南瓜杂交种纯度RAPD标记鉴定研究

为快速高效鉴定南瓜杂交种纯度,利用RAPD分子标记技术对南瓜新品种"中青N3"杂交种进行分子鉴定。结果表明:在6个RAPD引物中,筛选出1个R2引物,在父本"钻17-1"扩增出1 000 bp的条带,在母本"钻17-2"扩增出1 500 bp的条带,在杂交种"中青N3"扩增出500 bp和750 bp的2条互补带型。R2引物适于鉴定南瓜"中青N3"杂交种的纯度。RAPD鉴定结果的准确性高于大田鉴定结果。该研究结果为生产应用提供了科学依据。     

枇杷品种早钟6号与解放钟、森尾早生亲缘关系的RAPD分析

应用43个随机引物对早钟6号、解放钟和森尾早生3个枇杷品种基因组DNA进行RAPD分析,共得到255条扩增带,其中82条为共同带,单态率达32.16%,表明3个品种亲缘关系密切.对子代与父、母本扩增带中共同带的分析表明,双亲的RAPD特征均在子代中表现.用引物S71进行RAPD分析,3个品种共检测出7条扩增带,其中780bp的条带是母本解放钟的特征带,1500bp的条带是父本森尾早生的特征带,在子代早钟6号中这两条特征带同时存在,且结果稳定,在DNA水平上证实了早钟6号是解放钟、森尾早生的有性杂交后代.     

用RAPD标记鉴定甘蓝型油菜杂种H9909的纯度

通过对杂交组合H9909两亲本的指纹图谱分析，初选出4个引物S374、S1334、S1365和UBC523用于杂种纯度鉴定。引物S1334和UBC523在两亲本中均扩增出特异带，引物S374和S1465能扩增出父本标记带。以两亲本和手工杂种F1为模板对上述4个引物再一次进行RAPD扩增，S1334并没有在F1的RAPD图谱产生理想的双亲型或偏父型标记带，UBC523在F1扩增得到的父本标记带和在母本中扩增的标记带大小相近，不易辨别；引物S374、S1365均能使F1扩增出父本的特异带，进一步确定引物S374和S1365可用于杂种鉴定。引物S374的RAPD标记将待鉴定100个单株中的5个不育单株标记为假杂种，与田间育性调查的结果完全一致。引物S1365的RAPD分析结果显示，除上述5个不育单株外，另外2个可育单株亦为假杂种，可能由外来花粉串粉或机械混杂引起。     

用酯酶同工酶和AFLP标记鉴定甘蓝型油菜"中油杂2号"的种子纯度

对甘蓝型油菜“中油杂2号”杂交种及其父母本的酯酶同工酶分析结果显示，父本和杂种F1比母本多一条迁移率(Rf)为0．8的条带，该特征条带可用来进行杂种纯度鉴定。在“中油杂2号”的父母本问筛选了20个AFLP引物组合，发现E33M59不仅扩增产物多态性好，而且有3条母本特异带和7条父本特异带在杂种F1中出现，因此该引物组合被用来进行“中油杂2号”种子纯度的鉴定。对5个“中油杂2号”样品进行纯度鉴定的结果表明，酯酶同工酶和AFLP标记鉴定与田间种植鉴定的结果相吻合。     

