华癸根瘤菌的系统发育地位

16S rRNA 序列测定是细菌分类学的基本方法之一,其序列差异是确定细菌属间及属上系统发育关系的主要标准。本文根据国际系统细菌学委员会根瘤菌分委员会的建议,采用聚合酶链反应扩增了华癸根瘤菌(Rhizobium huakuii)模式菌株103的16S rRNA 基因中约260个碱基的一个片段,并对其进行了序列测定。所得序列与其他已知根瘤菌种、属的相应片段进行了比较。结果表明,华癸根瘤菌与豌豆根瘤菌和苜蓿根瘤菌两种及与其他属的碱基差异在6.9%～14.1%(17～35个碱基),相当于根瘤菌科内已知属间的差异。结合表型特征,我们认为该种可能代表了根瘤科的一个新属。     

齿突斜纹蟹线粒体DNA中12S rRNA基因序列的研究

于１９９６年８月在日本东京水产大学坂田试验场海岸岩礁地带采集齿突斜纹触（Ｐｌａｇｕｓｉａ ｄｅｎｔｉｐｅｓ）样品,参考果蝇（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｙａｋｕｂａ）线粒体ＤＮＡ中１２ＳｒＲＮＡ基因片段序列进行了其引物设计、ＰＣＲ扩增及序列测定。得到齿突斜纹触线粒体ＤＮＡ中１２ＳｒＲＮＡ基因片段的碱基序列为４４７ｂｐ,其中腺嘌呤（Ａ）、胸腺嘧啶（Ｔ）、鸟嘌呤（Ｇ）、胞嘧啶（Ｃ）含量分别为１６０ｂｐ（３５     

费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)质粒复制基因repC序列多样性的研究

采用质粒快速检测法从供试33株费氏中华根瘤菌中分别检测出2～4个内源大质粒。用根据豌豆根瘤菌的repC基因设计1对引物RCI和RC3,从供试菌株及3株华癸中生根瘤菌和1株大豆慢生根瘤菌中扩增得到repC基因片段,证明在费氏中华根瘤菌中广泛存在repC基因。通过对扩增产物的测序,并与已报道的repC基因序列进行聚类分析,发现供试菌株可分为2个群,群a和群b,群内十分保守,但群间差异明显;其中群b的序列与已知类型的差异明显。     

分子生物学新方法在根瘤菌分类中的应用

随着分子生物学技术的发展,一些全新的方法应用于根瘤菌分类,使根瘤菌类的研究得到了迅速发展,从过去的传统分类过渡到以遗传特征和系统发育为主要依据的现代系统分类。研究在参考大量文献的基础上,概述了全细胞可溶性蛋白电泳,多位点酶永金ＤＮＡＧ＋Ｃ摩尔百分含量测定ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交,限制性片段长度多态性分析,随机扩增ＤＮＡ片段的多态性,基因外回文重复序列ＰＣＲ扩增技术及１６ＳｒＤＮＡ序列的分析确定根瘤菌系统     

分子生物学新方法在根瘤菌分类中的应用

随着分子生物学技术的发展,一些全新的方法应用于根瘤菌分类,使根瘤菌分类的研究得到了迅速发展,从过去的传统分类过渡到了以遗传特征和系统发育为主要依据的现代系统分类。研究在参考大量文献的基础上,概述了全细胞可溶性蛋白电泳、多位点酶电泳、ＤＮＡＧ＋Ｃ摩尔百分含量测定及ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交、限制性片段长度多态性分析、随机扩增ＤＮＡ片段的多态性、基因外回文重复序列ＰＣＲ扩增技术及１６ＳｒＤＮＡ序列分析确定根瘤菌系统发育等７种分子生物学方法的原理、特点,以及在根瘤菌分类研究中的应用现状和前景。     

华癸根瘤菌在非豆科植物根圈定殖能力的研究

本文首镒报道了华癸根瘤菌在水稻,小麦,油菜和棉花４种非豆科作物根圈定的定殖能力。分别通过盆栽试验并采用外源标记基因特异性检测技术进行检测,研究发现华癸根瘤菌不但可以在这４种非豆科植物根圈定殖,而且还能进入根内,其数量可达１０＾３个／ｇ以上。接种华癸根瘤菌对油菜和棉花根系的生长有一定影响,并能显著促进水稻的生长,为扩大华癸根瘤菌的应用范围展示了诱人的前景。     

红鲌属3种鱼类线粒体细胞色素b基因片段序列分析

测定了红鲌属的翘嘴红鲌、青梢红鲌和蒙古红鲌细胞色素b基因片段序列(1 091 bp), 对其碱基组成变异情况及核苷酸序列差异进行了分析, 并以红鳍鲌为外类群, 用邻接(NJ)法和非加权算术平均对数(UPGMA)法构建系统关系树. 结果表明: ① 4种鱼(包括外类群)Cyt b基因片段序列碱基平均差异为6.2%, 变异位点184个, 具有简约性信息位点141个, 平均转换颠换比为7.4; ②测定的红鲌属3种鱼形成一个单系群, 其中翘嘴红鲌与青梢红鲌亲缘关系较近.     

