铁皮石斛和金钗石斛杂交后代的分子鉴定

铁皮石斛和金钗石斛是《中华人民共和国药典(2015版)》收录的2种药用石斛,具有重要的药用价值和经济价值。然而,目前关于这2种石斛药用价值的遗传基础研究和优良新品种选育等相对较弱。本研究以铁皮石斛和金钗石斛2个亲本,以及它们的131个F₂代杂交单株作为研究对象,从320对SSR引物中筛选出特异性引物,用于铁皮石斛和金钗石斛杂交后代的真假杂种鉴定。结果表明,3对石斛属特异性SSR引物DNtSSR013、DNtSSR147和DNtSSR150,可将杂交群体扩增带型分为真杂交种型、母本型、父本型、缺失型,进而从131个杂交群体F₂代中共鉴定出119个真杂交种,真杂交种占杂交群体的91%。因此,利用SSR分子标记技术鉴定石斛杂交群体是可行的,相关结果为铁皮石斛和金钗石斛的遗传图谱构建,石斛多糖和石斛碱等活性成分QTL定位奠定了基础。     

SSR分子标记鉴定铁皮石斛与霍山石斛的正反交后代

以铁皮石斛与霍山石斛的正、反交F1代共63株为试验材料,利用SSR标记鉴定杂种真实性。结果表明,在21对石斛基因组引物中,筛选出双亲多态性引物3对,多态性引物占比为14.3%。用此3对引物可鉴定出铁皮石斛×霍山石斛杂交苗中25株真杂种,比例为78.1%,可鉴定出霍山石斛×铁皮石斛杂交苗中28株真杂种,比例为90.3%。     

铁皮石斛根系促生内生真菌的筛选

[目的]开展铁皮石斛根系促生内生真菌的筛选,为铁皮石斛的批量化生产提供生物防治基础。[方法]采用组织分离法对铁皮石斛根系内生真菌进行分离纯化,再通过单一回接试验将已分离内生真菌回接到铁皮石斛组培苗中,40 d后观察铁皮石斛根系生长情况,60 d后统计成活率。通过铁皮石斛根系生长指标,筛选出对根系促生作用最显著的内生真菌。[结果]从铁皮石斛根系中共分离得到21株内生真菌,筛选出8株优势促生根系内生真菌,其中回接菌株F5的铁皮石斛组培苗生根率最高,达99.00%,回接菌株F14的铁皮石斛苗成活率达100.00%,为对照组的395%。[结论]该研究成功解决了铁皮石斛移栽成活率低的难题。     

SRAP标记在秋石斛杂交后代鉴定中的应用

基于序列相关扩增多态性(SRAP)分子标记对秋石斛四面佛与水芙蓉的杂交后代进行鉴定,并进行遗传多样性和聚类分析.结果显示,共筛选出5对SRAP引物组合用于杂交后代真实性的鉴定,供试17个杂交后代新株系均鉴定为真杂种;5对SRAP引物组合共扩增到23个多态性条带,多态性比例为88.46％.从聚类结果可以看出,绝大多数杂交后代在亲缘关系上先倾向于母本后倾向于父本;遗传相似系数分析结果表明,杂交后代与母本间的遗传相似系数大于父本,说明供试杂交后代在遗传上更偏向于母本,与聚类结果吻合.由研究结果可以看出,所筛选的5对SRAP引物组合用于秋石斛杂交后代鉴定是可行的.     

石斛抗氧化和滋阴作用的试验研究

[目的]研究金钗石斛、鼓槌石斛和铁皮石斛的抗氧化和滋阴药效异同,为其临床用药提供一定的科学依据。[方法]采用DPPH.清除率检测法评价其体外抗氧化活性;并采用氢化可的松建立阴虚大鼠模型,用试剂盒法测定血清中的超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和乳酸脱氢酶(LDH)的活力,并计算大鼠体重、进食量以及死亡率,评价石斛滋阴效果。[结果]体外抗氧化试验表明,3种石斛的抗氧化作用强弱为:铁皮石斛鼓槌石斛金钗石斛,铁皮石斛与鼓槌石斛抗氧化活性和Vc接近,金钗石斛次之;浙江产铁皮石斛和云南产鼓槌石斛抗氧化效果相当,均优于其他产地的。滋阴试验结果表明,铁皮石斛和鼓槌石斛滋阴作用等同,金钗石斛次之。[结论]铁皮石斛、金钗石斛和鼓槌石斛抗氧化和滋阴有差异,在临床使用时可有选择的使用。     

