HAL1基因转化烟草及其耐盐性

利用含HAL1基因的高效植物表达栽体pAHF转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens．LBA4404),用农杆菌介导的叶圆盘法对烟草(Nicotiana tabacum L．)叶片进行遗传转化。在含卡那霉素的MS分叱培养基上选择转化体和植株再生,转化植株可在含卡那霉素的生根培养基中生根。经PCR检测发现,在8个转化子中有6个转化子获得特异性扩增条带。耐盐试验表明,在被检测的900株转化子中有481株可在含0．80％～1．50％NaCI的生根培养基中生根,生根率为53．45％,对照烟草植株只在低于0．80％NaC1的生根培养基中生根,生根率为73．75％。由此证明HAL1基因的转入提高了烟草的耐盐性。     

HAL1基因转化苜蓿再生植株及其耐盐性

用根癌农杆菌介导法将克隆于酵母的HAL1基因转化龙牧803苜蓿胚性愈伤组织,经2 mg/L的Basta抗性筛选及PCR检测,该基因已整合到受体基因组中,共获得了11株转基因植株。培养基耐盐性实验结果:在添加NaCl的MSO培养基上,非转基因植株在NaCl浓度高于0.6%时不能生根,逐渐死亡;转基因植株在NaCl浓度0.6%～1.0%范围内仍能生根并正常生长。由此初步证明HAL1基因已在龙牧803苜蓿中表达,并且提高了耐盐性。     

Bar基因转化豆科牧草百脉根的研究

以豆科植物百脉根子叶为转化受体,通过根癌农杆菌介导方法将外源目的基因Bar基因和Gus基因导入,经筛选分化、再生,得到具有Basta抗性的转基因植株。在Basta浓度的选择中,2mg/L是百脉根较为适宜的筛选浓度。试管苗叶片筛选剔除假转体和嵌合体植株,转基因植物移栽大田后生长良好。PCR检测证明外源目的基因已整合到百脉根基因组中。     

酵母HAL1基因转化水稻及其耐碱性研究

利用农杆菌介导的遗传转化法,将从啤酒酵母中克隆出能调节细胞K+/Na+的基因HAL1导入吉林省主栽粳稻品种吉粳88和吉粳83中,经PCR、Southern杂交检测,获得246株转基因阳性植株。转基因水稻在p H值为11.0的Na OH和Na2CO3碱性胁迫下,吉粳83的转基因植株耐盐碱性为1级的有7株,3级的有29株;吉粳88的转基因植株耐盐碱性为1级的有6株,3级的有8株。     

百脉根表达H5N1亚型禽流感血凝素的研究

 【目的】将H5N1亚型禽流感病毒血凝素（AIVHA）基因转入牧草植物中,利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白,探索研制禽流感转基因植物可饲用疫苗的可行性。【方法】以百脉根子叶柄外植体作为转化受体,通过农杆菌介导法将AIVHA基因导入百脉根,子叶柄外植体经过共培养、筛选分化、再生, 得到抗性植株。对抗性植株进行了PCR、RT-PCR检测和Western blot分析。【结果】证明AIVHA基因已经导入到百脉根基因组中,在核酸水平和蛋白水平都得到了表达。【结论】利用百脉根表达禽流感抗原蛋白是可行的。     

百脉根花对称性基因LjCYC3转化烟草的研究

根据百脉根花对称性基因LjCYC3构建反义表达载体,经农杆菌介导正、反义LjCYC3基因转化烟草,以获得花型改变的转基因烟草植株,并根据表型选取正、反义各3株转基因植株和1株野生型植株进行Q-PCR分析,观察外源基因在远源植物中的作用和影响.PCR分析结果表明:转基因植株中正义基因和反义基因的转化率分别为62.5%和71%.表型观察显示:30%的正义转基因植株主要表现为花瓣和雄蕊数目减少;而40%的反义转基因植株表现为2朵花有一定程度的融合,花冠萼片有褪色现象,雄蕊端头有花瓣状结构,雌蕊2枚且与雄蕊有合生现象.Q-PCR分析结果表明:在正义转基因再生植株中,外源基因均高效表达,随着表达量的增加,花型变化更加明显;而在反义转基因再生植株中,外源基因也有表达,随着表达量的降低,花型变化更加明显;与正义基因表达量相比,反义基因表达量要小约150倍.本研究结果为下阶段用该基因转化花卉植物以改变花型、改良花卉品种打下了实验基础.     