利用RAPD和ISSR 2种分子标记鉴定西瓜杂交种的遗传纯度

为了鉴定西瓜杂交种抗病苏蜜和苏蜜5号的遗传纯度,利用RAPD和ISSR 2种分子标记技术对F1杂种及其相应亲本的基因组DNA进行了分析。结果显示:在抗病苏蜜杂交种的分析中,对450个随机RAPD引物进行了筛选,其中139个引物产生了235个多态性条带,平均每个引物扩增出了3.12个条带,多态率为16.7%。139个多态性引物中,3个引物产生了母本特异标记,4个引物产生了父本特异标记,2个引物产生了共显性标记。引物JAASRP388的扩增图谱显示产生了1个母本特异标记JAASRP3881200及2个父本特异标记JAASRP3882010、JAAS-RP388500。引物JAASRP410的扩增图谱显示也产生了1个母本特异标记JAASRP410625及2个父本特异标记JAAS-RP4102000、JAASRP4101000。在杂交种苏蜜5号及其亲本的分析中,100个RAPD引物产生了325条扩增带,其中27个RAPD引物成功地扩增出了37个多态性条带,平均多态率为11.38%。在27个多态性RAPD引物中,4个引物产生了母本特异标记,1个引物产生了父本特异标记。此外对62个ISSR引物进行了检测,45个引物成功地产生了188个扩增条带,每个引物平均产生了4.18个条带,15个为多态性引物产生了23条多态性带,平均多态率为12.23%。在ISSR检测中,只发现了2个引物能产生母本特异条带。研究结果说明,不管是1个母本特异引物和1个父本特异引物组合还是利用1个共显性引物都是杂交种种子质量检测过程中一个非常有效的工具。     

利用SCAR-PCR检测杂交油菜"蜀杂9号"的杂种纯度

用两个分别能在“蜀杂9号”父、母本之间稳定产生多态性的随机引物S18和S31,对父、母本DNA样品进行RAPD扩增,将得到的特异标记片段S18750和S31550进行回收、克隆和测序。根据测序结果设计序列特异性扩增(SCAR)引物SZ9SP1和SZ9SP2,将“蜀杂9号”的亲本RAPD标记转化为序列特异的SCAR标记。当用两对引物分别扩增杂种F1代单株总DNA时,能分别获得父、母本特异序列扩增带,表明获得的SCAR标记能可靠地用于“蜀杂9号”杂种纯度的检测。     

运用SRAP分子标记对胡麻杂交种纯度的鉴定研究

以胡麻杂交种陇杂1号、陇杂2号及其父母本自交系为试材,从9对引物中筛选出2对M10/E3和M2/E5分别进行SRAP分析。结果表明,在陇杂1号母本1S和父本873中均能扩增出至少1条特征带。陇杂1号与父母本相比均有差异带,陇杂2号中产生双亲互补带型。这2对引物均可应用于陇杂1号和陇杂2号的纯度鉴定。     

杂交棉苏杂118的SSR指纹图谱构建

筛选了217对SSR引物,共有12对引物在两个亲本间具有多态性,其中有7对引物在两亲本间扩增出大小不同的带,且这些标记位点在F1中均表现为杂合带,为共显性标记;另外5个引物的F1带型与母本或父本一致,为显性标记。构建杂交棉苏杂118的SSR指纹图谱,为该品种的真伪鉴定和纯度检测提供了分子依据。     

SSR标记技术鉴定‘新食葵7号’品种纯度的研究

以‘新食葵7号’及其双亲的DNA为模板,对100对SSR引物进行筛选,以期为生产应用提供准确、便捷的杂交种种子纯度鉴定方法。SSR多态引物标记521在‘新食葵7号’母本产生特异条带大小为482bp,父本为447bp;标记563在母本上特异条带大小为352bp,父本为384bp,分子鉴定的纯度和田间鉴定纯度基本一致,通过SSR引物筛选,得到可以区分父本、母本和杂交种的标记引物521和563,这2个引物标记可有效鉴定‘新食葵7号’杂交种种子的纯度。     

利用RAPD技术分析小麦强优势组合亲本遗传差异

利用RAPD技术对小麦（黑麦）异源重组系异源2号组配的22个强优势杂交组合的亲本进行了遗传差异检测分析。结果表明,被测材料间RAPD标记多态性较高.61个随机引物中,37个引物（占60．65％）扩增产物具多态性,共扩增得到181条带。其中,105条带具多态性,占58．01％。每个引物可扩增出1～7条多态性带,平均可扩增2.8条多态性带。父本异源2号与其强优势组合母本间RAPD遗传距离较大,平均为0．43,聚类结果也显示其单独聚为一类。由此证实,异源2号与母本间确实在分子水平上存在较大遗传差异。RAPD遗传距离与亲本各性状表型差异相关均不显著,与F1各性状杂种优势间除抽穗期外相关也均不显著。据此认为,难以直接利用RAPD遗传距离预测杂交组合的杂种优势。     

