RHD灭活疫苗对RHDV流行毒株的保护效果研究

为检验兔病毒性出血症(RHD)灭活疫苗对兔病毒性出血症病毒(RHDV)流行毒株的免疫保护效果,试验将RHD灭活疫苗以1头份剂量免疫健康易感家兔,免疫后14天采用血凝抑制试验(HI)方法测定其抗体效价,并用2010—2013年从我国不同地区分离的6株RHDV流行毒株进行攻毒试验。结果表明:试验兔免疫接种RHD灭活疫苗14天RHDV抗体效价可达到7.25 lb以上,此抗体水平可以分别抵抗6株不同RHDV流行毒株的攻击,攻毒保护率均达100%。说明现行RHD灭活疫苗具有良好的免疫原性,可以抵抗不同地区分离的RHDV流行毒株的攻击。     

一株兔瘟病毒野毒株的分离与鉴定

为了对南部县某兔场疑似兔出血症病毒(RHDV)NB毒株进行鉴定,试验采用血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验、家兔接种试验、家兔免疫攻毒试验、VP60基因的同源性比对。结果显示:NB毒株能凝集人"O"型红细胞,HA效价为12 log2,其血凝性能被RHDV疫苗毒株AV33株的抗血清抑制;NB毒株注射健康非免家兔,家兔在48h内死亡,具有典型的兔病毒性出血症(RHD)的临床症状和病理变化;RHDV(AV33)组织灭活疫苗免疫家兔后,家兔能抵抗NB毒株的攻击;NB毒株与AV33毒株的VP60基因同源性为96.12%,氨基酸序列同源性为97.59%。     

兔病毒性出血症病毒“LQ”株的分离鉴定

对成都龙泉某兔场疑似兔病毒性出血症(RHD)发病兔的病料进行细菌学检查以及血凝性、特异性鉴定,并进一步进行致病性鉴定。结果表明:RHDV LQ株对人"O"型红细胞具有高度血凝性,血凝效价达10×212;RHDV抗血清可特异性抑制RHDV LQ株对人"O"型红细胞的凝集;RHDV LQ株对家兔的LD50为10-6.87/mL,是一株对家兔具有高致病力的强毒株。     

一株兔病毒性出血症病毒的分离鉴定

从山东东营某兔场送检的疑似兔病毒性出血症(Rabbit Hemorrhagic Disease,RHD)病料中分离到1株病毒(DY株)。通过血凝性及RT-PCR鉴定,以及毒力和免疫原性测定。结果显示:分离株DY株为兔出血症病毒(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus,RHDV),对人O型红细胞具有高度凝集性,血凝效价为12log2,RHDV抗血清可特异性抑制这种凝集作用;RT-PCR扩增出RHDV VP60的201 bp基因片段;RHDV DY株对家兔的LD50为10-6.5/m L,是一株对家兔具有高致病力的强毒株。取第5代RHDV DY株制备灭活疫苗免疫试验兔,免疫后第14d攻毒,对RHDV的保护率达100%。     

四川兔病毒性出血症2型的分子生物学诊断

兔病毒性出血症2型(RHD2)是由兔出血症病毒2型(RHDV2)引起的家兔和野兔的高度传染性、急性致死性疫病。RHDV2目前主要在欧洲流行,引起的临床症状与经典兔病毒性出血症(RHD)相似,但毒株特性差异较大。2020年4月四川省两个兔场的家兔同时出现了疑似RHD症状,但用经典RHDV疫苗免疫后家兔发病及死亡情况均无好转。分别采集两个兔场的病死兔组织样品进行实验室诊断,使用OIE推荐的RHDV2特异性引物进行RT-PCR检测,两个发病兔场的兔组织混合样品均扩增出大小约800bp的片段。进一步的测序和Blast比对分析发现来自两个发病兔场的2条序列均与RHDV2参考毒株的VP60部分序列高度同源,其中同源性最高的是荷兰RHDV2分离株RHDV2-NL2016,分别为98.01%和97.95%。分析结果表明,报告发病的两兔场的病死兔均为RHDV2感染,这是我国首次官方确诊RHD2疫情。分别将两个兔场组织病料中的RHDV2毒株命名为SCADC-JT01和SCADC-JT02,有关这2株新毒株的毒株特性和基因组特征还有待进一步研究。     

