鸡蛋清中3种蛋白质的连续化提取工艺初步研究

[目的]研究鸡蛋清中溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的分离提取工艺。[方法]采用硫酸铵沉淀和离子交换层析分离三种蛋白质,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测其纯度。[结果]层析纯化后 SDS-PAGE检测其纯度达到电泳纯,溶菌酶的比活由144.13 U/mg提高到2235 U/mg,纯化倍数达15倍,回收率为15.76%;卵转铁蛋白抑菌率为48.84%。[结论]该方法分离溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白,工艺路线简单、快捷、成本低,适用于工业生产。     

鸡蛋清中溶菌酶的分离提取

采用二次硫酸铵沉淀和离子交换层析透过法分离溶菌酶,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS\|PAGE）检测其纯度,研究鸡蛋清中溶菌酶的分离提取工艺。鸡蛋清原液用Tris\|HCl缓冲液稀释5倍,4℃下静置6 h,经50%硫酸铵沉淀后收集上清,再经80%硫酸铵收集沉淀后溶于pH 90的Tris\|HCl后经Q\|Sepharose FF阴离子交换层析直接在透过液中一步就可分离得到SDS\|PAGE电泳纯的溶菌酶,酶比活由14413 U·mg-1提高到2 235 U·mg-1,酶活提高超过15倍,回收率为1576%。通过硫酸铵两级沉淀后只需收集Q\|Sepharose FF阴离子交换层析的透过液即可分离得到溶菌酶,同时还可一次性制备其他中性和酸性蛋白,简化了工艺,降低了生产成本。     

鸡蛋清中溶菌酶提取技术的研究

对鸡蛋清中溶菌酶的提取及纯化技术进行探究,从而获得纯度、活性、浓度均较高的溶菌酶。采用弱酸性阳离子交换树脂法提取,离心透析纯化,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。结果表明,用此方法提取的溶菌酶纯度较高,酶活力为7793U/mg。     

复方免疫增强剂中三种多糖的分离纯化初步研究

采用超声辅助提取法提取复方免疫增强剂中的多糖,以Sevag法除蛋白后分级醇沉得粗多糖PS1、PS2和PS3。粗多糖PS1、PS2和PS3上离子交换柱层析分离纯化,以0-2.0MnaC l溶液进行梯度洗脱得PS1A、PS2A和PS3A多糖组分,再经过Sephadex G-200凝胶柱层析分离得到三个主要多糖组分PS1A-Ⅰ、PS2A-Ⅱ和PS3A-Ⅲ。利用凝胶层析、纸层析及紫外分光光度法进行纯度鉴定,结果表明PS1A-Ⅰ、PS2A-Ⅱ和PS3A-Ⅲ为均一多糖。     

溶菌酶提取工艺及其在山核桃乳中的应用研究

[目的]研究制备溶菌酶的最佳工艺条件及其在山核桃乳中的应用。[方法]以鸡蛋清为原料,通过阳离子交换树脂法提取溶菌酶,采用正交试验确定制备溶菌酶的最适工艺条件,并将溶菌酶与甘氨酸和NaCl复配后作为防腐剂应用于脱脂山核桃乳饮料中。[结果]通过正交试验确定的最佳工艺条件为:蛋清树脂比5:1、pH值7.0、搅拌吸附4h,用1.0mol/LNaCl洗脱,洗脱液经超滤、浓缩后冷冻干燥得到溶菌酶成品。该试验最终酶收率为89.78%,酶活力为14817U/mg。将0.05%溶菌酶与0.30%甘氨酸和0.40%NaCl进行复配用于生产脱脂山核桃乳,其抑菌效果较显著,降低了山核桃乳的杀菌强度,延长了产品货架期。[结论]该工艺操作方便,适合溶菌酶的工业化生产;溶菌酶用于生产脱脂山核桃乳效果好。     