继代培养对转基因百脉根外源基因遗传稳定性的影响

以B2、B5及B8 3个转ChIFN-α基因百脉根株系为材料,通过GUS基因组织化学染色、ChIFN-α基因PCR扩增和基因测序检测,探讨转基因植物中外源基因在无性继代培养条件下的稳定性。结果表明:愈伤组织继代培养12代后,整合于百脉根基因组中的外源ChIFN-α基因序列仍保持稳定,未出现序列变化。     

百脉根组织培养的研究

以UM和MS为基本培养基,通过调整激素种类与浓度等培养条件,按正交实验设计的原则,摸索出建立百脉根组织培养体系的最佳条件:愈伤诱导最佳培养基为UM+2,4-D 2 mg.L-1+KT3 mg.L-1;最佳分化培养基为MS+NAA0.1 mg.L-1+6-BA 1 mg.L-1;最佳生根培养基为MS+NAA0.05 mg.L-1。     

根癌农杆菌介导FPF1基因转化菊花的研究

经过转化材料的筛选、KM筛选浓度、Cef抗菌浓度以及延迟筛选时间的测定,以根癌农杆菌（Agrobactriumtumefaciens）LBA4404菌株介导FPF1基因转化菊花,对转化材料进行连续KM筛选,获得105株抗性苗,部分植株经PCR检测呈阳性.田间观察部分抗性株与对照相比在株型、叶色及花期上表现出差异.     

百脉根谷胱甘肽硫转移酶基因的载体构建与检测

[目的]探讨百脉根谷胱甘肽硫转移酶基因（LcGST）的作用。[方法]通过DNA重组技术将LcGST与中间表达载体pGN连接。[结果]成功构建了植物表达载体pGN-LcGST。[结论]pGN-LcGST载体的获得为进一步研究其在异源植物中的功能奠定了基础。     

农杆菌介导白细胞介素-2基因转化大白菜的研究

以大白菜4￣5d苗龄、带2mm子叶柄的子叶为外植体,利用农杆菌介导的方法将人源白细胞介素-2基因(il-2)导入北方大白菜优良品种鲁白七号和602中,分别获得带有PPT抗性和卡那霉素抗性的两种转化植株,转化率分别最高达到16.7%和8.0%,讨论分析了两种质粒(PPT和卡那霉素两种抗性标记基因)对转化效率的影响。转化植株进行PCR和PCR-Southern杂交、Western杂交检测,结果证明白细胞介素-2基因已整合入白菜基因组中,il-2蛋白在转基因大白菜中得到表达。     

莲的引种试验初报

莲（Nelumbo nucifera Gaertn）是我国最具特色、栽培面积最大、品种资源最丰富、栽培历史悠久的水生经济作物.栽培上根据莲不同部位的利用价值通常分为藕莲、籽莲、花莲3大类.藕莲生产以湖北、江苏、安徽、浙江等省为主,籽莲以江西、湖南、福建、湖北为主,花莲以武汉、北京等地为主.贵州零星栽培有藕莲、花莲.近年来,随着城镇居民生活水平的提高以及农业产业结构调整,水生经济作物的需求量日益增大.2002年,贵阳花溪科技生态园区结合园区实际,有效地利用园区湿地,从武汉水生蔬菜研究所、武汉植物园引进藕莲、花莲、籽莲10余个品种在园区进行栽培试验.     

农杆菌介导法将bFGF基因转入木立芦荟的初步研究

利用农杆菌介导法将bFGF基因导入木立芦荟中,通过对农杆菌介导芦荟遗传转化影响因素的分析,建立了优化的芦荟转化体系.用继代培养获得的粗壮的芦荟单株茎段作为转化外植体,以OD=0.55～0.68的EHA105农杆菌工程菌液侵染25min,在MS+蔗糖10g/L+100～mol/L乙酰丁香酮的共体培养基上培养3d,在MS+...     

滇杨抗蛀干害虫转基因表达载体的构建

为解决滇杨产业发展中的蛀干害虫危害问题，人工合成了Sbt—CryⅢ基因，该基因可以编码对滇杨蛀干害虫——鞘翅目昆虫天牛具有毒杀作用的蛋白；构建了含Sbt—CryⅢ基因的植物表达载体.     

