弹性蛋白酶产生菌的诱变选育及其发酵条件初步研究

以弹性蛋白酶产生菌芽孢杆菌Bacillussp.EA9为出发菌株,经离子注入和紫外线复合诱变,筛选到弹性蛋白酶高产菌株,编号为EA9314。用单因子条件试验、Plackett-Burman试验及正交试验对该菌株进行培养基组成及培养条件的初步研究,结果表明:其最佳培养基组成是:2%葡萄糖,1.5%酵母粉,0.1%豆饼粉,0.1%K2HPO4,0.01%MgSO4;最佳培养条件是:起始pH 6.5~7.0,250 ml三角瓶装液量20 ml,接种量6%。在此发酵条件下,该菌产酶水平为274.7 U/ml。     

羽毛降解菌Deinococcus actinosclerus RM的分离、鉴定及其产生的蛋白酶酶学性质

从羽毛废弃物的排水沟污泥中采集污泥样品,通过富集培养、分离、纯化、发酵筛选,获得一株降解羽毛效果最佳的RM菌株.对该菌株进行形态特征、16S rDNA序列以及生理生化试验初步鉴定RM菌株为Deinococcus actinosclerus.该菌株在4%羽毛含量条件下,培养7 d后对羽毛的降解率高达60%,且羽毛水解产物含有多种氨基酸,如丝氨酸、天冬氨酸.RM菌株产生的胞外蛋白酶以丝氨酸蛋白酶为主,也含有天冬氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶.粗酶液最适反应温度为45℃,最适pH为10.0;金属离子Cu~(2+)、Mg~(2+)能够提高蛋白酶活性,而Ca~(2+)、Ni~(2+)、Zn~(2+)及蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟、乙二胺四乙酸、亮抑蛋白酶肽对酶活性有抑制作用.通过以上结果可知,RM菌株对羽毛的高效降解具有较高的潜在应用价值.     

液体发酵法发酵豆粕产蛋白酶条件的优化

为了提高B-15菌株发酵豆粕产蛋白酶能力,采用单因素法对B-15菌株发酵培养基所需的碳源、氮源、无机盐进行筛选,采用正交试验对B-15菌株的发酵培养基组成及发酵培养条件进行优化,最终确定最适发酵培养基组成为葡萄糖为2%、豆粕浓度为12%、KCl为0.01%、MgSO4为0.05%。通过发酵工艺条件参数的正交优化试验得出发酵培养基的最佳工艺参数为:发酵时间为48 h,装瓶量为50 mL,种龄为14 h,pH值为6.5。在此条件下B-15菌株发酵产蛋白酶活力为125.05 U/mL,与基础发酵培养基相比,提高了11.9%。     

枯草杆菌溶血纤维蛋白酶发酵培养基配方的确定

采取有交互作用的正交试验设计了枯草杆菌HL986菌株溶血纤维蛋白酶发酵的培养基成分 ,用试管表面培养法和摇瓶培养法进行发酵 ,利用牛血纤维蛋白琼脂平皿法测溶血纤维蛋白酶的活性 ,分析确定的最佳培养基配方为 :进口酵母浸出粉OXOID2 % ,麦芽糖 0 .2 % ,NaH2 PO4·2H2 O 0 .7%。     

产中性蛋白酶菌株的筛选及其发酵条件的优化

从土壤样品中分离筛选出产一株中性蛋白酶产生菌ZH-6.经单因子试验、正交试验表明,该菌株摇瓶发酵产酶的最佳发酵周期48 h,发酵温度33℃,摇床转速为180 rpm.最佳发酵培养基为玉米淀粉2.0%,麸皮3.0%,Na2HPO4·12H2O 0.4%,KH2PO4 0.03%,ZnCl2 0.1%.起始pH 6.5的条件下,其酶活力为1428.3 U/ml.     

植物促生菌CS2、CC9和草炭土添加量对盐碱土育秧的作用效果

将超级稻种子分别种植于总盐含量为0.1%,0.3%、0.6%、草炭土含量为0%、10%、20%的盐碱土中,并分别接种ACC脱氨酶PGPR菌株CC9和CS2,培养至水稻3叶1心期时,测定其株高、干重、鲜重、叶片叶绿素含量.结果表明:在各盐浓度的盐碱土中,经CC9和CS2处理的水稻,株高比对照高14%～42%;干物质含量比...     