蛋白质组分的连续累进提取分析法

1895年Osdorne根据谷物蛋白质可溶解于不同溶剂的特点,首次提取分析了清蛋白(Albumin)、球蛋白(Globulin)、醇溶蛋白(Prolamin)和谷蛋白(Clutelin)四种蛋白质组分。1962年,Maes在前人研究的基础上,对提取所需的溶剂、浓度、提取速度和定氮方法进行了系统的筛选研究,提出了蛋白质组分的连续累进提取法和相应的凯氏定氮方法,并广为采用。该方法较离心法提取速度快,样本用量范围大,需用试剂种类少,准确度高,但试剂用量大,工作周期长,劳动强度大。本文根据现有设备,应用Maes的连续累进提取原理,提取分离各种蛋白质组分,再用自动定氮仪测定含氮量。     

蛹虫草中虫草素的提取与纯化工艺研究进展

介绍了蛹虫草中虫草素的提取分离和纯化工艺,对虫草素提取富集的主要研究进展进行了综述。指出目前对虫草素分离采用的主要方法是离子交换树脂法和硅胶柱层析法,对虫草素的主要检测方法是高效液相色谱法、色质联用法和毛细管电泳法。并对膜分离技术在虫草素提取分离上的应用进行了展望。     

蛋黄中卵黄油提取工艺的研究

研究了乙醇浓度、物料比、提取温度和提取时间对卵黄油提取率的影响.结果表明:当乙醇浓度85％、物料比7:1、提取温度55℃、提取时间15 min时,卵黄油的提取率为32.85％.     

银杏叶中蛋白质的提取工艺研究

为建立经济、简便、有效的银杏叶蛋白质提取方法,采用正交法对银杏叶中蛋白质进行提取,紫外分光光度法对其进行含量测定.结果表明:银杏叶蛋白质在λ=560 nm波长条件,在0.50～5.00 mg/mL的范围内线性关系良好,其标准曲线为y=0.0645x+0.0037,R2=0.998;银杏叶中蛋白质提取工艺为:料液比为1:...     

重组细胞色素P450 BM-3酶的表达条件及初步纯化研究

对重组细胞色素P450 BM-3基因工程菌的培养条件进行了单因素优化,确定了较佳的P450BM-3培养和表达条件:接种量1%,装液量100 mL/500 mL,发酵培养基加入0.1 mg·L-1FeCl3,OD578达到1.0左右时升温至42℃诱导,诱导时间为5 h.考察了DEAE-Sepharose FF与Resource Q 2种阴离子介质对分离纯化P450 BM-3的影响.结果表明,Resource Q纯化效果优于DEAE-Sepharose FF,通过AKTA explorer100对Resource Q分离条件进行了优化,0.3 mol·L-1、0.5 mol·L-1的两步NaCl阶跃洗脱,P450 BM-3纯度较高,活性收率为30.1%,纯化倍数为2.12.     

蓝孔雀蛋白粉的生产工艺研究

以蓝孔雀蛋白液为原料,采用自然发酵、费氏埃希菌发酵、面包酵母发酵以及葡萄糖氧化酶对其进行脱糖对比试验,并采用L9(34)正交试验设计对影响喷雾干燥的进料速率、进口温度、出口温度和转速4个因素进行优选.结果表明,蓝孔雀蛋白液脱糖效果最好的是葡萄糖氧化酶法;离心喷雾干燥工艺的最佳组合为A1B2C2D3,即进料速率10mL·min-1,进口温度180℃,出口温度90℃,转速18000r·min-1;蓝孔雀蛋白粉成品中蛋白质、脂肪、灰分和水分的含量分别为69.5%、0.79%、4.2%和4.1%,硫胺素和核黄素含量分别为54.79μg·100g-1和1130.00μg·100g-1.     