人瘦蛋白基因小鼠遗传性的初步研究

对转基因小鼠能否将外源基因遗传给后代以及如果能又将遵循怎栉产的遗传规律的问题进行了研究，在本研究中，2只转基因母鼠与非转基因公鼠交配，妊娠足月分娩后分别得到7只和8只仔鼠，以DIG标记的人瘦蛋白基因为探针，进行Southern杂交，结果表明在左只转基因母鼠生出的仔鼠中各有3只为含有转基因片段的仔鼠，这表明转基因可以遗传给后代，统计分析结果初步表明，外源基因的遗传遵循盂德尔遗传方式。     

将Pti5-VP16基因导入烟草的研究

以烟草叶片为外植体，通过根癌农杆菌叶盘转化法，将番茄Pti5-VP16基因导入烟草中。经卡那霉素筛选，获得了27株卡那霉素抗性植株，经PCR扩增和Southern杂交分析，证明抗性植株中整合了Pti5-VP16基因，表明所构建的含Pti5-VP16基因的植物表达载体pBI121UCH1具有正确的阅读框，并能在异源植物中表达。     

水稻WRKY19基因启动子功能研究初报

利用已获得的水稻WRKY19基因启动子(OsW19p::GUS)的转基因植株进行研究,分析了OsW19p在T1代苗期时的诱导表达特性,GUS荧光测定结果表明:OsW19p的表达可被ABA(100μmol/L)、SA(500μmol/L)、高温(42℃)、低温(5℃)和伤处理增强;被2,4-D(1μmol/L)、NaCl(200mmol/L)和PEG4000(25%)处理抑制;IAA(5μmol/L)、MeJA(100μmol/L)和紫外线照射处理对OsW19p的表达几乎没有影响。OsW19p在转基因植株根中的表达水平高于35s,但在叶片中低于35s。OsW19p在转基因水稻扬花期茎部中表达水平最高,其次是花、叶鞘和叶片,在根部表达水平最低。     

PEI介导外源基因进入植物细胞的瞬时表达

 【目的】医学方面的大量研究证实,聚乙烯亚胺（polyethylenimine,PEI）作为一种新型阳离子多聚物基因载体可以吸附和浓缩DNA,通过与细胞膜亲和粘附和细胞吞噬作用运载外源基因进入细胞并实现表达。本实验研究旨在探索PEI作为非病毒基因载体介导外源基因进入植物细胞并获得瞬时表达的可能性。【方法】制备PEI/DNA复合物,利用凝胶阻滞分析PEI与DNA的结合情况,采用电子显微镜观察PEI/DNA复合物的形态。以绿色荧光蛋白基因为报告基因研究不同N/P比条件下PEI/DNA复合物对拟南芥原生质体细胞的转化效率,并与PEG转化方法进行比较分析。【结果】PEI与DNA的质量比为5﹕1～1﹕4,PEI可以与DNA稳定结合,形成粒径约100～200 nm的球形复合物。PEI/DNA复合物对拟南芥原生质体细胞的转化效率随其N/P比的增大而提高,N/P＝5时PEI的转化效率达到最高且明显高于PEG介导的转化效率,N/P＞5时转化效率反而下降,容易使细胞破碎和变形。【结论】PEI作为一种新型的外源基因运送载体对拟南芥原生质体细胞具有良好的介导基因转移效果。     

摄食转全鱼基因鲤的小鼠亚急性毒性分析

通过投喂实验、血液学指标分析、脏器与体质量百分比分析及组织病理检查4个方面,对摄食转基因鱼肉饲料的小鼠进行亚急性毒性研究.结果显示,摄食转全鱼基因鲤鱼肉饲料的小鼠(实验组)在实验期间(90d),其外观、摄食和活动均正常;与摄食非转基因鱼肉饲料的小鼠(对照组)相比,二者在血清生化和血液生理指标上均无明显差异,只在尿素氮质量分数和白细胞、淋巴细胞、嗜碱性细胞数量上与摄食非鱼肉饲料的小鼠(空白组)存在一定差异.在肝脏和肾脏两脏器占体质量的百分比的研究中发现,3组实验小鼠均无明显差异;最后,实验组小鼠两脏器经组织切片检查,亦未发现有任何病变发生.结果初步证明摄食转全鱼基因鲤对哺乳动物小鼠是安全的,这为今后转全鱼基因鲤的批准上市提供了理论依据.     

乡土杂草刍议

提出了乡土杂草的概念,并就乡土杂草的美学和生态价值展开论述,指出乡土杂草对于现代园林的积极作用。