分子生物技术在蜜蜂育种研究上的应用

综述了应用微卫星 DNA技术、线粒体 DNA(mt DNA)技术、随机扩增多态性 DNA(RAPD)、聚合酶链式反应 (PCR)和 DNA指纹等分子生物技术所进行的蜜蜂育种研究现状 .其应用主要包括估计蜂群内亚家系(父系 )的组成数目和分析工蜂间的遗传相关 ,推断蜂王的多雄水平和鉴定蜜蜂种性 ,构建连锁图和区别数量性状位点 ,鉴定基因型和区别全胞、半胞姐妹以及分析精子受精力的倾向性等     

东方蜜蜂与西方蜜蜂酯酶同工酶的比较研究

酯酶（esterase）是一组多态性很高的同工酶，常用于昆虫种属鉴定和遗传变异研究。本试验采用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳（IEF-PAGE）技术，分析了浙农大Ⅰ号意蜂（A.m. lingustica）、东北黑蜂（A.m.ssp）和卡尼鄂拉蜂（A.m.carnica）等西方蜜蜂与中华蜜蜂（A.cerana cermama）酯酶同工酶及蜜蜂不同发育阶段酯酶同工酶的变化，以便为酯酶同工酶在蜜蜂遗传变异、种属鉴定及品种选育研究中的应用，提供基础资料。 　　1　材料与方法 　　1.1　材　料　浙农大Ⅰ号意蜂和中华蜜蜂来自浙江大学实验蜂场，东北黑蜂和卡尼鄂拉蜂来自吉林省蜜蜂研究所种蜂场。 　　1.2　方　法　每种蜂各取外勤蜂、内勤蜂和幼蜂20只，剪取头部，以1∶2（W/V）加入提取液, 在1.5 mL Eppendrof 管中，用玻棒研磨（冰浴中），离心（4 ℃，12 000 r/min,10 min）,取上清用于电泳。参照Nunamaher等的方法，用IEF-PAGE技术在LKB多相电泳系统中检测酯酶同工酶，酶活性染色液为0.1 mol/L pH6.5的磷酸缓冲液，含33.33%α-乙酸萘酯，33.33%β-乙酸萘酯，66.67%坚牢兰RR。……     

蜜蜂消化道内含物细菌群落组成的PCR-DGGE分析

通过PCR-DGGE技术研究蜜蜂消化道内含物的细菌群落组成,结合蜜蜂消化道细菌的形态特征,对蜜蜂肠道可培养的细菌进行分类与鉴定,研究分析了春季和夏季2个季节健康的蜜蜂工蜂的肠道菌相区别,同时还比对了春季健康蜜蜂和病蜂肠道菌相的区别。     

DNA条形码技术在海马物种鉴定中的应用分析

海马具有重要的药用和观赏价值，但因其可供鉴定的形态特征较少，应用形态学对海马进行种水平的鉴定时经常会遇到很多困难。DNA条形码技术为海马物种鉴定提供了重要的鉴定方法。通过检索生命条形码数据库（BOLD）和GenBank数据库中海马的DNA条形码信息，应用MEGA软件计算海马种间遗传距离，分析DNA条形码在海马物种鉴定中的应用效果。结果表明，COI基因条码可以有效鉴别大部分种以上阶元的海马，但对亲缘关系较近的海马难以获得准确的鉴定结果。还有一些海马尚无相关的基因信息，也无法通过基因条形码进行鉴别。因此，应用DNA条形码鉴定海马物种尚有一定的局限性。     

科学家鉴定出植物条码基因能区别多数品种

一个国际科学家小组鉴定出一对“条码”（barcode）基因，能够区别地球上大多数植物品种。条码基因在不同种类的植物中包含的DNA序列大不相同。科学家希望将来能开发一个手持条码扫描器，类似于超市的扫描器，能够通过植物DNA标签鉴定其种类。     

有百年历史的日益严重的毁灭性柑桔病害——黄龙病（续）

通过检测亚洲种和非洲种黄龙病菌来鉴定黄龙病 到1992年,通过电镜观察柑桔斑驳叶片筛管中具壁黄龙病病原仍是唯一可靠的检测方法,并被广泛应用（Gamier and Bove,1996）。但该技术比较繁重,也不能区别亚洲种和非洲种病原菌。现在随着DNA杂交和PCR等分子技术的发展区别这两种病原菌已成为可能。如前所述,单克隆...     