RAPD鉴定番茄一代杂种遗传纯度的研究

以番茄优良一代杂交种毛粉８０８、毛粉８１８和强选一号为材料,提取ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ分析,在３００个ＲＡＰＤ随机引物中筛选出了可鉴定３个品种一代杂种遗传纯度的特异性引物。其中Ｓ１０１９,Ｓ１３８８和Ｓ１４２２可用于这３个品种的纯度鉴定;Ｓ１０７２用于毛粉８０８和毛粉８１８的纯度鉴定;Ｓ１３８８用于区分３个品种的父本和子代。     

番茄抗晚疫病基因ph-3的RAPD及CAPS标记

将番茄抗晚疫病ph-3基因已有的RAPD特异片段进行克隆、测序.根据该测序结果设计SCAR引物对抗病亲本、感病亲本、抗病池、感病池、F_1个体进行扩增,均获得一条592bp的特异片段.感病基因型和杂合抗病基因型存在Xba Ⅰ酶切位点,酶切后分别产生了261bp、193bp和95bp以及592bp、261bp、193bp和95bp的特异性片段,纯合抗病基因型无此酶切位点,酶切结果仍为592bp的产物.这些片段能成功区分抗病材料、感病材料和F_1个体,很有可能是与ph-3基因连锁的CAPS标记.     

"夏光"、"早夏16"甘蓝杂交种DNA指纹图谱的构建

用SDS法提取甘蓝(Brassica oleraceavar.capitata)杂交种“夏光”、“早夏16”及其各自亲本的基因组DNA,通过SSR、RAPD两种分子标记方法构建其DNA指纹图谱用于纯度鉴定。利用30对甘蓝SSR引物和50个适用于甘蓝的RAPD引物,以各杂交种及其亲本的基因组DNA为模板组合进行筛选,结果显示:多数SSR引物对两组合扩增带型一致,未能建立SSR指纹图谱;通过RAPD标记方法筛选出能鉴定两杂交种纯度的引物分别为S15、S42、S147和S42、S78、S88,其中引物S42对两组合均能扩增出特异的RAPD指纹图谱,并将RAPD指纹图谱转变为相应的数字指纹。     

利用ISSR分子标记鉴定苦瓜杂交种纯度

【目的】采用ISSR分子标记对苦瓜杂交一代品种秀玉1号纯度进行鉴定,为生产上提高苦瓜新品种纯度鉴定效率提供参考。【方法】利用ISSR技术和91条引物,对苦瓜品种秀玉1号及其亲本的DNA指纹进行分析。【结果】从91条引物中筛选出两条特征引物ISSR-845和ISSR-891,能同时扩增出F1代及其父母本的多态性条带510 和300 bp。其中,ISSR-845能够区分父本机械性混杂,ISSR-891能够准确区分母本自交系与杂种F1代;经群体验证,该标记与田间鉴定结果高度一致。【结论】ISSR技术具有准确、简便、高效、实用性强等优点,可用于生产上苦瓜种子纯度的快速鉴定。     

Detection of RAPD Markers Linked to Gene 1X1 in Soybeans

Near-isogenic lines of soybean lipoxygenase, which contain genes Lox, lx1, lx2, lx3, lx1.3, lx2.3,respectively, were used for polymorphic analysis by RAPD technique.520 10-mer-oligonucleotide primers were screened, and thirteen primers showed polymorphism among near-isogenic lines.There were six primers showed special polymorphic bands among lines lx1 and lx1.3. Especially,primer S352 presented the stable results in which a 900 bp band was found in the lines lx1 and lx1.3, and primer S352900 was detected with F2 generation of cross 96P11×Century-1, indicated primer S352900 could be identified as a RAPD marker linked to gene lx1 in soybeans, the distance of linkage was 7.6 cM.     