铁皮石斛和重唇石斛及其杂交子代茎·叶挥发性成分分析

[目的]考察铁皮石斛、重唇石斛及其杂交后代14L-3、14L-6、14L-7和14L-9茎、叶挥发性成分的差异性。[方法]采用静态顶空气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术检测6种石斛样品的茎、叶挥发性成分。[结果]6种石斛茎、叶中共检测出105种化学成分，茎中23种，叶中90种，主要分为醇、醛、酮、烷、烯等几个大类，均以醇类最多。6种茎共有的成分2种(叶醇、正己醛)。6种叶共有成分6种(叶醇、正戊醇、二乙基酮、1-戊烯-3-醇、特戊醛、反-2-己烯醛)。叶醇是6种石斛茎、叶中唯一共有的成分，也是含量最高的成分。[结论]14L-9茎、叶挥发性成分相比其他子代具有特异性。     

铁皮石斛菌根真菌对铁皮石斛组培苗的接种效应

[目的]对铁皮石斛（Dendrobium officinale）菌根真菌对铁皮石斛组培苗的接种效应进行研究。[方法]以从野生铁皮石斛根系中分离得到的Tjl、Tj2、Tj3真菌为材料,将其接种到铁皮石斛组培苗的根系上进行接种试验。[结果]在组培条件下,Tjl菌在前期没有表现出促生作用,Tj2菌表现出较强的促生作用,Tj3菌则对根具有促生作用,而在后期,Tj1菌则表现出了较强的促生作用,Tj2菌的接种效果最好,促生作用最强,Tj3菌则出现烂根烂苗现象;在室外条件下,Tj2菌接种使组培苗叶数增加,侧芽数增加,侧根生长明显,株高增加显著,叶片大而深绿,根部有明显的膨大现象。[结论]2种接种方式均说明Tj2菌对铁皮石斛的地上植株和地下根系生长,株数增多,株高增加,新芽和新根萌发均具有较强的促进作用,证明Tj2菌与铁皮石斛有效地建立了共生关系。因此Tj2菌对石斛组培苗的成功栽培具有实际应用价值。     

铁皮石斛菌根真菌对铁皮石斛组培苗的接种效应

[目的]对铁皮石斛（Dendrobium officinale）菌根真菌对铁皮石斛组培苗的接种效应进行研究。[方法]以从野生铁皮石斛根系中分离得到的Tj1、Tj2、Tj3真菌为材料,将其接种到铁皮石斛组培苗的根系上进行接种试验。[结果]在组培条件下,Tj1菌在前期没有表现出促生作用,Tj2菌表现出较强的促生作用,Tj3菌则对根具有促生作用,而在后期,Tj1菌则表现出了较强的促生作用,Tj2菌的接种效果最好,促生作用最强,Tj3菌则出现烂根烂苗现象;在室外条件下,Tj2菌接种使组培苗叶数增加,侧芽数增加,侧根生长明显,株高增加显著,叶片大而深绿,根部有明显的膨大现象。[结论]2种接种方式均说明Tj2菌对铁皮石斛的地上植株和地下根系生长,株数增多,株高增加,新芽和新根萌发均具有较强的促进作用,证明Tj2菌与铁皮石斛有效地建立了共生关系。因此Tj2菌对石斛组培苗的成功栽培具有实际应用价值。     

沙田柚杂交后代群体的SSR鉴定与遗传多样性分析

【目的】利用SSR标记对沙田柚杂交后代群体进行杂种鉴定和遗传多样性研究,为柑橘种质创新和遗传改良提供技术、材料和理论支持。【方法】利用SSR技术分析沙田柚两个杂交组合159株后代的杂种性质,采用UPGMA聚类分析法分析后代群体和亲本的遗传关系。【结果】4对引物可以从104株沙田柚×强德勒柚的杂交后代鉴定出103株真杂种,鉴定率达到99.04%,且在引物AGC9的扩增图谱中有70个单株出现了双亲都没有的新条带;5对引物可鉴定出沙田柚×红江橙的全部杂交后代均为真杂种,一个纯合显性标记AAT12被发现,在引物GA18和AGC9的扩增结果中出现了亲本位点的缺失;UPGMA聚类分析结果显示,两个杂交组合后代群体均出现较显著的遗传变异,两个组合的遗传多样性也有较大的差异。【结论】SSR标记适合柑橘杂种的鉴定和遗传多样性分析,杂交是获得柑橘遗传变异株系的有效途径。     