rRNA基因间隔区序列用于亲缘关系密切的根瘤菌种群鉴定及系统发育分析

通过rRNA基因内转录间隔区的碱基序列分析,对中华根瘤菌属Sinorhizobium、慢生根瘤菌属Bradyrhizobium和中慢生根瘤菌属Mesorhizobium种间亲缘关系十分密切的菌株进行区分．结果表明,rRNA基因间隔区序列能很好地区分种间亲缘关系十分密切的菌株．用rRNA基因间隔区序列构建的系统发育树与rRNA基因序列构建的系统发育树结果十分相似．     

红鲐属三种鱼类线粒体细胞色素b基因片段序列分析

本文测定了红珀属的翘嘴红约、青梢红铂和蒙古红铂细胞色素b基因片段序列（1091bp）,对其碱基组成变异情况及核苷酸序列差异进行了分析。并以红鳍珀为外类群,用NJ法和UPGMA法构建系统关系树。结果表明：（1）四种鱼（包括外类群）Cytb基因片段序列碱基平均差异为6．2％,变异位点184个,具有简约性信息位点141个,平均转换颠换比为7．4;（2）本文测定的红鲐属三种鱼形成一个单系群,其中翘嘴红珀与青梢红珀亲缘关系较近。     

红鲌属3种鱼类线粒体细胞色素b基因片段序列分析

测定了红鲌属的翘嘴红鲌、青梢红鲌和蒙古红鲌细胞色素b基因片段序列（1 091 bp）,对其碱基组成变异情况及核苷酸序列差异进行了分析,并以红鳍鲌为外类群,用邻接（NJ）法和非加权算术平均对数（UPGMA）法构建系统关系树.结果表明：①4种鱼（包括外类群）Cyt b基因片段序列碱基平均差异为6.2%,变异位点184个,具有简约性信息位点141个,平均转换颠换比为7.4;②测定的红鲌属3种鱼形成一个单系群,其中翘嘴红鲌与青梢红鲌亲缘关系较近.     

大麦抗BYDV的蚜虫获毒酶联免疫吸附法

蚜虫获毒酶联免疫吸附法（ＡＡ－ＥＬＩＳＡ）是指用ＥＬＩＳＡ测定从染病植株上获毒蚜虫以反映品种抗ＢＹＤＶ的方法。经对带Ｙｄ２基因大麦品种８７７－１６与感病品种Ｍａｎｌｅｙ对比测定，按其方法接种３叶期第１叶片，传毒３ｄ后用无毒禾谷类蚜虫从第２叶片上取食获毒１ｄ，采集５头作ＥＬＩＳＡ测定。ＡＡ－ＥＬＩＳＡ法测定ＯＤ值，Ｍａｎｌｅｙ显著高于８７７－１６，用ＥＬＩＳＡ直接测定无显著差异。用ＡＡ－ＥＬＩＳＡ法具有不破坏植株，可对同一部位重复测定，且蚜虫体软，易研碎抽提病毒，测定抗感品种差异明显等优点，具有适用性。     

两个相思树种根瘤菌代表菌株HJ06和JJ06的16S rDNA序列分析

为了开发利用我国人工林豆科树种根瘤菌的种质资源,该研究对华南地区两个人工林豆科树种厚荚相思和卷荚相思的根瘤菌两个代表菌株HJ06和JJ06进行了16S rDNA全序列测定,将此全序列与根瘤菌各已知种及相关种的16S rDNA全序列进行了比较及聚类分析,得到系统发育树状图.在系统发育树状图中,HJ06位于Rhizobium分支中并与根瘤菌属各个种的相似性达95%以上;JJ06位于Mesorhizobium分支中并与中慢生根瘤菌属各个种的相似性达97% 以上.表明它们分别为不同的根瘤菌种,证明了从国外引种于中国华南的相思树种其根瘤菌具有多样性和复杂性．      

葡萄无核基因的RAPD遗传标记

报道了用随机引物和混合分离分析（ＢＳＡ）方法检测葡萄无核基因连锁的遗传标记。ＤＮＡ混合样来自Ｂ７２－２１６×Ｂ４５－１８７的杂交后代。两个事样分别由９个表现型为无核和有核杂种组成，除有核与无性状外，其他性状是随机的。用１０碱基随机序列的１０９个引物筛选混合样以期获得多态型ＤＮＡ片段。结果在引物ＵＢＣ－２６９扩增后，５００对碱基的ＤＮＡ我态型片段出现在无核样，而有核样不该多态型片段，进一步用杂种、父     

传染性喉气管炎病毒北京E2株gC基因的克隆及其部分序列测定

根据传染性喉气管炎病毒美国６３２株和英国Ｔｈｏｒｎｅ株ｇＣ基因的序列设计１对引物,以北京Ｅ２株为模板,用ＰＣＲ方法扩增到长度为１．９ｋｐ的片段,并将其克隆至质粒ｐＡ－Ｔ。用碱小量法制备质粒ＤＮＡ,以酶切和质粒ＰＣＲ的方法对其进行了鉴定,并以正向和反向引物测定其两翼序列,结果正向引物测出４９８个碱基,反向引物测出４９９个碱基,将所得序列输入ＧｅｎＢａｎｋ与其他毒株进行比较,结果发现其与美国６３２株的     

