乐果对大鼠肝细胞凋亡作用的研究

通过给大鼠肝细胞培养液中加入乐果(染毒终浓度分别为0、3、10、30、100和300 μmol·L-1),染毒12、24 h后,Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡率;分别用Fluo-2/AM、双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)和罗丹名123检测细胞内Ca2+浓度、活性氧(ROS)和线粒体膜电位(△Ψm)变化,并在扫描电镜和荧光显微镜下观察凋亡细胞情况,研究乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响.结果表明,肝细胞染毒12和24 h后,出现了明显的细胞凋亡的形态学变化,细胞凋亡率明显升高,除3 μmol·L-1组外,与对照组相比差异显著(P<0.05或P<0.01),且呈时间-剂量效应.3 μmol·L-1组细胞内Ca2+浓度极显著高于对照组(P<0.01),之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca2+度逐渐下降;细胞内ROS水平在3-100 μmol·L-1范围内随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而在300 μmol·L-1组略有下降,除3 μmol·L-1组外,与对照组相比均差异极显著(P<0.01);△Ψm除24h 300 μmol·L-1组外均出现持续下降.表明低剂量乐果染毒可诱导肝细胞发生凋亡,细胞内Ca2+、ROS和△Ψm可能参与了这一过程.     

JC-1单标法和JC-1/PI双标法荧光探针检测山羊附睾精子线粒体膜功能的研究

为准确、全面研究超低温冷冻技术对山羊附睾精子线粒体膜电位的影响效果,本试验采用荧光探针JC-1单标和JC-1/PI双标2种荧光染色方法,通过流式细胞仪和荧光显微镜两种检测手段对精子线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)变化进行检测分析,用JC-1单独染色,能准确、快速地区分高、低MMP精子,但不能明确区分精子的存活状态,采用JC-1与碘化丙啶(Propidium iodide,PI)双标法,则能明显判定精子的存活状态。通过对绒山羊附睾精子在冷冻前和解冻后线粒体膜电位检测,结果表明,单标记后高MMP精子尾部呈橙红色,低MMP精子尾部为绿色;双标后死亡精子头部呈红色(PI+)。对两种检测手段的比较研究,结果显示,荧光显微镜能够有效地区分出高、低MMP及死精子,但对于活精子中MMP的高低检测效果不理想;流式细胞仪则能够有效地区分活精子MMP的高低,而且结果准确,速度快,敏感性高。试验表明,两种检测方法相关性很高,分析同一处理样品时用JC+%和JC+/PI-%检测结果呈显著正相关(r=0.815,r=0.982,P<0.01)。因此,对于精子线粒体MMP的分析,采用JC-1单染与JC-1/PI双染的方法,利用流式细胞仪与荧光显微镜进行联合检测,能比较全面、准确的反映出精子线粒体的功能状态。     

铜胁迫对花生种子萌发、幼苗生长和生理特性的影响

采用基质培养方法,研究不同铜浓度营养液(0.32、1、10、100、1 000、10 000 μmol/L CuSO4)对花生种子萌发、幼苗生长和生理特性的影响.结果表明,在CuSO4浓度≥100 μmol/L时,花生种子萌发被明显抑制,幼苗株高、主根长度、叶片的叶绿素含量都明显降低,叶片的丙二醛(MDA)含量、相对电导率明显变大;在10 000 μmol/L CuSO4胁迫下种子不萌发;在100 μmol/L CuSO4浓度下,叶片中过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性比对照显著增大;在CuSO4浓度≥100 μmol/L浓度下,过氧化氢酶(CAT)活性明显降低.综合以上铜胁迫反应,100 μmol/L CuSO4浓度已危害花生生长.     