兔病毒性出血症病毒DY株的分离鉴定

对山东省东营某兔场送检的疑似兔病毒性出血症病料进行细菌学检验、血凝性及特异性鉴定,并进一步进行毒力鉴定和免疫原性测定。结果显示:RHDV DY株对人"O"型红细胞具有高度血凝性,血凝效价为1:4 096,RHDV抗血清可特异性抑制RHDV DY株对人"O"型红细胞的凝集,RHDV DY株对家兔的LD50为10~(-6.5)/m L,是一株对家兔具有高致病力的强毒株。取第5代RHDV DY株制备灭活苗,用1.0m L免疫试验兔,免疫后第14天攻毒,对RHDV的保护率达100%。     

一株兔出血症病毒变异毒株的分离与鉴定

2021年3月份河南省某养兔场肉兔疑似感染兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV),为了分离鉴定肉兔感染毒株,并对所分离毒株特性进行研究,试验对兔场送检的病死兔进行解剖、细菌与病毒分离、RT-PCR检测、纯净性检测、血凝性测定,并进一步进行半数致死量(LD₅₀)、传统疫苗免疫兔攻毒保护试验和免疫原性测定。结果表明：病死兔剖检可见肝脏、心脏、肺脏等实质内脏器官广泛出血。病料未分离到细菌,RT-PCR检测鉴定感染病毒为RHDV;用分离株注射非免疫健康家兔后,兔48 h内死亡,症状表现和剖检病变与兔出血症相似;将所分离RHDV命名为HN株,其对人“O”型红细胞无血凝性,对兔的LD₅₀为1×10^-6.77/mL;灭活后免疫兔,能抵抗RHDV HN株攻击。说明养兔场肉兔感染了RHDV,且成功分离鉴定得到一株变异型RHDV,其具有良好的免疫原性。     

兔出血症病毒和兔细小病毒血清学关系的比较研究

为了检测兔出血症病毒和兔细小病毒的血清学关系,我们采用日本兔细小病毒(LPV)兔源抗血清和豚鼠源抗血清,分别与我国不同地区分离的8株兔出血症病毒(RHDV)抗原作常规血凝抑制试验(HIT)和间接血凝试验(IHA),结果兔细小病     

一株幼兔出血症病毒的分离鉴定

从临床兔病料中分离鉴定出1株兔出血症病毒,HA试验测得该毒株血凝价为1：640,琼脂扩散试验可见分离株与RHDV高免血清形成清晰的沉淀线,电镜观察可见30nm左右的病毒粒子。     

兔病毒性出血症诊断方法研究概况

兔病毒性出血症(RHD)是由兔病毒性出血症病毒(RHDV)引起的一种急性、高度致死性传染病,对易感兔致病率可达90%,致死率可达100%。本文对兔病毒性出血症的病原学、流行特点、检测方法等进行了综述,以期为其诊断和防治提供参考。     

一株兔病毒性出血症病毒野毒WF株的分离与鉴定

对山东省潍坊某兔场送检的疑似兔病毒性出血症病料进行细菌学检验、血凝性、特异性鉴定,并进一步进行毒力鉴定和免疫原性测定。结果显示:RHDV WF株对人"O"型红细胞具有高度血凝性,血凝效价为1∶2048,RHDV抗血清可特异性抑制RHDV WF株对人"O"型红细胞的凝集,RHDV WF株对家兔的LD50为10-6.5/m L,是一株对家兔具有高致病力的强毒株。取第5代RHDV WF株制备灭活苗,用1.0mL免疫试验兔,免疫后第14天攻毒,对RHDV的保护率达100%。     

兔病毒性出血症研究概况及前景

兔病毒性出血症(RHD)是由兔病毒性出血症病毒(RHDV)引起的一种急性、高度致死性传染病,对易感兔致病率可达90%,病死率高达100%。本文对兔病毒性出血症病毒的形态及理化特性、体外培养、分子生物学、病毒的检测和疫苗等方面做了系统深入综述,并提出了存在的问题及展望。     

兔出血症病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及对家兔的免疫保护效果

用RT—PCR方法扩增兔出血症病毒（RHDV）衣壳蛋白VP60基因,通过克隆、转化得到重组穿梭载体Bacmid—VP60,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV—Bac—VP60,经RT—PCR、IFA、SDS-PAGE、Western blotting、HA和HI鉴定,结果显示重组VP60蛋白在Sf9昆虫细胞中得到表达。在不加任何佐剂的情况下,用表达的蛋白免疫3月龄非RHD免疫兔,结果显示,免疫后21天,兔体内可产生抗RHDV抗体,抗体血凝抑制效价为2^6～2^7,该抗体可以抵抗血凝效价为2^10致死剂量RHDV强毒的攻击,本研究为兔病毒性出血症基因工程疫苗的研制奠定了基础。     

