多花黄精内生真菌及根际土真菌群落组成分析

基于Illumina Miseq高通量测序技术分析了湘黔桂三地野生多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua.）内生真菌、根际土真菌的群落组成及多样性。获得真菌ASVs共3 188条，经聚类涉11门33纲85目166科320属375种真菌，真菌类别主要为子囊菌门（Ascomycota）、担子菌门（Basidiomycota）。在属水平上，根际土真菌贵州样品优势属为Cladophialophora、外瓶柄霉属（Exophiala）等，湖南为Archaeorhizomyces、被孢霉属（Mortierella）等，广西为镰刀属（Fusarium）、Saitozyma等；内生真菌贵州优势属为外瓶柄霉属、粉褶菌属（Entoloma）等，湖南为地星属（Geastrum）、被孢霉属等，广西为镰刀属、Saitozyma等。α多样性分析显示，湘黔桂三地多花黄精药用部位块茎内生真菌、根际土真菌群落的多样性和丰富度均有较大差异；PCoA及UPGMA聚类结果显示，三地间的真菌群落组成差异较大；PICRUSt 2分析预测表明，内生真菌及根际土真菌参与多条代谢途径及黄精多糖等活性物质生成。     

不同林药套种模式根系土壤真菌群落组成及多样性分析

本文研究了4种不同林药复合经营模式根系土壤真菌群落组成及多样性变化。结果表明:杜英—多花黄精复合系统根系土壤真菌数量高于杜英纯林,Chao 1指数、Ace指数和Shannon指数显著增加;与杉木纯林相比,杉木套种其他药材土壤样本真菌群落丰富度指数(Ace、Chao 1)和多样性指数(Simpson、Shannon)降低。不同林药复合种植真菌组成在门分类上优势菌种较一致,均为子囊菌门和担子菌门。在纲分类水平上,杜英套种多花黄精的优势菌群为粪壳菌纲和被孢霉纲;杉木套种其他药材的优势菌群为伞菌纲、被孢霉纲和粪壳菌纲。综上所述,杜英—多花黄精复合系统有利于根系土壤真菌的生存,后期可以对此种复合经营模式进行深入研究。     

白芨内生真菌的多样性

为研究白芨内生菌的多样性,从新鲜白芨根中提取内生真菌的DNA,构建ITS r DNA文库,进行高通量测序和多项信息分析。结果显示,白芨内生真菌主要属于担子菌门(83.4%)和子囊菌门(14.3%),另外2.3%无法鉴定;担子菌门、子囊菌门、接合菌门的菌根优势度指数分别为0.834 1、0.142 6、0.000 3,无法鉴定的真菌菌根优势度指数为0.022 9。纲、目的分类水平上,伞菌纲蜡壳菌目占83.4%,盘菌纲盘菌目占11.4%,锤舌菌纲柔膜菌目占2.1%,无法鉴定的占2.3%。科分类水平上,内生真菌主要属于Serendipitacea(83.4%)和盘菌科(11.4%)。属的分类水平上,梨形孢属(Piriformospora)占83.4%。Shannon index、Chao1、Observed species和Simpson 4种曲线分析结果显示,白芨菌根内生真菌的多样性呈均匀分布。     

大花杓兰内生真菌多样性研究

对大花杓兰(Cypripedium macranthum Sw.)内生真菌类群组成及多样性进行了分析。结果表明,从大花杓兰植株中分离到内生真菌59株,利用ITS-r DNA序列分子鉴定法将大花杓兰内生真菌鉴定为18个分类单元,分布在7纲9目11科16属。北京大花杓兰内生真菌包括12个属,内生真菌的多样性指数H=1.39、D=0.96,优势菌群为毛壳菌属(Chaetomium)和茎点霉属(Phoma)真菌,分别占总菌株数的15.25%和8.47%;吉林大花杓兰样品内生真菌归于9个属,内生真菌的多样性指数H=1.31、D=0.93,以毛壳菌属(Chaetomium)为优势菌群,占总菌株数的23.73%。由此可见,北京大花杓兰中内生真菌多样性高于吉林大花杓兰。     

