一种简单有效的提取外周血白细胞总RNA的方法

[目的]介绍了一种提取动物外周血白细胞总RNA的方法。[方法]对从健康奶牛和患病奶牛中分离的外周血白细胞,采用RNAlater样品储存液进行保存。采用RNAultra总RNA提取试剂盒提取白细胞总RNA,检测其浓度和纯度,并通过RT-PCR进一步检测其质量。[结果]提取总RNA中28 S和18 SRNA条带清晰,比例适当,OD260/OD280为1.8～2.0。以提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的牛G3PDH基因序列,未见非特异性产物。采用该方法提取的总RNA质量好、纯度高,能满足cDNA文库构建、分子克隆和基因表达等研究的需要。[结论]该方法具有简单有效、实用性强和重复性好的特点,值得广泛应用。     

改良TRIZOL法提取高质量稻曲病菌总RNA的方法

首次采用改良TRIZOL法,成功地从稻曲病菌中提取了总RNA,其总RNA具有完整性好、纯度高和产量高的特点,能进一步满足RT-PCR等分子生物学试验的需要。此外,该方法也适用于其他富含多糖、蛋白、酚类等物质的总RNA的提取。     

一种少量提取植物组织DNA的快速方法

为了从植物组织中快速提取核酸,从多种DNA提取方法中遴选出2种基本方法。通过优化基本方法的操作步骤、试剂用量与作用时间,建立了一种改良的DNA快速提取方法。在此方法中,用氯仿代替液氮或提取液进行植物组织研磨,之后加入提取液抽提DNA,并用氯仿-异戊醇反复抽提,可显著降低蛋白质含量;通过应用RNA酶可获得纯度较高的DNA。该方法的特点是在室温下即可进行简便操作,快速(提取核酸的过程仅需30min),污染器皿少,实用性强,提取物产量高,纯度好。     

丹尼斯凤梨叶片总RNA提取方法的比较

以丹尼斯凤梨(Guzmania‘Denise’)叶片为材料,利用Trizol试剂快速提取法、异硫氰酸胍法、苯酚法和CTAB法提取丹尼斯凤梨总RNA,通过RNA的产率、纯度、电泳图等分析来确立适用于丹尼斯凤梨总RNA分离的方法。结果表明,Trizol法提取的RNA具有28SrRNA、18SrRNA和5SrRNA3条较清晰的条带,很少有降解,具有较高的纯度,其他3种方法获得的RNA纯度较低、降解严重,有较多小分子和盐存在,RNA无明显条带出现,而是以小分子RNA弥散状分布。     

一种改良的提取草莓属叶片总RNA的方法

探索一种新的适合草莓属（Fragaria spp．）组培苗、大田苗叶片总RNA的快速高效提取方法。试验以草莓叶片为材料,用改进的CTAB法对其RNA进行提取,并对提取的RNA进行了电泳检测、含量测定和RT-PCR检测。结果表明：用该RNA提取方法提取的RNA具有28S rRNA、18S rRNA和5.8S rRNA3条清晰的条带,且无降解。OD260/OD280在1.83至2.14之间,具有较高的纯度,且含量较高。用该RNA提取方法提取的RNA逆转录成cDNA,经PCR扩增出现清晰的条带,说明该RNA提取方法提取的RNA可以满足进一步分子生物学试验的要求。     

趋磁细菌RNA提取方法的比较研究

[目的]筛选磁螺菌(Magnetospirillum gryphiswaldense)MSR-1的总RNA提取方法。[方法]通过比较实验室法和试剂盒法提取RNA的效果,选择适合趋磁细菌RNA提取的方法。用琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度仪检测趋磁细菌RNA的纯度、浓度及质量。[结果]RNAiso Plus试剂盒利用其特殊成分能选择性的与RNA结合,使蛋白等杂质不能与之结合,能更有效地清除DNA及蛋白质污染,提取的RNA纯度、质量较高。[结论]该研究成功的得到一种快速、高质量提取趋磁细菌RNA的方法。在提取中发现产磁小体菌株的RNA较不产磁小体菌株的量少,推测磁小体对核酸具有吸附性,为今后利用磁性吸附对生物的核酸提取方面提供依据。     

核果类果树总RNA的快速提取方法

以核果类果树(桃、李、杏、扁桃)的叶片和皮层为材料,用两种经过改进的提取方法对其总RNA进行提取,结果均可得到纯度高、完整性好的总RNA,其中以一步法具有更加简单、快速、经济的特点.     

