苏丹草RAPD反应条件的优化与应用

为研究不同因素对苏丹草随机扩增多态性DNA(RAPD)反应体系的影响,建立并优化反应体系;再利用优化体系绘制了DNA指纹图谱以区分两个高丹草品种。提取苏丹草的基因组DNA,分别设置Mg2 浓度为1.0mmol/L、1.5mmol/L、2.0mmol/L、2.5mmol/L、3.0mmol/L;退火温度为34℃、35℃、36℃、37℃、38℃;Taq酶含量为0.6U、0.8U、1.0U、1.2U、1.4U进行PCR扩增。结果表明:Mg2 2.0mmol/L,退火温度36度,Tap酶活性值1.2U是进行苏丹草RAPD分析的最优反应条件。利用最优反应条件绘制了皖草2号和皖草3号的DNA指纹图谱,在该图谱中有A、B两条特征带,可以区分皖草2号和皖草3号。     

山茱萸RAPD反应体系的正交优化研究

为了优化山茱萸RAPD反应条件,采用改良CTAB法提取山茱萸基因组DNA,并采用三因素三水平正交试验对RAPD反应体系中Mg2+、dNTP、引物浓度进行初步优化,在此基础上,对温度条件进一步优化。结果表明:在25μL的RAPD反应体系中各因素的最佳浓度分别为1.925mmol/L Mg2+、0.275mmol/L dNTPs、0.55μmol/L引物、DNA模板40ng和1UTaq DNA聚合酶;引物Tm为36.9℃时,最佳退火温度为35℃;引物Tm为41.0℃时,最佳退火温度为38℃。在最优反应条件下,对100种随机引物进行RAPD扩增,其中93种随机引物均扩增出条带,建立了可靠的反应体系和反应程序,为山茱萸的DNA指纹图谱鉴定建立了基础。     

杜仲RAPD反应体系的优化

以杜仲优良品种的幼叶为材料提取总DNA,采用单因素梯度试验筛选法进行了杜仲RAPD反应的优化.确定的优化反应体系为:25 μL反应体积中,10×buffer 2.5 μL,TAqDNA聚合酶1 U,随机引物(5 μmol/L)2.0 μL,MgCl2(25 mmol/L)2.0 μL,dNTP(2.5 mmol/L)2.0 μL,模板2 mg/L,补ddH2O至25 μL.扩增程序为:94 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s,37 ℃退火30 s,72 ℃延伸90 s,35个循环,72 ℃延伸10 min,4 ℃保持产物.在此条件下得到的RAPD图谱清晰、稳定,为进一步利用该技术开展杜仲有关分子生物学研究提供了技术参考.     

龙眼ISSR-PCR反应体系的优化及指纹图谱初探

以立冬本龙眼DNA为模板研究了龙眼ISSR-PCR反应体系的主要成分对ISSR扩增结果的影响,并探讨了构建龙眼指纹图谱的可行性。结果表明:在25μL的PCR反应体系中Mg2 的最适浓度为2.0 mmol.L-1;dNTP最适浓度为0.2 mmol.L-1;引物的最适浓度为0.7μmol.L-1;模板20 ng;Taq DNA聚合酶用量为1.5 U。利用优化后的反应体系对福建不同地区龙眼基因型进行了ISSR扩增,扩增产物在250 bp~2 kb;利用丰富的多态性DNA谱带构建了12个基因型龙眼的指纹图谱。     

晒烟RAPD反应体系的优化

以晒烟苗期幼叶为试材,通过设置不同的模版DNA、引物、dNTP、Mg2+及Taq DNA聚合酶的浓度梯度,优化RAPD的反应条件,建立1个适合晒烟的比较稳定的RAPD反应体系。结果表明,适合晒烟RAPD的反应体系是在25μL反应体系中,含模板40ng;引物UBC-388 1.5μL;Mg2+1.6mM;dNTP 0.2mM;Taq酶1U。     

樟树RAPD反应体系的优化

以樟树叶片提取的基因组DNA为材料,对影响其RAPD-PCR各种反应条件的因子进行研究。结果表明:PCR反应时,总反应液20μL中基因组DNA浓度为8 ng/μL,镁离子浓度为2.0 mmol/L,dNTP浓度为0.2 mmol/L,引物浓度为0.2μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1 U/(20μL)时,出现可辨认的鲜明谱带,为RAPD分析应用于樟树遗传多样性研究和良种选择打下良好的基础。     

苦楝RAPD反应体系的优化

以苦楝叶片提取的基因组DNA为材料,通过单因素多水平梯度试验,筛选DNA模板,Mg^2＋,Taq DNA聚合酶,dNTPs和随机引物的浓度及用量,建立苦楝RAPD技术分析体系.结果表明：当基因组DNA浓度为60 ng/μL,镁离子浓度为3.0 mmol/L,dNTP浓度为0.25 mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1 U/20μL,反应体系总体积20μL时,出现可辨认的清晰谱带.其扩增程序为：94℃预变性2 m in;然后38个循环（94℃变性30 s,37℃退火1 min,72℃延伸80 s）;最后72℃延伸8 min,4℃保存.     

草莓RAPD反应体系的优化

以草莓幼叶为试材,进行RAPD反应扩增体系的优化.对模板、dNTP、引物、MgCl2和Taq DNA聚合酶等条件进行优化.结果表明,在20 μL的反应体系中,以DNA模板用量25 ng,引物用量为0.15 μmol·L-1,dNTP用量为120μmol·L-1,Mg2+用量为2.5 mmol·L-1,Tap DNA聚合...     

