新疆陆地棉SSR标记指纹图谱构建和杂种纯度鉴定研究

以新疆近50年来的50个陆地棉种质资源及品种为试材,从50对SSR引物中筛选出10对多态性好的引物,就可以建立新疆陆地棉品种的指纹图谱,每对引物可以检测到1～4个数目不等的多态性片段(allele), 10对引物共检测到27个多态性片段,平均为2.7个,片段大小介于85～300 bp.从10对引物中随机挑选了3对引物对当前新疆主栽品种进行了指纹图谱构建和杂交种纯度鉴定的实践验证.     

新疆主栽骨干棉花品种指纹图谱构建及纯度鉴定

【目的】构建新疆主栽骨干棉花品种的指纹图谱,分析棉花品种纯度,为棉花品种提供分子鉴定依据。【方法】以典型代表性的新疆北疆早熟棉花主推骨干棉花品种为材料,利用SSR分子标记技术从1 000多对SSR引物中筛选出稳定性好、多态性高的25对核心引物构建指纹图谱,从核心引物中筛选10对引物作为标记,分析4个棉花品种的纯度。【结果】检测到等位基因数70个,每个标记检测到的等位基因数介于2~7个,平均2.8个;引物多态信息量(PIC)值介于0.169 0~0.872 9,平均值为0.688 3;利用4个特征引物将4个棉花品种一次性完全区分开,构建供试品种的指纹图谱;利用10对引物检测4个品种的纯度,新陆早6号纯度变化范围85%~100%,系62纯度变化范围95%~100%。【结论】构建了4个棉花品种的指纹图谱及鉴定纯度,系62号纯度最高,为99.5%,新陆早6号纯度最低,为92.0%。     

春性双低甘蓝型油菜杂交种和亲本指纹图谱构建及杂交种纯度鉴定

从140对SSR引物中筛选出13对多态性好的引物,构建了14份材料的DNA指纹图谱,筛选出青杂2号、青杂5号共显性SSR标记,检测了青杂2号、青杂5号大田抽样F1群体L15、L41的纯度。结果表明SSR标记鉴定检测方法比大田检测更快更准确。     

DNA指纹图谱在玉米杂交种真伪及纯度鉴定中的应用

讨论了玉米DNA指纹图谱的不一致性和外部性状表现之间的对等性或等价性,并对DNA分子标记技术信息的稳定性与真实性进行了分析。认为大多数玉米SSR标记并非基因内标记,同时玉米的基因组序列极其庞大,因此,个别SSR引物多态性并不能辨别被测自交系或单交种;目前,生产上改良品种较多,改良品种与被改良品种之间极为相近,这就难以利用SSR标记将其区分。提出在构建玉米杂交种与亲本的DNA指纹图谱、筛选SSR引物时,尽量选择重要农艺性状的基因内标记或与其紧密连锁的标记,从而增加杂交种纯度及真伪辨别的准确性和有效性,经多次反复摸索建立了最佳技术体系。     

西南常用玉米自交系SSR指纹图谱构建

本文对西南地区目前在生产上正在使用的73份(次)玉米自交系进行了SSR分析。从96对引物中筛选到多态性较丰富的20对引物，利用其中的233、250、265、277、286、290等6个核心引物的指纹组合将供试自交系完全区分开来，构建了西南地区常用玉米自交系的DNA指纹图谱。实验表明。利用SSR技术进行玉米自交系鉴定是可行、有效的。     

两系超级稻丰两优四号指纹图谱构建及纯度快速鉴定

为加强两系超级稻丰两优四号的品种质量控制,打击假冒伪劣,该研究利用SSR分子标记技术构建丰两优四号的指纹图谱,筛选适用于该品种的SSR特征引物,并利用纯度SSR快速鉴定技术体系鉴定丰两优四号的纯度。结果表明:在48对标准SSR引物中,有19对引物在丰两优四号亲本间具有多态性,杂交种呈现双亲互补带型,可用于该品种纯度鉴定;利用SSR快速鉴定技术鉴定丰两优四号样品纯度的结果表明,引物RM224和RM336不仅能区分母本、父本混杂,还能鉴定多种串粉和机械混杂,是对丰两优四号纯度鉴定较为适宜的特征引物。     