铁皮石斛授粉结实特性试验

[目的]研究铁皮石斛授粉结实特性,为铁皮石斛生产和育种提供技术基础.[方法]在大棚设施栽培和附树仿生栽培条件下开展杂交、自交和昆虫辅助授粉,以4℃离体冷藏花序之花粉及75％酒精或清水作粘附助剂开展授粉试验测定花粉活力.[结果]铁皮石斛人工授粉杂交结实率达90.51％,自交结实率5.55％,野外昆虫辅助授粉结实率1.82％;4℃离体冷藏花序,9d内平均授粉结实率94.22％,花粉活力随冷藏时间无明显变化;75％酒精或清水作粘附助剂不影响授粉效果,平均结实率91.29％.[结论]铁皮石斛以异花授粉为主,部分自交亲和,自交结实率和自然结实率均较低,人工杂交授粉是铁皮石斛种质资源繁育保护的有效途径.     

铁皮石斛高效设施栽培技术研究

[目的]实现铁皮石斛的高效设施栽培。[方法]以铁皮石斛无菌试管苗为试材,当苗高5cm左右时,分别移栽到3种不同的栽培基质中,筛选出铁皮石斛的最适生长基质;以其最适生长基质为栽培基质,设置清水(CK)和营养液浇灌2个处理,研究营养液浇灌对铁皮石斛生长的影响。[结果]所设置的3种栽培基质都适合铁皮石斛生长,其中,以石灰岩碎石滤水层5 cm+锯末(杂木粗糙的锯末)8cm+活苔藓2 cm为基质时,铁皮石斛长势最好、产量最高;适当浓度的营养液浇灌可较大幅度地提高铁皮石斛的产量。[结论]该研究为铁皮石斛的高效设施栽培提供了参考。     

内生真菌对铁皮石斛种苗生长的影响

为研究内生真菌对铁皮石斛种苗生长的影响,并筛选出有利于铁皮石斛种苗生长发育的内生真菌。该研究从金钗石斛根部分离、筛选和鉴定得到3种内生真菌,将其分别配制成体积分数20%、40%和60%的液体菌剂,对铁皮石斛种苗进行接种试验。在温室栽培条件下共培养150 d后,调查统计各处理组铁皮石斛种苗生物量,并利用石蜡切片法显微观察真菌侵染情况,以及重分离真菌鉴定。结果表明,菌株FC6和FC8对铁皮石斛种苗的生长有明显的促进作用,且均能与铁皮石斛种苗形成菌丝团共生结构,菌株FC9则不能。通过对铁皮石斛种苗根部重分离的真菌鉴定,确定重分离得到了原接种真菌;菌株FC6和FC8能够侵入铁皮石斛种苗的根部组织,并在其皮层细胞中扩展、定殖,形成良好的共生关系。其中,菌株FC6对铁皮石斛种苗促进效果最佳。     

铁皮石斛种质资源遗传多样性的SRAP分析及指纹图谱构建

[目的]对铁皮石斛进行有效的遗传多样性分析,对于制订铁皮石斛的保护策略具有重要的意义。[方法]使用25对SRAP引物对供试的石斛进行遗传多样性分析。[结果]25对SRAP标记共获得86条多态性条带,每对引物组合可扩增出1~6条多态性条带,平均3.07条;20份石斛品系间Jaccard相似系数为0.002~0.821;构建了20份石斛品系的SRAP特征指纹图谱。[结论]供试的铁皮石斛有较为丰富的遗传变异。     

铁皮石斛原球茎增殖培养基配方的优化

[目的]获得铁皮石斛（Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.）原球茎组织培养的最佳培养基配方。[方法]用正交试验筛选出6-BA、NAA、KT最佳的浓度配比,并考察各因素对铁皮石斛原球茎增殖率的影响。[结果]铁皮石斛原球茎增殖的最佳培养基配方为1/2MS＋2.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA＋1.0 mg/L KT。[结论]该研究为工业化生产铁皮石斛原球茎及其有效成分,推进铁皮石斛工厂化育苗奠定了基础。     

有机肥料对大棚种植铁皮石斛生长的影响

[目的]筛选适合铁皮石斛大棚种植的有机肥料,促进铁皮石斛的生长,使其增产。[方法]在相同的大棚种植环境条件下,分别施加发酵羊粪、发酵蚕粪和发酵花生麸对铁皮石斛种苗进行处理。1 a后,再分别对不同有机肥处理的铁皮石斛植株相关性状进行调查与分析。[结果]施加发酵羊粪(加入10%硫酸钾造粒)更有利于促进大棚铁皮石斛植株的生长,其植株的存活率、青叶数、茎节数和株高均高于施加发酵蚕粪的和发酵花生麸的。[结论]发酵羊粪(加入10%硫酸钾造粒)是一种适合铁皮石斛大棚种植的优质有机肥料,具有推广价值。     