旱柳内生真菌多样性研究

从呼和浩特市树木园、内农大校园、和林格尔县、古路板林场和榆林镇5个地区采集的旱柳中共分离到内生真菌1 409株(其中未产孢382株),经显微镜形态观察鉴定1 027株分属于3亚门4纲5目6科27属.不同生境、树龄、部位分离获得的内生真菌在数量、分布和种群上存在差异,各部位都有独立属,说明了旱柳内生真菌具有种群多样性及组织专一性特点.其中链格孢属(Alternaria sp.)和青霉属(Penicillium sp.)的分离频率分别为26.76％和11.92％,为优势菌属.     

西红花球茎病变对内生真菌多样性及菌群结构的影响

为了揭示病害对西红花内生真菌菌群结构的影响规律,为西红花病害防治提供参考依据。本研究对3个产地西红花健康球茎与病变球茎中分离鉴定的内生真菌进行物种优势度、物种数和多样性指数分析,物种优势度以相对分离频率进行计算,多样性指数采用Shannon-Wiener指数(H')与Simpson指数(1-D)。结果表明,球茎病变显著影响西红花内生真菌菌群结构与多样性,病变后内生真菌物种丰度从26下降至19,最优势种由Talaromyces rugulosus变为Fusarium oxysporum,病变同时降低了西红花内生真菌多样性。内生真菌多样性的降低与镰刀菌等有害菌群的增加可能是西红花球茎病变的主要原因。     

槲蕨根际真菌与内生真菌的多样性及相关性分析

对槲蕨(Drynaria roosii)的根际真菌和内生真菌进行分离,共获得46株根际真菌,分属2亚门5目6科9属,青霉属、曲霉属、木霉属、镰刀菌属为槲蕨根际真菌优势属;50株内生真菌分属于1亚门4目5科12属,青霉属、曲霉属、木霉属、镰刀菌属为槲蕨内生真菌优势属。槲蕨植物内生真菌及其根际真菌具有丰富的多样性,也具有一定的相关性。     

红江橙可培养内生真菌生物多样性和种群结构分析

为探究红江橙内生真菌种群多样性和群落结构,比较红江橙健株和患黄龙病病株内生真菌群落的差异,采用组织块分离法从红江橙的根、茎、叶中分离内生真菌,以形态学结合ITS-rDNA序列分析法进行菌株分类鉴定,根据Shannon-Wiener多样性指数、菌株分离的相对频率和相似性指数分析红江橙内生真菌的菌群分布及多样性。结果表明,从红江橙根、茎、叶中分离得到内生真菌117株,鉴定归属为3纲11目15科18属,其中炭疽菌属(Colletotrichum spp.)、镰刀菌属(Fusarium spp.)、叶点霉属(Phyllosticta spp.)、黑孢霉属(Nigrospora spp.)和青霉菌属(Penicillium spp.)为优势菌群,其相对分离率分别为58.97%、8.55%、8.55%、4.27%、3.42%。植株总体内生真菌Shannon-Wiener多样性指数为1.68,总均匀度指数为0.30,茎与叶、根与叶及根与茎的相似性指数分别为0.48、0.33、0.32。黄龙病病株与健株内生真菌Shannon-Wiener多样性指数有较大差异,健株多样性指数除根部略低于病株外,总多样性...     