随机扩境多态DNA技术在野生动物研究中的应用

随机扩增多态DNA（RAPD）是十分有效的遗传标记，具有简单、快速、经济的优点。在野生动物研究中，主要用于物种鉴定、遗传多样性分析、系统进化和分类研究、亲权鉴定、性别鉴定、基因渗入的检测及基因定位和分子连锁图谱构建等领域。RAPD技术在野生动物领域的广泛应用，必将促进野生动物保护事业的发展。     

果树DNA分子标记及基因工程若干研究进展

本文综述了近年来DNA分子标记在果树品种（系）鉴定和分类、果树遗传图谱构建、果树基因标记等方面的应用，以及果树基因工程，包括果树目的基因（片段）的分离克隆、果树遗传转化等方面的研究状况，并对DNA分子标记及基因工程研究中存在的问题进行了总结，指出了今后的发展趋势。     

中华蜜蜂幼虫信息素鉴定

 【目的】分析鉴定中华蜜蜂(Apis cerana cerana)幼虫是否含有与西方蜜蜂（Apis mellifera）幼虫相同的幼虫利它素和信息素及其在不同日龄阶段幼虫的分布情况。【方法】以中华蜜蜂为试验材料,取2日龄、6日龄（即将封盖）和7日龄（封盖后）的工蜂幼虫及2日龄、7日龄（即将封盖）和8日龄（封盖后）的雄蜂幼虫,经过正己烷浸泡碾碎,取上清液并进行层析过柱分离,应用气相色谱来研究中华蜜蜂幼虫利它素和信息素。【结果】本研究首次发现中华蜜蜂幼虫信息素含有甲基棕榈酸酯（MP）、甲基油酸酯(（MO）、甲基硬脂酸酯（MS）、甲基亚油酸酯（ML）、甲基亚麻酸酯（MN）、乙基棕榈酸酯（EP）、乙基油酸酯（EO）、乙基硬脂酸酯（ES）、乙基亚油酸酯（EL）和乙基亚麻酸酯（EN）。【结论】中华蜜蜂幼虫含有与西方蜜蜂幼虫相同的幼虫利它素和10种脂肪类信息素,但这两种蜜蜂信息素的含量及在不同日龄幼虫分布规律不同。     

植物病毒沉默抑制子P25的原核表达及纯化

通过体外DNA重组技术将P25基因连接在pET28a（＋）载体上，构建成重组质粒。经PCR扩增、酶切鉴定及DNA序列分析，融合的P25基因序列正确。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行异丙基β-D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，经过亲和层析得到纯品目的蛋白P25。     

设施甜瓜蜜蜂授粉效果研究

为探明蜜蜂授粉对设施甜瓜的增产提质效果，本研究以在吉林省种植的设施甜瓜‘程甜脆梨’和‘甜到根’为试验材料，就蜜蜂授粉与人工授粉两种方式下的果实形态（横纵径）、品质、产量及经济效益进行了对比，结果表明：与人工授粉相比，蜜蜂授粉可以显著改善‘程甜脆梨’甜瓜的果实形态（横纵径，P <0.05），提高单果重（P<0.05），提升果实品质（可溶性糖类、可溶性固形物和Vc含量等，P <0.05），并且每公顷可提高产量32.50%，增加经济效益29.25万元；同时，蜜蜂授粉也可以显著改善‘甜到根’甜瓜的果形（纵径，P <0.05）和提高单果重（P <0.05），提升果实品质（可溶性糖类、可溶性固形物和Vc含量等，P <0.05），经蜜蜂授粉后，每公顷可提高产量31.00%、增加经济效益21万元。综上所述，采用蜜蜂授粉的设施甜瓜在果形、品质和效益上皆优于人工授粉，具有明显的增产提质效果。因此，可将设施甜瓜蜜蜂授粉技术作为一项绿色高效技术在吉林省加以运用并推广。     

