甘蓝花叶病病毒种类鉴定及BrYV遗传变异分析

为了明确引起甘蓝花叶病的病毒种类,利用小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）高通量测序技术,并结合分子生物学方法查找甘蓝样品中的病毒序列,发现存在芜菁花叶病毒（turnip mosaic virus,TuMV）、黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus,CMV）、蚕豆萎蔫病毒2（broad bean wilt virus2,BBWV2）、烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）和芸薹黄化病毒（brassica yellows virus,BrYV）等5种病毒。采用RT-PCR技术进行验证,结果显示样品检测到BrYV、TuMV和CMV共3种病毒。对获得的BrYV外壳蛋白基因（coat protein,cp）进行测序和系统进化分析,获得1条576 bp的BrYV cp基因全长序列,与GenBank中BrYV分离物cp基因核苷酸序列同源率为88.0%~96.4%,氨基酸序列同源率为90.1%~95.8%。基于cp基因序列构建系统发育树,BrYV-GL为BrYV-C基因型,与中国内蒙古油菜BrYV（GenBank登录号EF079907）分离物cp基因序列聚集在一起,亲缘关系较近。BrYV cp基因共检测到4个潜在重组事件,可为后续甘蓝花叶病的研究和防治提供参考。     

湖南省烟草病毒种类的初步鉴定

1990年和1991年从湖南省8个地区(市)、25县(市)烟区调查采样,发现湖南烟草病毒病田间症状表现有7种类型,以花叶症状最多.通过鉴别寄主反映和A 蛋白酶联检测,初步确定湖南烟草上存在CMV,TMV,PVY 和TRSV 4种病毒的感染.它们除单独侵染外,还有TMV+CMV,TMV+PVY2种复合侵染类型,其中以CMV 侵染频率最高,达53.08%.应用A 蛋白酶联法检测314个花叶病样本,结果表明湖南烟草花叶病主要由CMV,TMV 侵染所致,其中又以CMV 侵染频率最高,达67.84%.     

昆明烤烟种植区根结线虫种类的初步鉴定

【目的】随着昆明烤烟主要栽培品种的变化,田间为害烟草的根结线虫种类亦可随之变化,为了掌握当前昆明烤烟种植区为害烤烟的根结线虫种类,对昆明烤烟种植区根结线虫种类进行了初步鉴定,以期为该区域烟草根结线虫病的防治提供理论依据。【方法】采用雌成虫会阴花纹形态特征及分子检测(SCAR特异性鉴定)方法对采自昆明烟草主产区的7县(石林县、寻甸县、禄劝县、宜良县、晋宁县、嵩明县、富民县)1市(安宁市)的26个烟草根结线虫寄主样本进行种类鉴定。【结果】有14个样本为花生根结线虫M.arenaria,5个样本为爪哇根结线虫M.javanica,4个样本为南方结线虫M.incognita,3个样本为花生根结线虫M.arenaria和爪哇根结线虫M.javanica的复合种群。【结论】本研究对为害昆明烟区根结线虫种类进行了初步鉴定。     

茄子花叶病病原病毒鉴定

茄子花叶病是近年来山东分布较广的一种病害。发病植株表现斑驳、花叶、严重株叶片卷曲、矮化和畸形。从发病植株上分离到一病毒分离物(Smv—1)。可以通过汁液摩擦接种传播和由蚜虫非持久性传播。人工摩擦接种可侵染8科中的21种植物。系统侵染普通烟、心叶烟、黄瓜和番茄。局部侵染苋色藜、昆诺阿藜。此病毒的钝化温度为55～60℃10分钟,稀释限点为10~(-(?)～10~(-4)。体外存活期为5天(22C)。用差速离心法可以提纯该病毒,部分提纯的病毒最大紫外吸收峰为259nm,最小吸收峰为239nm,表现为典型的核蛋白吸收。A260/A280=1.68。SDS—不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳解离病毒得到外壳蛋白亚基为一条多肽链,分子量约为25000道尔顿。琼脂免疫双扩散试验表明,Smv—1与黄瓜花叶病毒抗血清有阳性反应。用1.5%醋酸双氧铀负染。电镜观察部分提纯病毒粒子为球形(正二十面体)、直径为28～30nm。根据上述特征,Smv—1是黄瓜花叶病毒的一个株系。     