华重楼根茎内生细菌群落多样性及其功能预测

内生菌广泛存在于植物组织内部,是植物微生态系统的重要组成部分。为了解华重楼根茎内生细菌的群落组成和其潜在的生物学功能,采用高通量16S rRNA测序技术分析了2 年生华重楼根茎内生细菌群落多样性,并通过PICRUSt分析,评价了其内生细菌的潜在功能。结果表明,5个华重楼根茎共获得112 267条16S rRNA V3-V4区高质量序列片段,内生细菌群落的α-多样性Chao1指数、Observed species指数、PD whole tree指数和Shannon指数的平均值分别为3417.7、748.0、40.7和8.3;其优势门为厚壁菌门和放线菌门,优势变形菌纲为γ-变形菌纲和α-变形菌纲,优势菌属为Dubosiella(占比为5.61%)。16S rRNA功能预测结果显示,华重楼根茎内生细菌功能主要涉及膜运输、能量代谢、碳水化合物代谢、氨基酸代谢和辅酶因子、维生素代谢等。华重楼根茎内生细菌群落多样性丰富,具有大量代谢相关的有益菌。     

仁怀市大型真菌资源初步调查

对仁怀市开展大型真菌资源调查，旨在为该地区真菌资源的保护和开发利用提供理论依据。采用踏查法对该地区大型真菌资源进行调查研究，结果表明：(1)该调查区共有大型真菌59种，隶属于2门3纲9目27科43属，其中子囊菌门1纲1目1科1属1种，担子菌门2纲8目26科42属58种；(2)该调查区分布有具有经济价值的真菌资源：食用菌6种、药用菌15种、食药兼用菌13种和有毒真菌7种；(3)濒危物种评价结果表明：该调查区有中国特有种和易危种1个(金耳Naematelia aurantialba);(4)仁怀市大型真菌以世界广布属和北温带分布属种类为主，具有北温带分布特征，但仍有一定比例的热带、亚热带种类分布。该研究为仁怀市的大型真菌物种多样性提供了一定参考，也为大型真菌物种保护和可持续发展奠定了科学基础。     

木麻黄内生真菌次生代谢产物及生物活性

【目的】分离和鉴定木麻黄Casuarina equisetifolia枝条和果实中的内生真菌,筛选具有抗菌和抗氧化活性的内生真菌。【方法】采用组织块分离法分离木麻黄枝条和果实中的内生真菌,通过菌落观察和分子生物学相结合的方法对分离到的内生真菌进行鉴定;采用薄层层析-生物自显影法测定木麻黄内生真菌次生代谢产物对细菌的抑制活性,采用多孔板-DPPH显色法测定抗氧化活性。【结果】从木麻黄枝条和果实中共分离鉴定得到12株内生真菌,枝条和果实内生真菌存在明显的差异,相同的菌株只有2株,分别为Cef-1(Pseudofusicoccum sp.)和Cef-7(Pestalotiopsis sp.);12株内生真菌分属于9个不同的属中,分别为Pseudofusicoccum、葡萄座腔菌属Botryosphaeria、拟盘多毛孢属Pestalotiopsis、木霉属Trichoderma、曲霉属Aspergillus、裂菌属Rhytidhysteron、拟茎点霉属Phomopsis、镰刀菌属Fusarium和炭疽菌属Colletotrichum。其中,葡萄座腔菌属种类最多,为木麻黄内生真菌的优势种群,其次是拟盘多毛孢属真菌。抗细菌活性的结果表明,Cef-2(Botryosphaeria sp.)表现出最强的抑制活性,对所有供试细菌的抑菌斑直径均大于10 mm,强于阳性对照硫酸链霉素,Cef-1和Cef-9(Fusarium sp.)对青枯病菌Ralstonia solanacearum也表现出较好的抑制活性。内生真菌Cef-2表现出最好的抗氧化活性,IC50为0.80mg/mL。【结论】木麻黄枝条和果实中均存在内生真菌且均以葡萄座腔菌属为优势种群,2个部位真菌的种类存在明显差异。内生真菌Cef-2表现出最强的抗细菌和抗氧化活性,可作为候选菌株进一步分离和鉴定其活性成分。     