铜胁迫对芥菜光合特性及叶绿素荧光参数的影响

通过水培试验研究了铜胁迫对芥菜叶片光合特性与叶绿素荧光参数的影响.结果表明,所有铜浓度处理均能降低芥菜胞间CO2浓度(ci)和光化学淬灭系数(qP).低浓度的Cu2+(≤1μmoL·L-1)能提高芥菜叶片叶绿素、类胡萝卜素含量以及净光合速率(Pn)、气孔导度(Cs)和蒸腾速率(Tr);高浓度的cu2+(≥10μmol·L-1)使得芥菜叶片叶绿素(Chl)、类胡萝卜素(Car)含量以及净光合速率(Pn)、气孔导度(Cs)和蒸腾速率(Tr)下降.叶绿素荧光分析表明,当铜浓度低于1 μmol·L-1时,PSⅡ的最大光化学效率(Fv/Fm)和子叶产量(Yield)升高,当铜浓度高于10 μmol·L-1时降低,而最小荧光(Fo)和非光化学淬灭系数(qN)变化趋势与之相反.叶绿素a/b值在铜浓度低于10 μmol·L-1时升高,但比值随胁迫继续加剧而下降,两者间呈显著负相关(P<0.05);Car/Chl值在铜浓度小于50μmol·L-1时随浓度的增加而增大,之后则随铜浓度的增加而下降,两者呈极显著负相关(P<0.01).铜浓度与叶绿素、类胡萝卜素含量、Fv/Fm、qP和Yield均呈极显著负相关(P<0.01),与Pn、Cs、Tr呈显著负相关(P<0.05),而铜浓度与Fo和qN分别呈显著和极显著正相关.     

脑源性神经营养因子抑制牛卵泡颗粒细胞凋亡

为研究脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对牛卵泡颗粒细胞凋亡的影响。首先利用CCK8检测了不同浓度(0,10,50,100,200 ng/m L)的BDNF处理牛卵泡颗粒细胞24 h之后细胞活性变化情况,发现50,100,200 ng/m L的BDNF都能够极显著的增加颗粒细胞的活性(P0. 01)。以100 ng/m L作为BDNF最适处理浓度,利用流式细胞仪,通过线粒体膜电位检测(JC-1)发现,BDNF组的红绿荧光相对比例极显著的升高(P0. 01)。接着利用实时荧光定量PCR方法,发现BDNF导致P53、Bax和Caspase-3的mRNA表达水平极显著降低(P0. 01),而Bcl-2无显著变化(P0. 05)。最后通过siRNA干扰内源性的BDNF的合成(P0. 01),利用实时荧光定量PCR方法发现,干扰BDNF之后,P53极显著的升高(P0. 01),Bax显著升高(P0. 05),Bcl-2和Caspase-3无显著差异(P0. 05)。结果表明:BDNF对牛卵泡颗粒细胞的凋亡有抑制作用,为牛卵泡的发育和颗粒细胞功能的研究提供了新的途径。     

三碱基氯化铜日粮对肉鸡肝线粒体呼吸复合物活性的影响

采用玉米-豆粕型饲粮研究铜(源于三碱基氯化铜)对肉鸡肝细胞线粒体呼吸链复合物活性的影响.在对照组(Cu 11 mg/kg,实验组A)基础上设高铜组3个(110 mg/kg、220 mg/kg和330 mg/kg,分别对应为:实验组B、C、D),试验60 d,在12、24、36、48、60日龄采集肝脏,提取线粒体,测定线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性变化.结果表明,11 mg/kg和110 mg/kg铜日粮添加组线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性呈增加趋势.220 mg/kg和330 mg/kg日粮铜添加组肉鸡肝细胞线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性有减弱表现,但主要在实验后期,尤其是48 d之后,比对照组和各组内的实验前期下降明显(P<0.05).说明高铜日粮在一定程度上对线粒体复合物活性是有利的,但过高的铜添加日粮(≥220 mg/kg)可降低肉鸡肝细胞线粒体呼吸链复合物功能活性,可以推测线粒体是机体铜过量状态下侵害的靶部位之一,而且能作用于线粒体各个复合物,造成线粒体呼吸功能减弱,呼吸链中电子传递发生故障.从而影响线粒体功能的正常发挥.     