利用细菌双杂交文库筛选华癸中慢生根瘤菌7653R中与外膜蛋白Opa22互作的蛋白

为研究华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)7653R外膜蛋白Opa22在共生固氮过程中的作用机制,构建了细菌双杂交基因组随机文库,并以Opa22为诱饵,钓取与其相互作用的候选靶蛋白。结果获得12个与Opa22蛋白互作的阳性克隆,为后续研究Opa22的作用机制提供了新的线索和思路,同时也为开展根瘤菌蛋白互作的研究构筑了良好的技术平台。     

两种鲷属鱼类线粒体COI基因片段序列的比较

利用通用引物成功扩增了黄鳍鲷和黑鲷的线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基（COI）基因序列。通过序列测定，得到581bp的基因片段，碱基A、T、G、C平均含量分别为25．8％、32．6％、18．0％和23．6％，序列中的A＋T含量明显高于G＋C含量，与其他鱼类的C01基因片段研究结果相一致。通过序列分析发现黄鳍鲷和黑鲷两序列共存在14处碱基变异，其中在第19～139bp之间检测到13个变异位点，是变异频率较高的区段，可以考虑作为鲷属或者种群鉴别的分子标记。与黄鲷、真鲷、三长棘真鲷等鱼类比较，无插入和缺失位点，转换明显高于颠换。序列差异比较结果显示，真鲷与黄鳍鲷的序列差异在这5种鱼类中最大，达到了18．2％，黄鳍鲷和黑鲷的筹异最小（2．4％）。两个序列已提交到GenBank数据库中．序列臀录号为DQ185608和DQ185609.     

两种鲷属鱼类线粒体COI基因片段序列的比较

利用通用引物成功扩增了黄鳍鲷和黑鲷的线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基（COI）基因序列。通过序列测定，得到581bp的基因片段，碱基A、T、G、C平均含量分别为25．8％、32．6％、18．0％和23．6％，序列中的A＋T含量明显高于G＋C含量，与其他鱼类的C01基因片段研究结果相一致。通过序列分析发现黄鳍鲷和黑鲷两序列共存在14处碱基变异，其中在第19～139bp之间检测到13个变异位点，是变异频率较高的区段，可以考虑作为鲷属或者种群鉴别的分子标记。与黄鲷、真鲷、三长棘真鲷等鱼类比较，无插入和缺失位点，转换明显高于颠换。序列差异比较结果显示，真鲷与黄鳍鲷的序列差异在这5种鱼类中最大，达到了18．2％，黄鳍鲷和黑鲷的筹异最小（2．4％）。两个序列已提交到GenBank数据库中．序列臀录号为DQ185608和DQ185609.     

葡萄无核基因RAPD标记的序列分析

报道了用ＱｉａｇｅｎＫｉｔ纯化ＲＡＰＤ遗传标记，用细菌质粒Ｍ１３克隆ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ片段，采用自动荧光ＤＮＡ测序仪（型号３７３Ａ）测定了该ＤＮＡ片段的核苷酸组成及其排列顺序。无核白ＲＡＰＤ标记由５１９对核苷酸及其特定序列组成。因为无核白是无核基因的原始供体，作者认为所获无核白ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ序列，可以作为合成探针的基础，用于检测无核葡萄育种和无核品种的无核性。     

葡萄无核基因RAPD标记的序列分析

报道了用Ｑｉａｇｅｎ Ｋｉｔ纯化ＲＡＰＤ遗传标记，用细菌质粒ｍ１３克隆ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ片段，采用自动荧光ＤＮＡ测序仪（型号３７３Ａ）测定了该ＤＮＡ片段的核苷酸组成及其排列顺序。无核白ＲＡＰＤ标记由５１９对核苷酸及其特定序列组成。因为无核白是无核基因的原始供体，作者认主所获无核白ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ序列，可以作为合成探针的基础，用于检测无核葡萄育种和无核品种的无核性。     

海南岛华石斛根部可培养的共生细菌的多样性

采集3个居群的野生华石斛根系,从中分离到130株内生细菌,并对细菌进行16S r DNA序列谱系分析,结果表明:华石斛根部内生细菌主要有:芽孢杆菌属(Bacillus)、伯克氏菌属(Burkholderia)、泛菌属(Pantoea)、肠杆菌属(Enterobacter)、藤黄杆菌属(Luteibacter)、沙雷氏菌属(Serratia)和西地西菌属(Cedecea)7个属的15个种。其中优势类群为Bacillus,次优势类群为Enterobacter和Burkholderia。优势内生细菌Bacillus spp.在3个不同的居群华石斛根部均有出现,且频率相近。环境因子差异最大、附生宿主组成最相近的霸王岭与吊罗山之间,华石斛根部内生细菌群落物种组成相似性最高。说明附生宿主植物差异是附生植物根部内生细菌物种组成差异的重要驱动因子。