一种快速的植物DNA制备方法

介绍一种DNA提取方法，该方法具有快速，简便，高效的优点，可在60 min内提取出纯净无RNA的DNA，获得的DNA纯度高，DNA质量可满足酶切及PCR等分子生物学实验要求。     

核桃子叶RNA提取方法的研究

针对核桃子叶富含酚类、色素、多糖、油脂等物质的特点,以常用的Trizol法、异硫氰酸胍法、SDS法和改良的CTAB法4种方法提取核桃子叶总RNA,通过RNA产率、纯度、电泳图谱来确定适于核桃子叶RNA提取的方法。结果表明：Trizol法和SDS法所提取的RNA纯度较低;异硫氰酸胍法所提取的RNA降解严重,RNA以小分子...     

松辽黑猪脏器总RNA提取方法的改进及应用

[目的]改进松辽黑猪脏器总RNA的高效快速提取方法,为检测脏器组织RNA提供基础。[方法]采用液氮研磨,利用Trizol使细胞膜破裂,并通过氯仿、异丙醇、无水乙醇处理,使RNA与杂质分离,得到高质量的RNA。[结果]得到的松辽黑猪脏器总RNA浓度和纯度都比较高,并且未被降解。[结论]该方法提取的RNA质量没有DNA污染、纯度高、没有降解、完整性好,稳定可靠,并且用时少。     

桑黄总RNA提取方法研究

为探索适合桑黄总RNA的提取方法,以桑黄菌丝体为试验材料,比较了用Trizol法、CTAB法和RNA prep pure Plant Kit试剂盒法提取后总RNA的质量。结果表明,3种方法均能从桑黄菌丝体中提取分离到总RNA,其中 Trizol 法能提取到纯度较高、完整性较好的总RNA,28S及18S带型清晰无弥散,A260/A280值为196,RNA 产率为60464 μg·g-1,提取的总 RNA 适用于基因克隆与基因表达分析等分子生物学试验研究。     

棉花总RNA的快速提取方法

介绍了一种适合于棉花各种组织的RNA提取方法。它具有简便、快速等特点，且所提取的RNA样品质量较高，可直接用于cDNA合成、RNA dut blot等分子生物学操作。     

改良热酚法快速提取棉花不同组织RNA

[目的]以改良热酚法快速提取棉花不同组织的RNA。[方法]以陆地棉(Gossypium hirsutum L.)新陆早26为材料,在冷酚法的基础上对RNA的提取方法进行改进。[结果]利用改良热酚法获得的RNA不仅完整性极好、浓度高且无多糖多酚污染,可用于cDNA末端快速扩增(RACE)、Northern Bloting、基因芯片分析及转录组分析等研究。[结论]该方法不但适用于提取棉花叶片总RNA,而且在根、花冠、花药、发育的纤维中均能获得高质量的RNA,同时节约成本,操作简便,对环境污染小。     

3种芹菜茎组织总RNA提取方法的比较研究

[目的]为了获得质量较好的芹菜茎的总RNA,为后续分子生物学试验提供基础。[方法]试验对1种RNA提取方法(Trizol法)和2种RNA提取试剂盒(RNA prep Pure Plant Kit法、RNA simple Total RNA Kit法)方法进行比较研究。[结果]RNA prepPure Plant Kit方法得率低,且OD260/OD280值低于1.8,Trizol法OD260/OD230高于2.0,且得率低于RNA simple Total RNA kit法。只有RNA simple Total RNA kit法提取的RNA质量最好,得率最高。[结论]与Trizol法和RNA prep Pure Plant Kit法相比,RNA simple Total RNA Kit法提取的芹菜茎总RNA得率高,完整性好,凝胶电泳泳道无杂质,可以满足半定量RT-PCR的试验需要。     