中国落叶松杨栅锈菌4个流行小种的RAPD标记

以156条随机引物,对目前中国落叶松杨栅锈菌(Melampsora larici-populina Kleb)的主要优势菌系进行了RAPD片段的筛选,寻找到了1号3、号4、号5、号4个流行生理小种的特异性RAPD标记。经过多批次扩增,引物S205和S284分别得到1号生理小种长度约450和760 bp的特异条带,S25得到3号生理小种长度约1440 bp的特异条带,S51和S286得到4号生理小种长度约970和1020 bp的特异条带,S23和S96分别得到5号生理小种长度约750和780 bp的特异条带。此结果表明,通过寻找落叶松杨栅锈菌生理小种的特异性RAPD片段,能够建立起中国落叶松杨栅锈菌生理小种的分子检测体系。     

Identification of <Emphasis Type="Italic">Habrobracon hebetor</Emphasis> Populations Using RAPD Markers

It was found that food preferences and conditions of breeding of Habrobracon hebetor laboratory populations vary considerably. In this regard, it is necessary to identify populations within the studied species using DNA markers: an effective and reliable means for assessing the genetic differences between samplings of this insect species. A molecular genetic analysis of two different geographic populations of the Habrobracon hebetor entomophage (from Krasnodar, Russia, and Chimkent, Kazakhstan) was carried out using RAPD markers; 21 RAPD primers were tested for specificity to H. hebetor DNA. Five RAPD primers (OPA05, OPA10, OPB01, OPB04, and UBC519) were identified that have high specificity and the ability to differentiate H. hebetor populations. DNA markers that are specific for the Krasnodar and Chimkent entomophage populations and that can clearly identify them were revealed: for the Krasnodar population, RAPD markers with a molecular weight of 550 bp (UBC 519); 500 and 700 bp (OPA05); 1100, 1200, and 1300 bp (OPA10); 220 and 800 bp (OPB04); and 880 bp (OPB01); for the Chimkent population, 400, 600 and 1200 bp (UBC519); 600 and 950 bp (OPA10); and 800 bp (OPB01). It is concluded that these RAPD primers can be used for identification and differentiation of other H. hebetor populations.     

滩地13个杨树无性系遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD分子标记手段,研究杨树无性系的遗传多样性。在探讨杨树叶片基因组DNA提纯方法和优化PCR扩增反应体系的基础上,采用18个引物对13个杨树无性系的基因组DNA进行扩增;每个引物扩增的DNA片段数为1～14个,共产生126条带,其中多态带53条,占42%,平均每个引物扩增出3条多态带。结果表明:通过对126条谱带的聚类,分析了供试杨树无性系的系统发育,并通过比较各品种间的特异带或特征带的差异进行无性系鉴别和测定,运用特殊谱带,建立了杨树无性系的分子检索表。     

甜菜离子注入诱变高糖突变体的RAPD分子标记筛选

以离子注入诱变技术获得的甜菜高糖突变体S10和未做诱变处理的F104及F2代85株单株为研究材料,提取DNA并进行RAPD分析,选取800条RAPD随机引物对S10和F104进行扩增,结果表明,S10和F104之间在DNA水平上存在差异.从800条随机引物中筛选到19条引物在S10和F104中存在较稳定差异,存在差异的引物占所用引物数的2.3;,该研究利用S10和F104做亲本构建分子标记作图群体,进而为定位高糖性状基因或QTL奠定了基础.     

RAPD技术在志贺菌及沙门菌鉴别中的应用

以鸡鲍氏志贺菌、鸡白痢沙门菌和痢疾志贺菌为研究对象,分别提取基因组DNA,利用6条随机引物以随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因组DNA进行了分析.结果表明,4条随机引物能较好地在这3种菌中检测到多态性分子标记.共扩增出了59个DNA片段,其中3个菌株共有的谱带有7条,而显示多态性的片段有52条,占88.1%.引物P6的扩增图谱可用于3株细菌的鉴别.在对3株细菌扩增中发现,鸡鲍氏志贺菌与人痢疾志贺菌的扩增条带相同率达67%,但各有自己的特征性谱带.鸡沙门菌与志贺菌的扩增谱带相差甚远.