咸蛋清性能改善工艺研究

选取熟制温度(100、105、110、115 ℃)、熟制时间(30、60、90、120 min)进行单因素实验,研究其对咸蛋清蛋品脱模率的影响;选取淀粉种类(马铃薯淀粉、红薯淀粉、玉米淀粉)、淀粉添加量(1%、2%、3%)进行单因素实验,探索其对咸蛋清凝胶强度的影响。另以上述4因素为研究对象,以感官评分为依据,开展改善咸蛋清凝胶性能加工工艺的正交实验。结果显示,适当的熟制时间(90 min)和熟制温度(110 ℃)可获得理想的蛋品脱模率。在相同淀粉添加量下,蛋品凝胶强度以添加玉米淀粉的最高。添加1%马铃薯淀粉时获得的蛋品凝胶强度与新鲜鸡蛋清接近。正交实验结果显示,对卤蛋品质影响最大的是熟制温度,理论最佳工艺为熟制温度115 ℃,熟制时间120 min,添加马铃薯淀粉,添加量3%。     

Aspergillus oryzae reduces IgE binding ability of allergenic egg white proteins

Egg white proteins are one of the major allergens. The objective of this study was to investigate the effect of Aspergillus oryzae cultivation on IgE binding ability of egg white proteins. Effect of A. oryzae on egg white proteins was determined using ninhydrin method, SDS-PAGE, ELISA, fluorescence FITC labeling, MALDI-TOF-MS and LC-MS/MS analysis. Adding mycelium of A. oryzae ATCC 1011 and 16868 substantially reduced the IgE binding ability of acidified egg white after 24 h incubation. The binding capacity of egg white proteins to IgE in plasma from four egg allergy patients was almost completely lost after incubation with mycelium of ATCC 16868. Results from SDS-PAGE, free amino acid analysis, MALDI-TOF-MS and LC-MS/MS indicated that there was no substantial protein degradation during incubation. Therefore, the reduction of IgE binding ability of egg white proteins during A. oryzae treatment was probably due to a loss of ~1700 Da mass including a fragment of the ovomucoid N terminus.     

活化卵白蛋白对断奶仔猪结肠内SCFA的影响

为了研究活化卵白蛋白对断奶仔猪结肠内短链脂肪酸(short chain fatty acid,SCFA)的影响,选取54头20日龄健康仔猪,随机分为3个处理组。23日龄开始,Ⅰ组饲喂基础日粮+活化卵白蛋白10 mL·d-1·头-1,Ⅱ组饲喂基础日粮+啤酒酵母10 mL·d-1·头-1,Ⅲ组连续饲喂基础日粮10 d,28日龄断奶。仔猪在23,28,35,42日龄时,从每个重复中随机选1头屠宰,迅速结扎结肠两端,无菌收集结肠食糜,利用气相色谱法测定结肠内SCFA含量。试验结果表明: (1)仔猪28日龄时,与Ⅲ组相比,Ⅰ组仔猪结肠内乙酸(P＜001)、丙酸(P＜005)、丁酸(P＜005)和总SCFA(P＜001)含量升高,而异丁酸(P＜001)含量降低;与Ⅱ组相比,Ⅰ组仔猪结肠内乙酸(P＜001)、异丁酸(P＜001)和总SCFA(P＜001)含量升高;(2)仔猪42日龄时,与Ⅱ组、Ⅲ组相比,Ⅰ组仔猪结肠内乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸和总SCFA含量显著升高(P＜005);(3)随着仔猪日龄的增加,各组仔猪结肠内总SCFA含量均增加,但Ⅰ组增加最明显。由此看来,活化卵白蛋白可以提高断奶仔猪结肠内SCFA含量。     

蛋清源生物活性肽功能及其构效关系研究进展

禽蛋为人类提供了丰富的营养物质,如蛋白质、脂质和维生素等。蛋清蛋白不仅具有许多功能性质,通过酶法制备获得的蛋清肽还具有丰富的生物活性。然而,通过水解得到的蛋清源生物活性肽往往具有多种生物活性,且产量较低、结构差异较大,难以获得普适的活性-结构关系结论。本文以鸭蛋蛋清蛋白和鸡蛋蛋清蛋白为对象,综述了蛋清肽的主要生物学功能如降血压、抗氧化、促进矿物质吸收、降血糖、调节肠道健康等,探讨了其结构-活性关系,并对蛋清源生物活性肽的后续深入研究进行了展望,以期为蛋清蛋白的高值化利用提供参考。     