檀香紫檀内生真菌多样性与抗菌活性分析

【目的】分析药源植物檀香紫檀内生真菌多样性及其代谢产物抗菌活性,为寻找新型抗菌活性物质提供参考。【方法】从广东药科大学中药园采集3株健康檀香紫檀的根、茎、叶组织样品,采用组织分离法分离其内生真菌;结合形态学和分子生物学方法对檀香紫檀内生真菌进行分类和鉴定;分别采用纸片扩散法和菌丝生长速率法研究代表性内生真菌发酵液对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CMCC26003、大肠埃希菌（Escherichia coli）CMCC44102、痢疾杆菌（Shigella dysenteriae）CMCC51252、伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）CMCC50115、白色念珠菌（C.albicans）ATCC10231和黑曲霉（Aspergillus niger）CMCC98003的抗菌活性。【结果】从450块檀香紫檀组织中共分离到337株内生真菌,其中来自叶172株、茎66株、根99株,隶属15个属。叶部内生真菌的相对分离率和定殖率最高,均为79.63%;叶部、根部和茎部的内生真菌多样性指数分别为1.02、0.93和0.64,三者间差异显著（P< 0.05）。木霉属（Trichoderma sp.）为根部优势属,相对分离率为28.28%;青霉属（Penicillium sp.）为茎部和叶部的优势属,相对分离率分别为46.97%和52.91%。45株代表性内生真菌发酵液抗菌活性测定结果显示,有16株内生真菌（35.56%）对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、大肠埃希菌和痢疾杆菌具有抑菌活性;36株（80.00%）对白色念珠菌和黑曲霉具有抑菌活性;有15株（33.33%）对6种测试细菌和真菌均具抑制活性,其中菌株L9（Colletotrichum sp.）代谢产物的抗菌活性最好,对黑曲霉抑制活性达67.35%,对其余5种测试菌的抑菌圈直径均大于10 mm。【结论】檀香紫檀内生真菌类群分布具有一定的器官组织特异性,物种多样性较丰富,且蕴含有较高比例的抗细菌和抗真菌活性菌株,可为新型抗菌活性物质的筛选与开发提供菌株资源。     

不同生长条件下铁皮石斛内生细菌多样性及活性菌株的筛选

目的 比较和分析野生与人工栽培铁皮石斛Dendrobium officinale 内生细菌分布特点,筛选有较强定殖能力的活性菌株,为促进野生铁皮石斛驯化、提高药材品质奠定基础。方法 采用组织块分离法分离铁皮石斛根、茎、叶各部位的内生细菌,利用16S rDNA序列和系统发育树对分离菌株进行分析鉴定,体外筛选具有解磷、解钾、固氮、产铁载体、产IAA、拮抗病原菌的促生活性菌株,回接后再分离,观察内生细菌在组培苗中的定殖动态。结果 从铁皮石斛中分离到285株内生细菌,其中,217株分离自野生铁皮石斛,归类于3门9属,以芽孢杆菌属Bacillus和不动杆菌属Acinetobacter为优势菌群存在于根、茎、叶中,其菌株数分别占总分离菌株数的79.26%和8.76%;68株内生细菌分离自人工栽培铁皮石斛,归类于1门3属,以伯克霍尔德菌属Burkholderia和埃希菌属Escherichia为优势菌群存在于根、茎中,其菌株数分别占总分离菌株数的54.41%和30.88%。泛菌属Pantoea在野生和人工栽培铁皮石斛中均有分布。野生铁皮石斛内生细菌的物种数(9)和多样性指数(0.85)明显高于人工栽培铁皮石斛(物种数为3,多样性指数为0.61)。活性筛选共获得38株菌株,占筛选菌株的45%,4株野生铁皮石斛的活性内生细菌中有3株在人工组培苗具有较好的定殖性。结论 野生与人工栽培铁皮石斛内生细菌的类群结构和生物多样性具有明显差异,铁皮石斛内生细菌蕴含丰富的促生潜力。     