芫荽花叶病病原病毒鉴定

 从芫荽(Coriandrum Sativum L.)花叶病株上分离到一病毒分离物(CMV-Co),汁液摩擦接种和桃蚜(Myzus Persicea)均能传毒。人工摩擦接种可侵染5科21种植物,在黄瓜、心叶烟等植物上引起系统花叶;在苋色藜、昆诺阿藜、豇豆等接种叶片上引起局部枯斑。此病毒的钝化温度为55～60℃,稀释限点为10^-3～10^-4,体外存活期2～3天。部分提纯的病毒最大紫外吸收为258nm,最小吸收为238nm,表现为典型的核蛋白吸收,A260/A280=1.26.SDS-不连续梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳解离病毒其外壳蛋白亚基为一条多肽链,分子量约为25500道尔顿。琼脂免疫双扩散试验表明,CMV-Co与黄瓜花叶病毒有明显的血清学反应:用1.5%醋酸双氧铀负染,电镜观察病毒粒子球形(正二十面体),直径为28～30nm.根据上述特征,CMV-Co是黄瓜花叶病毒的一个株系。     

广西西瓜花叶病病原病毒鉴定

从广西各西瓜主产区采集到表现花叶症状的样品124份,经ELISA测定,所采样品均与西瓜花叶病毒二号(WMV-2)抗血清呈阳性反应,与黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草花叶病毒(TMV)抗血清呈阴性反应.取典型样本摩擦接种西瓜、西葫芦、南瓜、黄瓜、毛节瓜、瓠瓜、罗汉果等葫芦科植物表现花叶症状;接种苋色藜产生局部坏死斑;接种番木瓜、普通烟、心叶烟、番茄、辣椒、豇豆等无任何症状反应.该病毒还可通过棉蚜和嫁接传染.病毒初提纯液经电子显微镜观察,发现许多大小为12nm×(600～800)nm的线状病毒.ELISA测定结果显示,该病毒与莴苣花叶病毒(LMV)、大豆花叶病毒(SMV)抗血清呈阳性反应,它们之间有密切的血清学关系.据此,广西西瓜花叶病的病原病毒应为西瓜花叶病毒二号(WMV-2).     

广州郊区辣椒花叶病病原病毒鉴定

根据病毒粒子形态、血清反应、内含体形态、媒介昆虫种类、物理性质、寄主范围和症状特点,广州郊区辣椒花叶病的病原病毒可以鉴定为黄瓜花叶病毒的辣椒轻花叶型株系(CMV—PMMS),辣椒脉斑驳病毒(马铃薯Y病毒组的一个成员)的辣椒绿脉带型株系(PVMV—PGVBS)和烟草花叶病毒的辣椒黄色花叶型株系(TMV—PYMS)和辣椒枯斑型株系(TMV—PLNS)。 PMMS的病毒粒子形态为球状,直径约27毫微米;免疫琼脂双向扩散试验结果证明它与普通CMV存在亲缘关系;在百日菊上对CMV的Price NO.6株系有保护作用;可由棉蚜进行非持久性传递,致死温度为55℃,体外保毒期7天,稀释终点为10~(-5);在辣椒、黄瓜、心叶烟和普通烟等植物上引起系统性花叶,在苋色藜、豇豆等植物上引起局部枯斑,不侵染十字花科蔬菜。 PGVBS的病毒粒子形态为弯曲线状,大小约720×14毫微米;在感病辣椒细胞质中可见典型的风轮状内含体;可由棉蚜传递;致死温度为60℃,体外保毒期1天;人工接种7个科的24种植物中仅在辣椒一种植物上引起外部症状。 PYMS和PLNS的病毒粒子形态均为直杆状;免疫琼脂双向扩散试验结果表明两者与普通TMV存在亲缘关系;但PYMS比PLNS与TMV的亲缘关系更密切。在普通烟上,普通TMV对PYMS有完全的保护作用,对PLNS有不完全的保护作用;两者都不由蚜虫传递;PY     

