猪血超氧化物歧化酶联合提取工艺及其活性检测研究

[目的]研究猪血超氧化物歧化酶（SOD）与其他生物活性物质的联合提取工艺,为充分利用猪血资源和规模化生产SOD提供技术基础。[方法]从猪血中分离纤维连接蛋白、免疫球蛋白和血红素后,提取SOD。通过优化邻苯三酚的用量、SOD样液用量、反应温度和缓冲液pH值,对邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的条件进行了优化。按照优化后的条件测定联合提取的SOD的比活力。[结果]SOD活性测定的优化条件为50mmol／L邻苯三酚7μl,50mmol／L Tris—HCl（pH8．2）3ml,反应温度为25℃,SOD样液添加量为10μl。联合提取的SOD的比活力达到5056U／mg蛋白质。[结论]通过现代生物工程集成技术从猪血中分级提取了4种生物活性物质,所提取的SOD具有较好的活性。     

酵母菌中核黄素含量的测定

目的是寻找一种测定酵母菌中核黄素含量的简单快速方法,并进行条件摸索。用紫外分光光度计,在200～700nm之间对标准品进行光谱扫描,确定维生素(B2VB2)标准品的最大吸收波长;利用超声波提取法提取样品VB2,再对样品进行测定。测得酵母菌VB2含量为0.9889μg·mL-1。测定的VB2含量结果满意,实验可重复性好,较HLPC、荧光法等方法简单、易操作;得到满意的试验结果。     

冰醋酸法提取猪血红素的研究

[目的]合理利用动物血液,优化冰醋酸提取猪血红素的方法.[方法]试验以新鲜猪血为原料,采用冰醋酸法提取新鲜猪血中的血红素,考察冰醋酸的添加量、反应温度、反应时间、氯化钠添加量等因素对血红素提取的影响.[结果]试验表明,冰醋酸法提取猪血红素的最佳工艺为：冰醋酸添加量为血球4倍,氯化钠添加量为血球的2.4％,反应时间30 min,反应温度为95℃,此条件下提取的血红素含量为40.2％.[结论]研究可为猪血资源的合理开发利用提供理论依据.     

育肥猪血清中猪细小病毒16WS株的分离与鉴定

从一育肥猪早、中期生产状况差的猪场收集猪血清214份,采用猪细小病毒(PPV)特异性检测引物进行PCR检测,选取1份阳性血清接种猪睾丸细胞(ST)进行PPV分离、部分生物学特性研究,以及PPV部分基因序列分析。结果表明:在15、16、17、18、22周龄猪血清中均检测到PPV,检测阳性率分别为10%、40%、20%、15.4%、9%,而从2~14及24周龄的猪血清中没有检测到PPV;病毒分离和部分生物学特性研究结果表明,从血清中分离的PPV在ST细胞上传到第5代能够出现较稳定的细胞病变(CPE),病毒血凝效价为28;PPV部分基因序列与GenBank收录的PPV毒株序列同源性在98%以上,其中与2012年西北农林科技大学时乐[1]分离的YL毒株同源性高达99.1%。以上结果证实本研究分离到PPV,且说明PPV在采样猪场的保育后期和育肥前、中期猪血清中具有较高的阳性率。     

牡丹丹皮提取物的纯化研究

为了研究牡丹根皮提取物的纯化方法与纯化效果,试验以水蒸气蒸馏法获得的丹皮提取物为样品,用两相溶剂萃取法与酸碱分离法相结合对其纯化重结晶;用薄层层析法与紫外分光光度法和气相色谱质谱法相结合对纯化物进行分析;用气相色谱质谱法测定纯化物的含量.结果表明,两相溶剂萃取法与酸碱分离法相结合使样品中丹皮酚的纯度达到93%,然后用重结晶法,使丹皮酚的纯度由93%提高到98.5%.用薄层层析法进行定性分析,纯化物和标准品的Rf值相同,说明两者分子量相同.用紫外分光光度法、气相色谱质谱法对纯化物和标准品在波长200～400 nm之间扫描,结果在211.80 nm和274.20 nm处有共同的最大吸收峰,说明两者具有相同组分.用气相色谱质谱法测定粗提物丹皮酚的含量为87.7%、纯化物(Ⅰ)、(Ⅱ)丹皮酚的含量分别为93.0%、98.5%.结果证明此纯化工艺简单,纯化效果好.     

三七粉中总黄酮的检测

[目的]为三七总黄酮的开发利用提供科学依据。[方法]以三七粉为原料,采用50%乙醇溶解、超声波提取法提取其中的总黄酮,以芦丁为标准品,采用紫外分光光度法测定提取液中总黄酮的含量。[结果]芦丁的最大吸收波长为510nm;在0.010～0.997mg/ml范围内,样品浓度与其吸光度具有良好的线性关系;方法的加样回收率为99.58%,RSD为1.22%;重复性试验RSD为2.92%;精密度试验RSD为3.23%。说明该方法测定结果准确,重复性好。[结论]建立了以芦丁为标准品的三七粉中总黄酮含量的检测方法。     