没食子酸对小鼠TM3细胞凋亡的影响

为了研究植物多酚类化合物没食子酸(Gallic acid, GA)对小鼠TM3睾丸间质细胞凋亡的影响,利用WST-1、JC-1、DAPI以及RT-PCR方法研究GA对体外培养的TM3细胞活力、线粒体膜电位、增殖凋亡相关基因表达的影响。WST-1结果显示,培养体系中添加0,20,100,200,400μmol/L的GA,处理24 h后可抑制TM3细胞活力,且呈剂量依赖性,与对照组相比较,20～400μmol/L处理组TM3细胞活力显著降低(P<0.05)。进一步研究发现,20μmol/L和400μmol/L GA显著抑制细胞增殖相关基因Cyclin B1及PCNA表达(P<0.05),促进细胞凋亡相关基因BAX表达(P<0.05),引起细胞线粒体膜电位降低,细胞核固缩,形成细胞凋亡小体。结果表明,体外培养体系中添加GA可以明显抑制TM3细胞活力,引起细胞细胞凋亡。     

乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响及其机理研究

在大鼠肝细胞培养液中加入不同浓度乐果,染毒12、24 h后,检测肝细胞凋亡率、细胞内Ca^2＋浓度、活性氧（ROS）及线粒体膜电位（Δψm）变化,并观察凋亡细胞。结果表明：染毒后肝细胞出现了凋亡变化;细胞凋亡率明显升高,除3μmol.L^-1组外,其余各处理组与对照组相比差异显著,且呈时间-剂量效应;3μmol.L^-1组细胞内Ca^2＋浓度极显著高于对照组,之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca^2＋浓度逐渐下降;ROS水平为3-100μmol.L^-1时随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而300μmol.L^-1组略有下降,除3μmol.L^-1组外,其余各处理组与对照组相比差异均极显著;Δψm除24 h 300μmol.L^-1组外其余各处理组均持续下降。表明低剂量乐果可诱导肝细胞凋亡,细胞内Ca^2＋、ROS和Δψm也可能参与这一过程。     

槲皮素对CBRH-7919细胞增殖及线粒体膜电位的影响(英文)

[目的]探讨槲皮素对肝癌细胞株CBRH-7919增殖及线粒体膜电位的影响。[方法]体外培养肝癌CBRH-7919细胞,以不同浓度槲皮素处理细胞后,采用酸性磷酸酶(APA)法检测OD405nm;倒置显微镜观测CBRH-7919细胞形态变化;Rhodamine123染色后流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm)变化。[结果]槲皮素对肝癌CBRH-7919细胞有明显的增殖抑制作用,并与剂量和时间成正比。光学显微镜下可见槲皮素作用后细胞密度明显降低。经10μg/ml槲皮素作用12、24、48h后,流式细胞术检测到Rhodamine123染色弱荧光细胞百分比逐步增加,线粒体膜电位下降。[结论]槲皮素体外能抑制肝癌细胞株CBRH-7919增殖,引起线粒体膜电位下降。     

槲皮素对CBRH-7919细胞增殖及线粒体膜电位的影响

[目的]探讨槲皮素对肝癌细胞株CBRH-7919增殖及线粒体膜电位的影响。[方法]体外培养肝癌CBRH-7919细胞,以不同浓度槲皮素处理细胞后,采用酸性磷酸酶(APA)法检测OD405;倒置显微镜观测CBRH-7919细胞形态变化;Rhodamine 123染色后流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm)变化。[结果]槲皮素对肝癌CBRH-7919细胞有明显的增殖抑制作用,并与剂量和作用时间成正比;光学显微镜下可见槲皮素作用后细胞密度明显降低;经10μg/ml槲皮素作用122、4、48 h后,流式细胞术检测到Rhodamine 123染色弱荧光细胞百分比逐步增加,线粒体膜电位下降。[结论]槲皮素体外能抑制肝癌细胞株CBRH-7919增殖,引起线粒体膜电位下降。