山东省辣椒主要病毒种类的分子检测与鉴定

【目的】鉴定山东省辣椒上的主要病毒种类,明确该地区辣椒上的主要病毒病原。【方法】2014—2015年,在山东省临沂、日照、青岛、烟台、潍坊、淄博、济宁、菏泽、聊城、德州共10个市(区)采集253份疑似感病的辣椒植株叶片,提取叶片总RNA和总DNA,利用双生病毒的通用引物(PA/PB)、马铃薯卷叶病毒属通用引物(POL-F/POL-R)及已报道侵染辣椒的主要病毒的检测引物对样品进行PCR、RT-PCR分子检测与鉴定,将扩增得到的目的条带经凝胶回收试剂盒回收纯化后连接到pMD18-T载体上,再送至公司进行克隆测序。分别将所得的PMMoV、PeVYV和BWYV序列在NCBI上利用BLAST进行检索,利用DNAStar软件中的Megalign将所得序列与Gen Bank中已登录的世界各地有代表性的序列进行同源性比对,利用软件MEGA 5.05的Clustal W法进行多序列比对分析以及邻接法(neighbor-joining,NJ)构建系统进化树,系统进化树中各分支置信度(Bootstrap)进行1 000次重复分析。【结果】PMMoV、CMV总检出率分别为61.66%、60.08%;TMGMV、BBWV-2、BWYV、TMV发生也比较普遍,检出率为41.90%、34.78%、33.20%和24.90%;PCV-2、ToMV、TYLCV、PVY、MABYV、PeVYV、PCV-1、ChiVMV、AMV发生侵染现象较少,检出率分别为11.86%、9.88%、9.09%、6.72%、5.53%、3.56%、3.16%、0.79%和0.40%;未检测到Ca CV、PSV、Chi RSV、TSWV和To MMV。通过对病毒复合侵染现象进行分析发现,病毒复合侵染率高达89.92%,其中3种病毒复合侵染现象最多,所占比例达28.63%,4种病毒复合侵染率为25.00%,2种病毒复合侵染率为21.77%,5种病毒复合侵染率为13.31%,一个辣椒样品最多可同时感染6种病毒,侵染率为1.21%;对山东省10个地区的辣椒病毒检测,结果表明在辣椒上检出病毒种类最多的为临沂、济宁,检测到12种病毒,其次是烟台、聊城,检测到11种病毒,潍坊、菏泽检测到9种病毒,青岛、德州检测到8种病毒,日照检测到7种病毒,淄博检测到6种病毒,日照地区辣椒病毒复合侵染率最高,为100%,菏泽地区复合侵染率最低,为69.23%。分别根据PMMoV的部分CP基因序列、PeVYV部分Rd Rp、CP、MP基因序列以及BWYV部分CP、MP基因序列构建系统发育树,结果表明本研究PMMoV山东分离物SD60与中国贵州分离物的亲缘关系最近,PeVYV山东分离物SDRZ31-1与意大利IT83分离物的亲缘关系最近,BWYV山东分离物SD与韩国分离物LS的亲缘关系最近。【结论】在山东省采集的253份辣椒样品可被15种病毒侵染,PMMoV、CMV为主要病毒种类;在山东新检测到的病毒有MABYV、PeVYV、BWYV、PCV-1和PCV-2;明确了山东省主要辣椒产区病毒病发生情况以及病毒种类的主次关系。     