1株脱毛蛋白酶生产菌株的选育和鉴定

[目的]筛选鉴定脱毛蛋白酶生产菌株。[方法]通过菌株分离、筛选与鉴定试验筛选并鉴定出了1株脱毛蛋白酶生产菌株,命名为Bacillus cereus SZ-4。[结果]经初筛得到11株脱毛蛋白酶生产菌株,经复筛得到菌株SZ-4。SEM观察结果表明,蜡状芽孢杆菌1.230与待鉴定菌株的细胞形态非常相似。菌株SZ-4的菌体细胞革兰氏染色呈阳性;荚膜染色呈阴性;芽孢呈椭圆形,中生或次端生。生理试验结果表明,葡萄糖、L-鼠李糖、肌醇、甘露醇及蔗糖均可用作菌株SZ-4的碳源;以葡萄糖为碳源时,菌株的生长状况最佳。该菌株是1株嗜盐菌。DNA序列分析表明,蜡状芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌同处于一个最小的分支,与已知菌株Bacillus cereus strain CCM2010的遗传距离最近,同源性达到99.8%。确定该菌株为蜡状芽孢杆菌,将其命名为Bacillus cereus SZ-4。[结论]该试验从盐腌原料皮中分离得到1株脱毛蛋白酶生产菌株SZ-4。     

1株耐盐碱溶磷菌的溶磷特性及其促生效果

对国家缓控释肥工程技术研究中心分离保藏的1株高效溶磷真菌PFK的耐盐碱性能及溶磷性能进行研究,并进行盐碱土盆栽试验,研究其在盐碱土中对小麦的促生作用。结果表明,PFK菌株具有很强的降解无机磷能力,在以Ca3(PO4)2为唯一磷源的无机磷培养基中培养7 d时,水溶磷含量达到892.86 mg/L,为对照组的89.60倍;pH值≤9的条件对PFK菌株降解无机磷的能力影响不大;PFK菌株在含10%NaCl的PDA培养基中仍可生长。盆栽试验结果表明:接种解磷真菌PFK的处理组小麦的茎粗、株高、根长、鲜干质量显著高于对照组,因而推断PFK菌株具有一定的促生作用。     

蛋白酶高产菌株的紫外诱变选育

［目的］提高地衣芽孢杆菌B7的产蛋白酶能力。［方法］采用福林酚法测定酶活力,通过诱变育种试验和遗传稳定性试验选育出遗传性能稳定的蛋白酶高产菌株。［结果］紫外线照射时间为2 min,菌落的总致死率为62.47%。371株菌株的HC值变化小于5%,53株菌株的HC值正变大于5%,76株菌株的HC值负变大于5%。正变大于10%的12株菌株的HC值是出发菌株的1.18-1.34倍。所有变异株的蛋白酶活力均显著高于出发菌株,其中菌株B720和B749的蛋白酶活力达50 U/ml,比出发菌株提高了40%以上。经过复筛得到菌株B7 49,诱变前后其最高酶活分别为33.97和50.29 U/ml。遗传稳定性试验中菌株B749的蛋白酶活力变化小于10%。［结论］该试验成功选育出的遗传性能稳定的蛋白酶高产菌株B749可用于发酵法制备大豆肽。     

海洋细菌L_1-9菌株产蛋白酶发酵条件的优化

海洋细菌L1-9是一株对多种植物病原真菌有强抑制作用并能产生蛋白酶、纤维素酶等细胞壁降解酶的优良菌株.采用比色法对该菌株产生蛋白酶的最适培养基和发酵条件进行了研究.结果表明,该菌株产蛋白酶的最佳培养基为豆饼粉2.00%、麸皮3.00%、玉米粉4.00%、Na2HPO4·12H2O 0.40%、KH2PO4 0.03%、CaCl2 0.10%、NaCO3·10H2O 0.10%;最适发酵条件为500mL三角瓶装液量70mL,接种量5%,培养基起始pH值6.0或9.0,转速190 r·min-1,温度25℃,发酵时间42h.