AFLP分子标记的发展及应用

扩增片段长度多态性（AFLP）是一种高效的DNA分子标记技术,近年来其研究方法和检测技术不断改进和优化,并由此衍生出多种相关技术,使其在遗传多样性、种质鉴定、遗传图谱构建、基因定位等研究中得到广泛的应用。本文即对AFLP的原理、衍生技术及其应用等进行了介绍。     

基于LC-MS技术研究氟氯苯氰菊酯对西方蜜蜂工蜂幼虫代谢的影响

【目的】氟氯苯氰菊酯（flumethrin）属于第二代拟除虫菊酯类杀虫、杀螨剂,应用于蜂群除螨。由于杀螨剂具有一定的毒性,在杀死螨虫的同时也会威胁到蜜蜂的健康。本研究采用液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）检测氟氯苯氰菊酯处理后的西方蜜蜂工蜂幼虫代谢物,筛选差异代谢物,并分析涉及到的代谢通路,研究氟氯苯氰菊酯对蜜蜂的毒理作用,为蜜蜂饲养提供参考。【方法】控制蜂王在空的工蜂巢脾上产卵12 h,并将产卵区域分为4组,从第5天开始分别给各组小幼虫饲喂含氟氯苯氰菊酯的糖水（0、0.5、5、50 mg·kg^-1）,剂量从第5天至第8天逐日递增（1.5、2、2.5、3 μL）,第9天采集幼虫的淋巴液。运用代谢组学中的LC-MS技术分析蜜蜂幼虫的代谢物,结合主成分分析（PCA）、偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）,筛选差异显著的代谢物,并对氟氯苯氰菊酯处理组和对照组间共同差异代谢物进行代谢通路分析。【结果】0.5 mg·kg^-1组与对照组相比,共有差异代谢物190种,共鉴定87种;5 mg·kg^-1组与对照组相比,共有差异代谢物275种,共鉴定97种;50 mg·kg^-1组与对照组相比,共有差异代谢物275种,共鉴定131种。从鉴定的差异代谢物中筛选到29种氟氯苯氰菊酯处理组共同差异代谢物,其中16种代谢物上调,12种代谢物下调,1种代谢物在0.5和50 mg·kg^-1组中下调,在5 mg·kg^-1组中上调。这些差异代谢物包括核糖、嘌呤及其衍生物、脂肪酸及其偶联物等。经代谢通路富集分析,发现差异显著（P＜0.05）的代谢通路包括氨基糖和核苷酸糖代谢、药物代谢-其他酶类、α-亚麻酸代谢等途径。【结论】LC-MS技术能够有效地分析氟氯苯氰菊酯影响下蜜蜂幼虫代谢物的变化,氟氯苯氰菊酯会引起蜜蜂幼虫体内尿苷二磷酸-N-乙酰葡糖胺、硫唑嘌呤、愈伤酸、9-羟基壬酸、氢过氧化亚油酸等物质含量异常,这些差异代谢物的变化证实了氟氯苯氰菊酯引起蜜蜂体内各种物质代谢紊乱,对这些代谢过程分析可进一步阐释蜜蜂代谢有毒化合物的机制,并为杀螨剂及其他有毒化合物对蜜蜂的胁迫提供理论依据。     

基于PCR技术对奶牛乳房炎主要致病菌的检测

该文针对引起奶牛乳房炎的4种主要致病菌（大肠杆菌、金黄葡萄球菌、无乳链球菌、肺炎克雷伯氏菌）建立了PCR检测技术,采集奶牛乳房炎病原菌样本并进行菌落的筛选和鉴定,从鉴定出的葡萄球菌、链球菌、大肠菌和假单胞菌中提取DNA,通过比对基因序列,筛选出具有高度保守性的基因片段作为PCR的引物,设计PCR反应体系,对提取的DNA进行扩增。之后进行琼脂糖凝胶电泳,检测PCR产物的大小和数量。对PCR产物进行序列分析和比对,进一步确认其种属。结果显示该PCR检测方法可以特异性检测出这4种病菌,并对送检的30份临床乳样检测中阳性检出率高于细菌分离检测,证明检测方法在实际应用中的可靠性和有效性。     