鸡旦果花叶病病原病毒的鉴定

根据病毒粒体形态、血清学反应、寄主范围、鉴别寄主反应及物理性质,广州地区鸡旦果花叶病病原病毒被鉴定为CMV的一个分离物。此CMV分离物可由汁液摩擦、桃蚜、棉蚜传染鸡旦果及西番莲(龙珠果)幼苗。首次发现花生是人工接种的枯斑寄主。     

烤烟普通花叶病的防治

<正>一、烟草普通花叶病的症状1.发病时期。烟草普通花叶病自苗床期至大田成株期均可发生。成苗期由于剪叶、间苗等农事操作造成微伤口使烟株感病为第1个发病高峰期;其次是大田期由于移栽、覆膜、摘除底脚叶等农事活动,加之土壤和粪肥中病毒的侵袭,烟株团棵至旺长期达到第②个高峰期;最后是烟株现蕾后,由于封顶抹杈、烟叶采摘等农事活动频繁,病害进一步传播,封顶后10～20天达到第③个高峰期,但此时主要在顶叶或烟     

衡阳县烟草花叶病病毒种类调查及其防治药剂筛选

采集感染了烟草花叶病的烟叶进行分子生物学检测,发现衡阳县烟草病毒病主要是PVY、CMV、TMV三种病毒的复合侵染。采用5种烟草花叶病的防治药剂进行田间药效试验,结果表明:在烟草病毒病初发期开始喷药,每隔10天连续喷施3次,20%盐酸吗啉胍.乙酸铜WP对烟草花叶病的防治效果高达56.79%,且增产效果达35%;2.2%辛菌.三十烷醇、RNAi制剂和光合细菌菌剂平均防效分别为43.74%、41.01%和36.68%;0.5%氨基寡糖素的防效最差,平均防效为30.04%,仅增产5%。     

烤烟主要病虫害种类及防治对策

烤烟是永胜县主要的经济作物,对农民脱贫和地方增收都具有重要意义。烟草病虫害发生较重,是直接造成烟草产量和质量不稳定的重要原因,每年因病虫害造成的损失巨大。根据当地的生态条件及病虫害发生流行规律,本文针对烤烟生产中主要病虫害症状和防治方法进行阐述。     

烤烟普通花叶病的防治

<正>烟草普通花叶病是一种在全世界各烟区普遍发生,局部地区严重流行的烟草病毒病害,是一种对烟草为害十分严重并极易传染的病害,无病烟叶只要被病叶接住摩擦,叶片上的茸毛稍有损伤,就能传染上此病。烟苗早期感病常造成植株严重矮化,叶片皱缩,以致严重减产     

沈阳地区唐菖蒲病毒种类鉴定

通过沈阳地区栽培唐菖蒲的病毒病症状类型调速查，以及对病毒毒原的生物学测定、电镜观察、对流免疫电泳测定和间接酶联免疫吸附法测定，明确沈阳地区种植的唐菖蒲受黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）、菜豆黄花叶病毒（ＢＹＭＶ）和烟草花叶病毒（ＴＭＶ）的浸染。阐明了染病寄主的症状与病毒毒原种类的相关性，在典型症状中，碎色症和斑驳症的植株多为受ＣＭＶ侵染造成，条斑症和皱叶症主要是由ＢＹＭＶ侵染引起。ＴＭＶ的含量较低，尚未单独引起寄主的典型症状。     

烤烟花叶病防治技术初探

对马龙县旧县镇烟草花叶病的发生情况进行调查,介绍了当前烟草花叶病的发生种类,分析其发病原因,并提出以农业防治为主,化学防治为辅的综合防治措施.     

安徽省烤烟地方品种的初步鉴定

对安徽省４７个烤烟地方品种的主要生物学性状、抗黑胫病性能及地的化学成分进行了初步鉴定，筛选出在平板、歪把子、烟变子、娥眉俏和小尖稍等几个高抗黑胫病的地方品种。