马心细胞色素C含量测定的几种方法比较

本文通过几种不同的实验方法和同一实验方法样品的不同处理,对成品马心细胞色素C含量进行测定,并与标准品加以比较。结果表明,运用最具特征吸收波长552nm进行含量测定,结果最准确,操作最简便,切合实际生产使用。     

转绿色荧光蛋白标记基因猪整合检测的研究

[目的]为转基因猪生产的整合效率、外源目的基因表达水平、目的基因在猪体内组织特异性表达分布等相关领域的进一步研究奠定基础。[方法]用显微注射法将GFP标记的转基因猪表达载体PM1导入湖北白猪和通湖猪1-细胞、2-细胞胚胎中,胚胎移植妊娠后生产仔猪,取耳或尾组织样提取基因组总DNA,用PCR法检测PM1在猪基因组中的整合情况。[结果]在所有生产的78头仔猪中,有6头猪用PCR检测为转PM1基因阳性猪,这6头猪在3次PCR扩增反应中都得到650 bp目的扩增片段。其他样品没有得到目的扩增片段的为阴性猪。[结论]载体PM1可以用于携带外源基因进行转基因猪生产。     

利用猪血生产多种生化制品的理论探讨

目前,猪血已可以提取和制备多种生化制品,但多数报道都仅限于利用其制取某一种制品,这就导致了猪血生化制品成本高,浪费大的问题。本文从一个侧面讨论综合利用猪血的可行性和工艺流程,即利用猪血联合生产超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,简称SOD)、血红素(Hematin)及血清血蛋白(Serum albrumin),从而提高猪血利用率,降低生产成本,为现代生化制药厂提供参考。     

微囊藻毒素的快速提取方法研究

我国水体蓝藻水华主要产生两种微囊藻毒素microcystin-LR(MCLR)和microcystin-RR(MCRR),针对蓝藻藻细胞内微囊藻毒素的提取和检测问题,提出微波和沸水浴取代传统溶剂萃取前处理的改善方法,采用标准品和实际样品分析了方法的可行性和提取效率.结果表明,沸水浴和微波(800W)处理10 min不会引起标准品的变异;以实验室培养的产毒铜绿微囊藻(Microcystis.aeruginosa)PCC7820为样品的提取实验表明,两种快速提取方法与传统的5%乙酸、70%甲醇萃取法提取效率的相对误差分别为4.6%(MCLR)和1.7%(MCRR).两种方法操作方便,并且可以有效地避免有机溶剂耗费和甲醇等有机溶剂残留对后续检测的干扰.应用该方法分析了天然水样,表明方法具有实用性.     

Fibronectin binds to some bacteria but does not promote their uptake by phagocytic cells

The involvement of plasma fibronectin in phagocytosis of bacteria was investigated by testing the binding of fibronectin to several species of bacteria and by evaluating the ability of fibronectin to promote binding and endocytosis of two species of these bacteria by phagocytic cells. Fibronectin binds non-covalently to Gram-positive and Gram-negative bacteria and to yeast but did not appear to be necessary or sufficient for uptake of Staphylococcus aureus and Salmonella typhimurium by several different phagocytic cell types.     

Trypanosoma cruzi infection inhibited by peptides modeled from a fibronectin cell attachment domain

The mechanism by which Trypanosoma cruzi, the protozoan parasite that causes Chagas' disease, becomes attached to mammalian cells is not well understood. Fibronectin is thought to participate in the attachment, and in this study the region of fibronectin that interacts with the surface receptors of T. cruzi trypomastigotes was investigated by testing the binding of the amino acid sequence Arg-Gly-Asp-Ser, corresponding to the cell attachment site of fibronectin to T. cruzi trypomastigotes. Peptides with the sequence Arg-Gly-Asp-Ser, but not Arg-Phe-Asp-Ser, Arg-Phe-Asp-Ser-Ala-Ala-Arg-Phe-Asp, Ser-Lys-Pro, Glu-Ser-Gly, or Ala-Lys-Thr-Lys-Pro, bound to the parasite surface and inhibited cell invasion by the pathogen. Monoclonal antibodies to the cell attachment domain of fibronectin also inhibited cell infection by the parasite. The immunization of BALB/c mice with tetanus toxoid-conjugated peptide induced a significant protection against T. cruzi. The data support the notion that the sequence Arg-Gly-Asp-Ser of cell surface fibronectin acts as a recognition site for attachment of the parasites.     

荧光分析法测定香椿叶总黄酮含量的研究

[目的]采用荧光分光光度法测定香椿叶中总黄酮含量。[方法]根据黄酮类化合物的荧光性质,以芦丁为标样,在激发波长λex=436nm、发射波长λem=505nm条件下,考察了溶剂、pH值、表面活性剂及放置时间对荧光强度的影响。[结果]在浓度95%乙醇中加入pH值7的缓冲液,芦丁的荧光强度最大。该方法检测限为2.62×10-7mol/L,线性范围在1.16×10-7～4.86×10-5mol/L之间,其线性回归方程为y=1.352x＋12.712,相关系数r=0.9976,相对标准偏差1.07%。[结论]用荧光分光光度法测定香椿叶中总黄酮含量的准确度和精密度都较高,且操作简便,成本低。     

