点,多态性百分率为88.6%,Nei′s基因多样性指数(H)平均值为0.2313,Shannon多样性指数(I)平均值为0.3629,基因流(N_m)为1.2137。52份种质间遗传相似系数为0.5272~0.9728,平均值为0.7985。紧凑型和松散型白术遗传多样性指数较为接近,且整体低于中间型,松散型与紧凑型白术遗传差异最大,而与中间型遗传差异最小。在遗传相似系数为0.80时,可将52份白术种质划分为九大类,聚类结果与地理分布无明显相关性,紧凑型主要聚在第一和第三大类,而松散型和中间型分散在各大类中。52份白术种质资源具有较丰富的遗传多样性,其中中间型和松散型种质遗传多样性较紧凑型丰富,可通过进一步研究筛选白术理想株型,为白术良种选育提供基础。     

甘肃桃抗南方根结线虫性状的SRAP标记

以桃野生近缘种红根甘肃桃（Prunus kansuensis）与贝蕾[P. persica（L.）Batsch.]杂交的BC1代190株后代为试材,采用SRAP分子标记进行遗传分析。通过筛选在亲本中扩增稳定且多态性丰富的53对SRAP引物进行后代分析,获得来自红根甘肃桃且符合1︰1分离比例的标记115个。应用Mapmaker/Exp 3.0分析软件构建了红根甘肃桃的SRAP分子连锁图谱。该图谱共8个连锁群,包含103个标记,其中102个SRAP标记、1个抗南方根结线虫（Meloidogyne incognita）标记,总图距994.2 cM,每个连锁群的平均长度为124.3 cM,标记间平均图距为9.6 cM。抗南方根结线虫标记Mi-redkansu位于第5连锁群,并获得与其紧密连锁的SRAP标记,其遗传距离为2.1 cM。以36株F2代群体作为验证,检验标记的准确性为91.7%。     

红掌苗期施肥试验研究

试验初步探索了5种不同类型的肥料施用对红掌苗期生长的影响,旨在为红掌苗期的科学施肥提供理论依据。结果表明:处理D对红掌苗期生长的叶片数、株高、最大叶片叶长及最大叶片叶宽4个指标综合效果最佳,处理E、C次之,处理B和A表现最差。     

红掌愈伤组织和再生团块发育过程中糖和蛋白质的组织化学研究

以红掌叶片诱导出的4类愈伤组织和气生根根段诱导的再生团块为试材,研究糖和蛋白质在愈伤组织衰老与再生团块发生发育过程中的变化。经石蜡切片PAS和汞溴酚兰组织化学染色观察发现,糖主要以颗粒状存在于愈伤组织细胞中,并有明显的围绕核的现象,蛋白质主要集中于细胞核及其周围。糖和蛋白质的含量在黄绿愈伤组织中有明显的从外向内减少的梯度变化;深绿愈伤组织中梯度不太明显。糖在金黄色愈伤组织中含量很低,没有梯度;在褐色愈伤组织中散乱分布。蛋白质含量变化在金黄色愈伤组织中由外层细胞向内层细胞有一定的梯度但不明显;在褐色愈伤组织中没有梯度。刚形成的再生团块的糖和蛋白质含量在由外向内的细胞中有明显的梯度变化,在再生团块膨大生长过程中两者含量少,没有梯度变化。分化期再生团块中的糖主要集中在分裂旺盛的分生细胞团和维管组织周围,蛋白质则集中于分生细胞团的细胞中。在各类愈伤组织和再生团块中均出现各种特化细胞。糖的含量及其梯度变化是愈伤组织和再生团块分化的重要内在条件,蛋白质含量以及核形态是否完整是愈伤组织和再生团块分化的关键。     

红掌根腐病病原鉴定及其PCR 检测方法

 利用真菌通用引物ITS1 和ITS4 扩增红掌根腐病菌转录间隔区并进行序列测定,通过序列 比较,设计了1 对红掌根腐病菌的特异引物SF1/SR2,对30 个红掌根腐病病原菌、8 种其它真菌和2 种 细菌基因组DNA 进行PCR 扩增。结果表明,只有红掌根腐病菌获得572 bp 的特异带。使用引物SF1/SR2 对华丽腐霉进行PCR 扩增,其检测灵敏度在DNA 水平上可达1 pg。运用设计的引物从红掌根腐病菌基 因组DNA 以及人工接种和自然发病的红掌植株中扩增到572 bp 的特异片段,实现了对红掌根腐病菌的快 速可靠的检测。     

不同红掌品种在组培生产上的差异表现

以"亚利桑那"、"阿拉巴马"、"粉冠军"3个红掌品种根茎、叶柄、叶片为外植体,研究比较了3个品种的外植体诱导、继代增殖、生根培养的差异表现。结果表明:根茎诱导无菌芽成功率为86.9～90.0%,叶片诱导愈伤组织成功率为80%～84%,叶柄诱导愈伤组织成功率为64%～68%,根茎一般较难诱导出愈伤组织;不同品种的红掌增殖继代的增殖倍率不同,"粉冠军"最高为6.8,其次为"亚利桑那"5.8,"阿拉巴马"为3.8。红掌的生根较易,不同品种的红掌生根率均可达到95%以上。     

红掌炭疽病病原的分离鉴定及其核糖体DNA2ITS序列分析

 在广州、南京和扬州等地红掌病株上分离的炭疽菌中存在形态差异明显的两个群体。各选取两个代表菌株进行形态特征、致病性、寄主范围鉴定及核糖体DNA ITS序列分析。结果表明,红掌炭疽病病株上有两种致病菌：胶孢炭疽和毁灭炭疽,后者导致红掌炭疽病为首次报道。     

花烛体细胞胚胎发生及植株再生研究

 以花烛(Anthurium andraeanum Lind. ) 盆花品种无菌苗叶片、叶柄、根段为外植体, 对花烛体细胞胚胎发生及植株再生进行了研究, 建立了花烛体细胞胚胎发生体系。结果表明, 花烛叶片较其他外植体更适宜体细胞胚的诱导; 胚性愈伤组织及胚性结构诱导最适培养基为改良MS + 2, 4-D 2.0～3.0 mg·L ^{- 1} + KT 0.5 mg·L ^{- 1} +蔗糖2% +葡萄糖1% , pH 5.5, 暗培养40 d, 诱导率可达90.3%; 体胚发育适宜培养基为改良MS + 6-BA 0.5 mg·L ^{- 1} +蔗糖3% , 光强20 μmol·m ^-2 · s^-1 , 培养20 d后体胚萌发率达6219%; 萌发的体胚在发育培养基上继续培养30 d后均能发育成完整植株。对不同阶段培养材料的组织结构及超微结构的观察证明了花烛体胚发生过程。