应用纸片沾血检测兔病毒性出血症病毒HI抗体

兔病毒性出血症(兔瘟)是近年发现的一种病毒性传染病,对本病的诊断,目前多采用临床综合判定,血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验。为了摸索较简便的方法,我们采用纸片沾血来检测HI抗体。     

兔病毒性出血症病毒保藏及其对疫苗效果的研究

将不同地区收集到的8株兔病毒性出血症典型病料，放在－30℃低温冰箱中分别保藏5年和10年，保藏期满后取样检测血凝效价，并用保藏5年的RHDV病料和2001年活化增殖的新鲜病料分别制成病毒疫苗。试验结果表明RHDV以病料形式（主要是肝、肺等脏器）保藏，在－30℃低温冰箱中，经5年后，病毒血凝效价稳定不变，保藏10年后总下降率为25％，但病毒效价仍大于2560，可用于疫苗生产，说明该商毒在上述条件下保藏5－10年病毒是比较稳定的，不同保藏年限的病料批量生产疫苗，安全性和免疫保护率均达到100％。     

兔病毒性出血症病毒西藏分离株毒力的测定

对一株兔病毒性出血症病毒(RHDV)西藏株进行血凝性、特异性、致病性及毒力鉴定。结果表明:此株RHDV血凝价高达10240以上;RHDV抗血清可特异性抑制该株病毒对人“O”型红细胞的凝集;RHDV的最小致死量为10-5/mL。说明此分离株是一株具有高致病力的RHDV强毒株。     

我国兔病毒性出血症病毒发病概况及检测技术

兔病毒性出血症在我国首先暴发的一类兔病毒性传染病,是目前危害我国养兔业的主要传染病之一,每年都给我国养兔业造成了巨大的经济损失。尤其近年来RHDV发生较大遗传变异,陆续发现无血凝性的变异株,给RHD的综合防控增加了难度。笔者查阅相关文献资料并结合自身多年临床工作经验,将我国RHDV的发病概况以及病毒常用检测技术进行全面综述,以期为我国RHD综合防控措施的制定提供参考依据。     

兔出血症病毒ZB株的分离与鉴定

为确定发病兔场兔的死亡病因并对其病原进行鉴定分析,经临床诊断、病理剖检、病毒分离、纯净性检测、血凝性检测、致病性试验、特异性试验、免疫原性试验以及qPCR和测序鉴定,用病死兔病料组织接种健康易感家兔,成功分离到1株兔出血症病毒。分离株病毒不含细菌、霉菌、支原体;对人"O"型红细泡的血凝效价为1∶1024;分离株病毒能够使健康易感兔在96h内全部死亡兔病毒性出血症;兔出血症病毒阳性血清对分离株病毒具有中和作用;用分离株病毒制备的灭活疫苗具有良好的免疫原性;分离株病毒通过qPCR测序鉴定为RHDV毒株。     

兔病毒性出血症检测方法的研究进展

兔病毒性出血症(RHD)又称出血性败血症,俗称兔瘟,是由兔病毒性出血症病毒(RHDV)引起的一种发病急、死亡率高的传染病。为了更好地加强病毒的检测与防控,需要更精确、方便的检测方法以满足科研和基层的不同需要,文章对近年来RHDV检测方法的研究进展进行了综述,主要包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光定量PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)和胶体金免疫层析(GICA)等,以期为RHDV的防控及诊断提供参考。     

兔出血症三种快速诊断法比较研究

本试验对快速诊断兔出血症(RHD)的免疫酶染色法(IES),斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)与间接荧光染色法(IFS)进行了比较。试验表明,三种快速诊断法对17份实验感染兔肝材料的检测结果与血凝试验(HA)的阳性符合率分别为88.2％、88.2％及93.3％,阴性符合率均为100％;对4份脏器材料检测结果证明,兔出血症病毒(RHDV)含量依次为;肝>脾>肾>肺>心肌。肝触片及快诊膜分别在4℃和室温放置1个月后,其检测结果不受影响。三种快速诊断对RHDV的检测具有很高的特异性、敏感性和稳定性。Dot-ELISA具有经济、简便、快速、敏感、准确的优点。