紫外分光光度法测定发酵液中卑霉素的含量

[目的]介绍利用紫外分光光度法测定发酵液中卑霉素含量的方法。[方法]以乙酸乙酯为提取剂,扫描卑霉素的乙酸乙酯溶液在200～400 nm的吸收峰,准确配制出系列浓度的卑霉素乙酸乙酯溶液,绘制标准曲线,在最佳波长下进行测定,然后对发酵样品进行3次离心处理得到样品溶液,再对样品液进行重现性、稳定性的研究和回收率的计算,用抑菌圈法验证样品的抑菌效果。[结果]选择275nm波长作定量峰,卑霉素的乙酸乙酯溶液浓度在0.5～12.0 mg/L范围内、pH值为4.6的条件下,其吸收度与浓度的线性关系良好,线性回归方程y=15.968 0x＋0.030 7,相关系数为0.995 5。样品溶液在室温条件下放置24 h保持仍稳定,平均回收率为102.13%。[结论]试验证明,用紫外分光光度计法检测发酵液中的卑霉素含量是可行的。     

分光光度法测定爆米花中的铅含量

用紫外分光光度计测定酸性条件下铅离子与碘化钾及孔雀石绿三元络合物显色体系的吸光度,代入标准曲线方程得到溶液中铅离子的浓度,并用硝酸-过氧化氢湿法消化法对样品进行预处理.结果表明:该显色体系的最大吸收波长为620 nm,反应的稳定性良好,是一种简便准确的爆米花铅含量的测定方法.     

ICPS-OES法测定生活饮用水主要金属元素含量

[目的]测定生活饮用水主要金属元素含量。[方法]随机抽取市场上的桶装水作为水样,样品预处理后,选定最佳工作条件,用ICPS-OES法,测量样品溶液的发射强度,计算出相应的样品溶液浓度。同时也进行精密度和加标回收试验。[结果]通过制作标准曲线,选取干扰少、检出限低、线性最好的波长去分析待测元素。试验中各元素检出限均低于相应的国标要求。精密度试验表明,各元素的相对标准偏差范围在2.6%~8.9%之间。样品中As、Pb、Cr（6价）、Fe、Mn、及Cu等主要金属元素的平均回收率为97.66%~101.11%。[结论]ICP检出限低,准确可靠,可用于对饮用水的常规检测。     

利用荧光分析法测定玉米须中的总黄酮含量

根据黄酮类化合物能与Al3+形成稳定的荧光络合物,建立一种测定玉米须总黄酮的新方法。用60%乙醇溶液,在功率400W下超声处理20min,提取玉米须有效成分;以芦丁为标样,选择激发波长为λex=445nm,发射波长为λem=542nm,采用荧光分光光度法测定玉米须中总黄酮含量,并进行加标回收实验,以验证方法的准确性。方法检出限为1.08×10-9mol/L,线性范围在0～0.04mg/mL之间;线性回归方程:y=216.63x+137.93,相关系数r=0.999 7,平均回收率为98.3%～100.8%,相对标准偏差(RSD)为0.88%。这种方法操作简便、快速、准确,具有良好的分析应用前景。     

光谱技术结合化学计量学分析方法快速检测阿维菌素的试验研究

生物农药阿维菌素是一种微溶于水的高毒杀虫剂,有广谱、高效等特点,在防治水稻螟虫,稻纵卷叶螟方面表现优异,但对水生生物高毒。为了探讨利用光谱技术现场快速检测水体中生物农药阿维菌素的可能性,测定了其在紫外/可见光波长范围内的不同浓度吸光度光谱数据,建立其快速有效的定量分析模型。使用不同光程比色皿采集一定浓度范围的阿维菌素农药样本光谱数据进行对比,得到最佳光谱数据用于后续定量处理分析。将波长范围为200～500 nm的光谱数据采用Savitzky-Golay卷积平滑法（S-G平滑法）进行数据预处理,将原始光谱数据和S-G平滑法预处理后的光谱数据校正集和预测集分别按不同比例采用Sample set partitioning based on joint x-y distance(SPXY)算法进行样本集划分,并分别建立PLS模型进行比较。再将划分样本集后优选出的光谱数据采用主成分分析（Principle component analysis,PCA）结合马氏距离阈值法（Mahalanobis Distance,MD）,即PCAMD算法剔除异常样本,再将剔除异常样本后的光谱数据采用竞争性自适应重...     

紫外光谱法测定钾盐中钾含量的方法研究

[目的]研究用紫外光谱法测定钾盐中钾的含量。[方法]采用分光光度导数法,选择276 nm作为一阶导数测定波长进行扫描测量,对试验样品进行微量分析,并对其准确度和精密度进行评价。[结果]紫外光谱法数据准确,重复性好。与重量法相比,该方法使用的试剂少、检测时间短。[结论]该方法可用于日常检测分析。     

Dynamic Reflectance Spectroscopy: A New Thermal Technique

Dynamic reflectance spectroscopy, a new thermal technique, measures the change in reflectance of a sample at a fixed wavelength as the temperature of the sample is increased. The technique is illustrated by the thermal dissociation of CoBr(2).6H(2)O.