分子标记技术在植物学研究中的应用

分子标记与形态标记，细胞学标记和生化标记三类遗传标记技术相比，具有因直接以DNA的形式表现而在植物的任何生长阶段都可检测，遍布整个基因组，多态性高，检测手段简单迅速，无基因多效性，能够明确辨别等位基因，实验重复性好等优点。目前最常用的分子标记技术主要有限制性片段长度多态性技术（resriction fragment length polymor-phism，简称RFLP），随机扩增多态性DNA技术（random amplified polymorphic DNA,简称RAPD），微卫星DNA技术（Simple Sequence Repeat,简称SSR）,扩增片段长度多态性技术（Amplified Fragment Length Poymorphism，简称AFLP）等。分子标记技术在植物学研究中得到了广泛的应用，在植物分类学及遗传多样性，种质资源保护，遗传图谱的建立，基因定位与辅助选择育种，指纹图谱应用于作物品种鉴定等研究方面均取得较好的应用效果。这项技术的发展具有巨大的应用潜力和广阔的应用前景。     

嗜水气单胞菌的研究进展

简要回顾和总结了气单胞菌的分布、分类地位、分离鉴定和生长条件等方面的研究情况,并概述嗜水气单胞菌的外膜蛋白（OMP）、胞外分泌物（ECP）等致病因子、诊断技术及疫苗开发方面新的研究成果。     

蜜蜂患白垩病虫体内一株球囊菌拮抗细菌的分离与鉴定

【目的】寻找抑制蜜蜂球囊菌的拮抗菌,用于白垩病的生物防治。【方法】利用细菌纯化技术从患白垩病的蜜蜂幼虫体内分离纯化了一株对蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)有抑制作用的细菌,并结合形态学、革兰氏染色以及16S rDNA序列分析技术进行鉴定,同时通过蜜蜂体内、体外接种试验研究其对蜜蜂球囊菌的抑制作用。【结果】该细菌被初步鉴定为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus),它在培养基中能够完全抑制蜜蜂球囊菌的生长,但其发酵液对蜜蜂球囊菌的生长没有影响。将含菌饲料喂蜜蜂幼虫,蜜蜂幼虫的死亡率和生长发育没有受到影响,说明该细菌对蜜蜂幼虫没有致病性。蜜蜂幼虫体内同时接种细菌和球囊菌孢子,发现细菌对球囊菌在蜜蜂体内的萌发和初期菌丝的生长没有影响,蜜蜂依然能够患病,但生长后期该细菌能够降解球囊菌菌丝,对球囊菌子代孢子的产生表现出一定的抑制作用。【结论】 该研究结果为蜜蜂白垩病的生物防治提供了理论依据。     

毛细管电泳在蛋白质和核酸分析研究中的应用

综述了毛细管电泳（CE）在蛋白质肽图构建与鉴定。物化常数和结构分析。动力学研究。定性定量与微量缺陷徊的应用以及在核酸的纯度检测，片段置备及PCR产物分析，DNA测序与基因突变检测中的应用。     

枯草杆菌纳豆激酶基因的克隆与序列分析

用CTAB法从枯草杆菌（Natto)提取基因组DNA，聚合酶链式反应（PCR）扩增获得约1.3kp的DNA片段，在T4DNA连接酶作用下，将扩增片段连接到pUCm-T载体上，载化Ecoli DH5a感受态细菌。将初步鉴定的阳性细菌提取质粒DNA进行PCR鉴定和测序，序列分析结果证明获得了包含全部读码框的纳豆激酶基因。     

DNA条形码技术在真菌上的研究与应用

DNA条形码技术通过标准化的小片段DNA序列对物种进行快速鉴定分析,在动植物和微生物分类鉴定中得到广泛应用,而在真菌鉴定研究中相对滞后.综述了DNA条形码的起源、发展及其在真菌研究中的应用,并探讨分析了DNA条形码技术存在的问题以及未来的发展.