玉米杂交种SSR标记纯度鉴定方法研究

以常规种子贮藏蛋白质电泳技术难以鉴定纯度的4个玉米杂交种、21个自交系和9对玉米SSR位点引物为材料,运用SSR分子标记技术分别筛选出适合这些不同杂交种纯度鉴定的SSR位点引物,建立了一套仪器设备要求相对较低、程序简单、较为快速地利用SSR标记进行玉米杂交种纯度鉴定的技术规程,并对利用SSR标记进行玉米杂交种纯度鉴定的可行性进行了分析。     

20个骨干玉米自交系的SSR指纹图谱构建

本实验利用80对SSR引物对20个玉米自交系进行扩增,综合考虑扩增带的清晰度及多态性、条带多少、引物重复性高低,筛选出Phi080,Phi123,Umc1061,Phi126,Phi065,Dupssr13,Phi102228,bnlg240,Phi083等9对引物,构建了20个玉米自交系的指纹图谱。其中有7个材料各用1对引物就可确定其特征性谱带,有3个材料各需用2对引物组合就能区分,有2个材料需4对引物组合方能予以有效区分,其余材料则需8对引物组合才可区分。本实验还对这9对引物的重复性作了验证,再次证明利用SSR标记构建玉米自交系指纹图谱是可行的,也是可靠的。     

沃玉964玉米品种SSR指纹图谱的构建

以玉米品种沃玉964及其亲本为试验材料,进行了沃玉964玉米品种SSR指纹图谱的构建研究。结果表明,从72对玉米SSR引物中筛选出在沃玉964双亲间多态性好、重复性高的6对引物(分别为Phi090、umc2105、bnlg2305、umc1125、phi065和umc1506),可用于沃玉964的真实性检测,同时可为鉴定种子纯度提供参考。该方法准确可靠、实用性强,为生产上沃玉964真实性的快速、有效鉴定提供了科学依据。     

应用SSR标记技术鉴定玉米杂交种的纯度

以利用常规盐溶蛋白电泳技术难以进行纯度鉴定的强盛1号玉米杂交种及相应亲本自交系和6对玉米SSR位点引物为材料,筛选出适合该杂交种纯度鉴定的SSR位点引物,结果表明,bilg 116引物的扩增产物呈现双亲互补的特征谱带,易于区分杂交种和亲本自交系。并通过对单子粒DNA提取等技术环节的改进,建立了一套简单、快速、准确、可靠的种子纯度鉴定方法。     

中国玉米审定品种标准SSR指纹库的构建

【目的】对数量庞大的已知玉米品种构建可共享的作物品种标准DNA指纹库。【方法】基于荧光毛细管电泳检测平台和植物品种DNA指纹库管理系统,利用筛选的40对SSR核心引物对3 998份中国玉米审定品种标准样品进行建库,通过多实验室、多检测平台进行建库数据的质量评估。【结果】绘制了40个玉米建库引物的等位基因频率分布图作为每个引物的特征图谱,在建库试验中发挥了相当于参照样品的作用。形成了一套十重荧光毛细管电泳组合,并在SSR指纹分析器中建立了一套系统默认PANEL作为不同实验室建库时的标准PANEL。统计玉米审定品种指纹库构建的试验情况,每份样品具有2—5套原始试验数据及对应的指纹图谱,其中61%的样品做了2组独立试验,33%的样品做了3组独立试验,最终建成的标准指纹库累计缺失和差异位点仅占0.2%,数据完整性达到99.8%。在不同实验室、不同电泳检测平台的评估结果表明,同一荧光电泳检测平台上获得SSR指纹数据一致性高,而不同的电泳检测平台获得的数据存在一定偏差,为实现不同实验室的SSR指纹数据共享,需要统一荧光引物、分析软件及电泳检测平台。对所有审定品种指纹数据进行整体两两比较,表明中国玉米审定品种之间差异比较大,品种间差异位点百分比集中在80%—95%(占78.28%),品种间差异位点百分比在50%以上的已达到99.21%,而低于20%的只有0.09%;对玉米审定品种杂合率水平进行分析,平均品种杂合率达到64%,主要集中在50%—80%(占89%)。通过玉米品种标准指纹比对服务平台(网址:http://www.maizedna.org/)实现了指纹库的共享。【结论】形成了构建作物品种SSR指纹库的标准化程序,构建了3 998份玉米审定品种的SSR指纹库,通过多实验室联合比较试验,保证建库数据的准确性和数据库的可共享性;建立了玉米品种标准指纹比对服务平台网站,实现玉米审定品种指纹库在全国种子检验系统的共享。     