蝉拟青霉胞内几丁质酶、蛋白酶、溶菌酶研究

通过对8株蝉拟青霉Paecilomyces cicadae胞内几丁质酶、蛋白酶、溶菌酶的活力测定,从中筛选出酶活力高的菌株为GZDXIFR3716,并对3种酶的产酶条件进行了研究.结果表明,GZDXIFR3716产3种酶的最佳发酵培养基组成为葡萄糖20g·L-1、酵母膏5g·L-1、K2HPO41g·L-1;其几丁质酶、蛋白酶和溶菌酶含量最高的发酵时间分别为48h、60h和84h;而3种酶的最适反应温度分别为50℃、40℃和40℃;3种酶的最适反应pH值分别为6.0、7.0和5.0.     

中华蜜蜂卵显微注射试验初报

用显微注射技术给１日龄中华蜜蜂（Ａｐｉｓｃｅｒａｎａｃｅｒａｎａ）卵注射石蜡油,置于（３４±１）℃恒温箱中让其继续发育至孵化．设置只移植不注射石蜡油的卵和在巢房块中的卵分别作对照．注射石蜡油的中蜂卵平均孵化率为３５．１３％;只移植不注射石蜡油的中蜂卵平均孵化率为８０．７４％;在原巢房中的中蜂卵平均孵化率为９９．３３％．经注射石蜡油的中蜂卵胚胎发育时间稍有延长．     

凡纳滨对虾Toll受体和溶菌酶mRNA组织表达的差异研究

采用荧光定量PCR技术,检测了凡纳滨对虾不同组织(血淋巴、鳃、肌肉和肝胰腺)中Toll受体和溶菌酶mRNA的相对表达量。结果表明:凡纳滨对虾Toll受体和溶菌酶mRNA在不同组织间的表达量存在显著差异。Toll受体mRNA在各组织中的相对表达水平由高到低顺序依次为血淋巴>鳃>肌肉>肝胰腺。溶菌酶mRNA表达水平则依次为血淋巴>鳃>肌肉>肝胰腺,但血淋巴和鳃之间无显著差异。溶菌酶mRNA和Toll mRNA表达量重复测定间的变异度在血淋巴和鳃组织间无显著差异。表明鳃和血淋巴是检测凡纳滨对虾Toll受体和溶菌酶mRNA的相对表达量的理想实验材料。研究亮点:Toll受体能够将异物入侵的信号从细胞外传递到细胞内并引起胞内信号级联反应产生各种免疫效益因子,因此其表达水平一定程度上可以反映对虾对病原入侵的灵敏性。溶菌酶活性是评判对虾免疫抗菌能力的重要指标。研究Toll受体和溶菌酶基因表达的组织差异性,可以为后续开展对虾营养免疫学研究中免疫相关基因检测时实验材料的选取提供理论基础。     

肉鸭种蛋重与蛋形指数对孵化效果的影响

将肉鸭种蛋按蛋重、蛋形指数大小各分为5组,在相同条件下孵化.结果表明,蛋重、蛋形指数对受精率和早期死胚率无显著影响(P>0.05),蛋重为85.5～100.6g(D,E)组、蛋形指数为1.15～1.25(F)和1.59～1.69(J)组中后期死胚率显著升高;蛋重为75.3～85.4g时,受精蛋孵化率和入孵蛋孵化率最高,分别为91.4%～95.7%和85.3%～89.3%;蛋形指数为1.26～1.47时,受精蛋孵化率和入孵蛋孵化率最高,分别为90.9%～97.2%和86.7%～93.3%.