黄萎病侵染后棉花根部内生真菌群落结构分析

为研究黄萎病菌侵染对棉花根部内生真菌群落结构的影响,采用PCR-DGGE技术分析黄萎病侵染后苗期、蕾期、花期、铃期健康棉株和发病棉株内生真菌群落组成。结果显示,在棉花生长中后期,发病棉株样品中各指数均高于健康棉株,说明黄萎病菌侵染可提高内生真菌群落结构的多样性;在DGGE电泳图谱中,对差异明显的17个条带进行切胶回收、克隆测序,发现有7个条带分布在半知菌亚门,占41.18%,4个条带分布在子囊菌亚门,占23.53%,其他条带分别为fungal endophyt、uncultured fungus、Dothideomycete和Acremonium cellulolyticus。说明:黄萎病菌侵染能明显改变内生真菌群落结构多样性。     

中草药日本鸢尾内生真菌的分离及其初步鉴定

目的 分析日本鸢尾（Iris japonica）内生真菌的类群分布。方法 通过菌落形态特征、显微镜下的孢子观察及基于ITS序列分析的分子生物学鉴定分析日本鸢尾各部位内生真菌的类群组成。结果 从日本鸢尾的根茎叶中共分离得到5种内生真菌。根中分离得到的内生真菌为橘青霉（Penicillium citrinum）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）,茎中为小新壳梭孢菌（Neofusicoccum parvum）,叶中为橘青霉（Penicillium citrinum）、肉色隔孢伏革菌（Peniophora incarnata）、首都叶点霉（Phyllosticta capitalensis）。结论 自日本鸢尾分离获得5种内生真菌,其分布具有一定的组织特异性,可为药用植物内生真菌的开发和利用提供一定基础。     

基于28S rDNA序列的2种飞虱内生真菌多样性研究

飞虱是农业的重要害虫之一,其体内存在大量共生菌,它们为寄主提供氨基酸、固醇类物质以及蛋白质等多种营养成分,保证飞虱的正常生长和繁殖。利用对飞虱内生真菌28S rDNA基因克隆和序列比对分析的方法,首次对烟翅白背飞虱Sogatella Kolophon和长绿飞虱Saccharosydne procerus体内内生真菌的多样性进行研究。结果显示,烟翅白背飞虱腹部脂肪体内可能存在4种内生真菌,其中热带假丝酵母Candida tropicalis为优势共生菌;长绿飞虱可能存在6种内生真菌,其中担子菌酵母Derxomyces anomala和泡状莫氏黑粉菌Moesziomyces bullatus系为飞虱首次发现。另外,在这2种飞虱体内均发现了一种与白地霉 Galactomyces geotrichum相似度为99%的内生真菌,这也是该菌在飞虱体内的首次报道。本研究为以后探讨内生真菌与其宿主的进化关系及探索利用内生菌防治飞虱害虫奠定了基础。     

鹅绒委陵菜根际AM真菌侵染特性及物种多样性

为深入了解松嫩盐碱草地中鹅绒委陵菜根际的AM真菌类型及其侵染特性,更好地实现AM真菌资源的开发利用,对鹅绒委陵菜根系及根际AM真菌种类进行采样研究。结果表明:在不同土壤pH环境下,鹅绒委陵菜全部与AM真菌形成共生体系,其菌根结构为疆南星型(Arum-type);鉴定出8属38种AM真菌,其中,球囊霉属(Glomus)20种,是松嫩盐碱草地鹅绒委陵菜根际优势属;无梗囊霉属(Acaulospora)11种;原囊霉属(Archaeospora)、内养囊霉属(Entrophospora)、盾巨孢囊霉属(Scutellospora)、近明囊霉属(Claroideoglomus)、根生囊霉属(Rhizophagus)和隔球囊霉属(Septoglomus)各1种。黑球囊霉(G.melanosporum)为鹅绒委陵菜根际优势菌种,其重要值为60.38%。由此可见,松嫩盐碱草地鹅绒委陵菜能与AM真菌很好地共生,且根际AM真菌种类丰富。     