海岸植物许树和单叶蔓荆提取total RNA的简便方法

[目的]介绍海岸植物叶片组织total RNA提取的一种简单、便捷方法。[方法]取800~1 000 mg许树和单叶蔓荆的鲜叶,加液氮研磨后制成提取液,提取液加试剂4℃下离心,冰浴后室温下离心,依次添加试剂后室温下离心,即得total RNA样品。[结果]分光光度计测试提取的total RNA的A260/A230大于2.10,A260/A280在1.93左右;RNA溶液中RNA浓度约为4.0μg/μl。该方法用了较少试剂种类;每根柱只需洗4次便可获得较好质量的total RNA;一次研磨800~1000 mg材料可提取约700μg total RNA;电泳检查表明提取的totalRNA符合分子生物学研究要求,可直接用于各种分子生物学试验。[结论]该方法是一种以较少试剂、较小费用、短时间内提取较高质量与产量的海岸植物叶片组织total RNA的简单、便捷方法。     

阿魏侧耳菌丝体RNA提取方法的比较与研究

采用一步法、异硫氰酸胍—巯基乙醇联合变性法和STE法3种方法,分别对阿魏侧耳总RNA的提取效果进行比较。结果表明,一步法难以提取RNA,异硫氰酸胍—巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在蛋白污染,这2种方法不适于富含多糖的阿魏侧耳总RNA的提取;STE法提取阿魏侧耳总RNA质量高、完整性好、成功率高,经琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28S,18S,5S三条带,且28S的亮度是18S的2倍左右,OD260/OD280比值为18～20,可作为阿魏侧耳总RNA提取的首选方法。用此方法来提取阿魏侧耳液体发酵不同时期的RNA,可以满足进一步分子生物学研究的要求。     

木薯块根总RNA提取方法的比较和改进

[目的]为更好地利用基因操作手段改良木薯品质和提取高质量的木薯总RNA提供科学依据。[方法]采用4种方法提取木薯块根RNA,筛选一种最简单、有效的方法,并利用RT-PCR技术克隆木薯淀粉分支酶,分析所提取RNA的质量。[结果]结果表明,用改进的CTAB法和plant RNAReagent kit均能提取高质量的RNA,用plant RNAReagent更能节省时间,而且纯度比较高。对plant RNAReagent提取的RNA进行RT-PCR克隆,克隆出了与木薯淀粉合成有关的SBEII基因。[结论]plant RNAReagent kit提取的RNA,其质量可以满足基本的试验要求。     

花生子叶RNA提取方法比较与分析

以HY22组培苗为材料,比较改良胍酸酚抽提法、改良CTAB法及离心柱式试剂盒法提取RNA的效果,以筛选出适合花生子叶RNA提取的方法。结果表明：试剂盒法由于样品在通过离心柱时会出现阻塞现象,易使RNA提取结果受到较大影响,而改进后的胍酸酚抽提法与改良CTAB法则能避免该情况且更节约成本;经紫外分光光度法与电泳检测,改进后的两种方法的RNA提取效果均较好;RT—PCR结果表明,提取的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。     

不同方法提取狗脊蕨叶片总RNA的比较分析

[目的]为构建狗脊蕨叶cDNA文库,保存珍贵基因资源,克隆和研究与有效成分合成相关的基因等提供技术参考。[方法]以狗脊蕨叶片为材料,采用CTAB法、一步法、酚-SDS法和RNA试剂盒提取分离法提取总RNA,通过比较分析确定最优方法。[结果]这4种方法都能提取出182、8 S的RNA,但CTAB法和试剂盒提取分离法的总RNA质量较高,CTAB法还提取出清晰的5S RNA。一步法和SDS法带型模糊,有降解现象。CTAB法提取的狗脊蕨叶片总RNA质量较好,28S1、8S和5S条带清晰,且无明显降解。CTAB提取法OD260/OD280的值在1.93~2.06,试验中其OD260/OD280值为2.012,接近2.0,纯度较高。一步法和SDS法OD260/OD280>2.0,试剂盒法OD260/OD280<2.0。[结论]CTAB法适合提取的狗脊蕨叶片总RNA,质量较好,可用于cDNA合成、文库构建等后续分子生物学试验。