玉米杂交种纯度鉴定方法

玉米杂交种纯度是检验种子质量的决定性指标,因此纯度鉴定尤为重要,概述了玉米杂交种纯度鉴定的几种常用方法。     

SSR分子标记方法鉴定杂交向日葵品种纯度研究

通过对向日葵总DNA提取方法的比较、PCR扩增反应体系和程序的筛选、电泳检测方法的优化,以15个杂交组合为材料,从165对引物中筛选出扩增带型稳定、多态性丰富的8对核心引物。最终建立了一套适用于杂交向日葵品种纯度鉴定的技术体系。     

SSR标记在油菜隐性核不育杂交种的纯度鉴定研究

[目的]利用SSR标记对油菜隐性核不育杂交种的纯度进行鉴定。[方法]以贵州省油菜科学研究所选育的甘蓝型油菜"油研系列"为材料,利用简化的SSR标记技术对制种样品进行纯度分析。[结果]筛选出了2对条带清晰、易于统计的SSR引物;大田生产F1杂种群体的纯度鉴定结果表明,SSR鉴定的结果清晰可辨,可信度高,能较准确地反映种子的真实纯度。[结论]该试验为SSR标记在油菜种子纯度鉴定中的进一步应用奠定了基础。     

利用SSR标记对甘蓝型黄籽油菜贵油519杂种纯度鉴定

在用SSR(简单重复系列)标记构建了53份甘蓝型黄籽油菜种质资源的DNA指纹图谱的基础上,筛选出一个对黄籽油菜杂种贵油519及亲本具有共显性的SSR引物Ra2A05b,鉴定大田生产F1杂种群体的纯度,并对比田间调查的鉴定结果表明,SSR标记鉴定可以识别更多的非杂交种单株,如因微粉导致的自交、花粉污染、机械混杂等带来的非杂交种单株。就SSR标记鉴定杂交种纯度鉴定的可行性和优点进行了讨论。     

贵州48个玉米杂交种及其亲本SSR指纹图谱的构建与分析

从北京市农林科学院筛选出的100对玉米SSR核心引物中选取20对,利用SSR分子标记技术,构建了贵州省2000年以来审定的48个玉米杂交种及其亲本的数字化指纹图谱.图谱构建所用的20个SSR标记每个位点的等位基因数平均为5.3个,多态信息量平均为0.66,标记索引系数平均为3.58,多态性丰富.图谱中,来自不同地区或不同育种家的同名自交系,有的指纹图谱较一致,有的有差异,有的扩增片段大小不同,有的扩增片段数目也不同;杂交种的谱带表现为偏母型、偏父型、杂种型和双亲互补型4种类型.经验证,建立图谱时所用的材料符合最小品种内变异的原则,表明所建立的图谱是准确的.该图谱对于玉米品种及其亲本的纯度鉴定、真实性鉴定以及维护育种家的权益有一定的应用价值.     

冈杂棉8号SSR数字指纹图谱的构建

利用32对SSR引物对冈杂棉8号及其亲本进行多态性检测,共有13对引物在2个亲本间具有多态性,这些引物在两亲本间扩增出大小不同的带,且这些标记位点在F1中均表现为杂合带,为共显性标记。将这13对引物在亲本和杂交种间扩增检测得到的01带型数据转换成十进制数据,构建了冈杂棉8号及其亲本的数字指纹图谱,为杂交种的真伪鉴定和纯度检测提供了方法。采用多对引物构建的杂交棉数字指纹图谱,能为冈杂棉8号的真伪鉴定、纯度检测及亲本提纯等工作提供更加准确的技术指导。     

应用SSR标记技术鉴定强盛16号玉米单交种纯度

试验以强盛16号玉米单交种及相应亲本自交系和20对玉米SSR位点引物为材料,筛选出了适合该杂交种纯度鉴定的SSR位点引物。结果表明,bnlg2331引物的扩增产物呈现双亲互补的特征谱带,易于区分杂交种和亲本自交系。并通过对单籽粒DNA提取等技术环节的改进,建立了一套简单、快速、准确、可靠的种子纯度鉴定方法。