海南粗榧内生真菌多样性分析

以海南五指山自然保护区海南粗榧为研究对象,从423个表面消毒的组织块中,分离获得416个内生真菌菌株。通过形态学观察和ITS-rDNA 序列分析对分离得到的真菌进行鉴定,分别归入12个属,10属为半知菌,2属为子囊菌。结果表明,在海南粗榧不同组织中,刺盘孢属（Colletotrichum）、拟茎点霉（Phomopsis）均为优势类群,其中,刺盘孢属在叶中最多,拟茎点霉属在树干皮、根皮中最多。此外,镰孢霉属（Fusarium）为树干皮的优势类群,球二孢属（Lasiodiplodia）为根皮的优势类群,双胞束梗霉属（Didymostilbe）为叶的优势类群;Shannon-Wiener多样性指数（H忆）为0.97~1.83,不同组织之间的相似性系数（CS）为0.63~1.00曰分离得到的菌株中,WZS7165、WZS7240及WZS7277与已报道基因序列的相似性分别只有97%、92豫、88豫,具有进一步研究的价值,以确定其是否为微生物新种资源。     

普通硅肥与纳米硅肥对烤烟内生真菌种群结构的影响

To explore the effects of common silicon fertilizer and nano-silicon fertilizer on the population structure of endophytic fungi in flue-cured tobacco,Yunyan 99 was used as test material, common silicon and nano-silicon were sprayed at vigorous growth,budding and dome stages.The treatments were set as follows: CK (water), T5 (common silicon,0.17 kg/hm²), T8 (nano-silicon,0.32 kg/hm²).The effects of different silicon fertilizer on the diversity, composition, structure, chemical composition and aroma substance of endophytic fungi in flue-cured tobacco were studied. Compared with CK, T5 and T8 treatment could effectively improve the community diversity,composition, structure and the content of chemicals and aroma substances. Compared with CK, the diversity of endophytic fungi increased under T8 treatment and decreased under T5 treatment.Compared with CK, the relative abundance of Basidiomycota under T5 and T8 increased by 58.14% and 37.35%, respectively,at the same time, the relative abundance of Flobasidium increased by 113.17% and 417.07%, respectively.Among them, T8 treatment increased the species of endophytic fungi, among which,31 species were more than CK treatment. The correlation analysis was based on chemical composition, aroma substances of tobacco leaves and endophytic fungal community composition.The contents of nicotine,soluble protein,Maillard reaction products and aroma substances were significantly related to the community composition of endophytic fungi in tobacco leaves. The diversity of endophytic fungi in tobacco leaves could be increased by spraying nano-silica fertilizer on leaf surface,and the content of chemicals and aroma substances of tobacco could be changed.It is meaningful for human to produce high quality flue-cured tobacco.     

广东化橘红内生真菌多样性分析

通过组织分离方法对广东省化州市橘红种植园内所采的化橘红（Exocarpium citri Grandis）果、枝、叶组织内的内生真菌多样性进行研究,并采用形态与分子生物学相结合的方法鉴定菌株. 结果显示,从化橘红果、枝、叶600个组织块中,共分离得到404株内生真菌. 依据形态鉴定及ITS序列分子鉴定,初步鉴定379株内生真菌,并将其分为16个分类单元,经鉴定归于镰刀菌属(Fusarium)、炭疽菌属(Colletotrichum)、色二孢菌属(Lasiodiplodia)、间座壳属(Diaporthe)、光黑壳属(Preussia)、稻黑孢菌属(Nigrospora)、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)、弯孢属(Curvularia)、隔孢伏革属(Peniophora)、叶点霉属(Phyllosticta)、枝孢属(Cladosporium)、球腔菌属(Mycosphaerella)、假尾孢属(Pseudocercospora)、附球菌属(Epicoccum)、拟层孔菌（Fomitopsis）和毛霉属Mucor）,其中炭疽菌属与间座壳属是化橘红的优势菌株,其相对频率分别为44.6% 和34.2%,远远高于其他类群. 内生真菌在枝组织中的分离率为91%. 研究结果表明化橘红内生真菌分布具有一定的组织特异性,为进一步从化橘红内生真菌中筛选活性中药成分提供了新思路.