文冠果DNA提取及RAPD反应体系的优化

以山西省20个县的文冠果为材料,采用改良的CTAB法提取文冠果基因组DNA,并对文冠果RAPD分析的最佳反应体系进行优化。结果表明,文冠果RAPD分析的最适反应体系为:PCR扩增的总体积为20μL,包括30ng的模板DNA,10×PCR buffer 2μL,2.0mmol.L-1 Mg2+,0.1mmol.L-1dNTP,Taq酶1U,不足的体积用超纯水补足。扩增程序为:94℃预变性120s,94℃变性30s,36.9℃退火45s,72℃延伸90s,45个循环后在72℃延伸300s,结束后在4℃条件下保存。在此最佳反应条件下,RAPD分析具有良好的稳定性和可重复性。     

油菜RAPD反应体系的优化研究

针对RAPD反应体系中Taq聚合酶，dNTP和引物这3个影响较大的因素，设计了一组3因素3水平试验，根据试验结果，筛选了油菜random amplified polymorphic DNA(RAPD)反应体系中3因素的最佳浓度配比，即Taq 1.6U,dNTP 0.2mmol/L，引物0．3umol/L。     

番茄RAPD反应体系的优化

以醋栗番茄为材料,对影响番茄RAPD分析的主要因素进行系统的优化研究。试验结果表明,20μL反应体系中,最佳的组成是:10×buffer缓冲液2μL,1.5mmol.L-1MgCl2,0.15mmol.L-1dNTPs,15ng.μL-1引物,1U的TaqDNA聚合酶以及15ng的模板DNA。     

甘薯叶RAPD反应条件的优化

以甘薯叶为试材，系统分析了MgCl2浓度，dNTP浓度，随机引物用量，模板DNA用量，TaqDNA聚合酶浓度对RAPD反应的影响，建立了一套稳定的RAPD反应体系，该体系反应体积为25μl；含2.5μlPCRBuffer,MgCl2浓度为3nmol/μl/dNTP浓度为0.4nmol/μl，随机引物用量为40ng，模板DNA用量为40ng,TaqDNA聚合酶浓度为0.25U。     

大字杜鹃RAPD反应体系的优化

以大字杜鹃为材料,以改进的CTAB法提取大字杜鹃叶片总DNA,分别就模板DNA浓度,引物浓度,DNTP浓度,TaqDNA聚合酶量及镁离子浓度对大字杜鹃RAPD反应结果的影响进行研究．通过对各因子的组合比较,建立了大字杜鹃RAPD反应的优化体系,即总反应体积为25pL,其中包括10×Taq酶配套缓冲液2．5pL,模板DNA浓度50mg／L,引物浓度0．5μmol／L,dNTP浓度0．15mmol／L,TaqDNA聚合酶1U,Mg^2＋浓度2．0mmol／L,其余用重蒸馏水补足．扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,38℃退火40S,72℃延伸2min,共41个循环,72℃延伸7min．     

西蓝薹RAPD-PCR反应体系的建立与优化

以新型蔬菜西蓝薹为研究对象,采用改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取基因组DNA,并通过单因素多水平梯度试验,筛选了Taq酶、引物、DNA模板、Mg2+、dNTPs的浓度或用量,建立了西蓝薹RAPD-PCR的最佳反应体系:25 μL反应体系中含0.8 U Taq酶、0.40 μmol/L引物、30 ng DNA模板、1.6 mmol/L Mg2+、0.25 mmol/L dNTPs、2.5 μL 10×PCR buffer.利用优化的反应体系,对5个西蓝薹品种进行体系稳定性检测,结果表明该反应体系的重复性和稳定性良好.     

苹果RAPD反应体系的研究

对苹果基因组 DNA的 RAPD扩增体系各参数进行筛选比较 ,建立的最佳反应体系为 :模板 DNA 1 .0 mg/L ,引物 1 .5mg/L ,Taq DNA聚合酶 0 .1 mol/(L· min) ,Mg2 +2 .5mmol/L,d NTPs0 .4mmol/L。     

大百合RAPD体系的建立与优化

以大百合DNA为模板,采用正交试验设计,对影响大百合RAPD-PCR扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立大百合RAPD反应的优化体系。结果表明最优大百合RAPD-PCR的反应体系(20μl):Mg2 (2.0 mmol/L)1.0μl、dNTPs(0.2 mmol/L)1.0μl、primer(0.6 umol/L)1.3μl、DNA(30 ng/μl)1.0μl、Taq酶1U、10×buffer2μl;扩增程序为:在94℃下预变性5 min,然后进行35个循环(94℃变性30s、37℃退火50s、72℃延伸1 min),最后在72℃延伸10 min,在电压为50 V下电泳1 h。     

七彩鲑RAPD反应体系的构建及优化

以七彩鲑尾鳍为试验材料,对影响七彩鲑随机扩增多态性DNA(RAPD)扩增体系的重要参数进行了优化,建立了七彩鲑RAPD的最适反应体系.七彩鲑RAPD的最佳反应体系为:反应体系25μL,模板DNA的质量浓度4 ng/μL,Mg2+浓度2.0 mmol/L,dNTP浓度0.5mmol/L,引物浓度0.5μmol/L,Taq...     

葡萄基因组DNA的提取及RAPD条件优化

采用改良CTAB法提取葡萄属22种植物的基因组DNA,对其完整性进行了测定,通过单因素五水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了葡萄RAPD技术最优体系,即25 μL体积中模板DNA为40 ng·μL-1,MgCl２ 2.0 mmol·L-1,dNTP 0.8 mmol·L-1,Taq DNA 聚合酶1 U·μL-1,引物 0.8 μmol·L-1,建立了葡萄基因组DNA的RAPD 反应扩增程序,即94℃预变性4 min, 94℃循环变性 45 s,37℃退火 55 s,72℃ 延伸 80 s,40个循环,最后72℃ 延伸10 min。