铁皮石斛育种研究进展

铁皮石斛作为我国传统名贵中药材,广泛运用于食品和医疗保健领域。在查阅近20年来国内外相关文献基础上,综述了铁皮石斛种质资源研究和育种现状,国内外对种质资源的形态学鉴定、分子鉴定、农艺性状分析、成分分析等方面进行了较为细致的研究,为育种工作奠定了基础;通过选择育种、杂交育种、诱变育种、倍性育种等常规育种方法已获得较多的铁皮石斛新品种,分子标记辅助育种、转基因育种等现代生物技术手段将成为今后铁皮石斛育种的主要工作重点。同时,提出了铁皮石斛育种过程中存在的问题及展望,为今后铁皮石斛种质资源创新研究提供参考。     

一株木榄内生真菌菌株的分类鉴定及其对铁皮石斛生长和多糖积累的影响

[目的]从红树植物内生真菌中筛选能促进铁皮石斛(Dendrobium officinale)生长的内生真菌菌株,并对其进行分类鉴定,为下一步开展铁皮石斛乃至其他特色作物专用菌剂(肥)开发利用提供理论依据.[方法]以北部湾红树植物内生真菌为研究对象,通过平皿和盆栽试验筛选对铁皮石斛具有优良促生作用的菌株,并综合形态学特征观察及ITS序列和18S rDNA序列分析结果对表现突出的促生菌株进行分类鉴定.[结果]从32株内生真菌中筛选获得对铁皮石斛具有良好促生效果的深色有隔内生真菌(DSE)菌株1株,该菌株分离自木榄(Bruguiera gymnorrhiza)茎,编号HS40;通过再分离及显微观察,发现菌株HS40可定殖于铁皮石斛根部并产生DSE的典型特征——微菌核和菌丝.盆栽铁皮石斛苗接种菌株HS406个月后,其株高、分蘖数、总鲜重、总干重和茎干多糖含量分别较对照增加21.7%、375.0%、94.7%、57.6%和15.8%,其中,株高、总鲜重、总干重和茎干多糖含量与对照相比达极显著差异水平(P<0.01),分蘖数达显著差异水平(P<0.05).综合形态观察和序列分析结果,将菌株HS40鉴定为球腔菌科(Mycosphaerellaceae)的Zasmidium citri-griseum.[结论]菌株HS40可显著促进铁皮石斛的生长并提高其茎干多糖含量,有望用于开发铁皮石斛专用菌剂(肥).     

石斛属植物遗传多样性的RSAP分析（英文）

[目的]用RSAP标记技术分析中国境内分布的33种野生石斛的遗传多样性及亲缘关系。[方法]建立石斛RSAP-PCR反应体系,从45对RSAP引物中筛选出33对多态性引物,对33种野生石斛的基因组DNA进行PCR扩增。[结果]这33对引物共扩增出2 047条带,其中多态性条带为2 044条,多态性比例99.8%,平均每对引物产生61.9条多态性条带。材料间遗传相似系数变化范围为0.081-0.442,说明本实验所测试的材料具有较广的遗传基础。根据RSAP标记的结果,采用UPGMA法进行聚类分析,将33种野生石斛分为6类。结果表明剑叶石斛和滇桂石斛之间亲缘关系最近,而华石斛与喇叭唇石斛、细叶石斛之间亲缘关系最远。[结论]石斛具有丰富的遗传多样性,该研究可为石斛属的分类、育种及杂交亲本的选择提供分子水平依据。     

霍山石斛薄层鉴别研究

[目的]]研究霍山石斛薄层鉴别方法,为霍山石斛质量标准的制定提供依据。[方法]采用薄层色谱法对霍山石斛、铁皮石斛、细茎石斛、河南石斛进行定性鉴别。[结果]霍山石斛能明显地区别于铁皮石斛、细茎石斛及河南石斛。[结论]已确定的薄层鉴别方法操作简单、可靠、专属性强,可以用于霍山石斛的薄层鉴别。     

混池法鉴定小豆F2群体

【目的】为提高小豆遗传育种选择效率提供新方法。【方法】将9个杂交组合的35个F_2群体分别构建混池利用SSR分子标记进行真实性鉴定,并以表型性状分离作为佐证。【结果】从35个群体中鉴定出10个真杂种群体,其中17FMY2007-7群体出现叶形分离,佐证了SSR分子标记的可靠性。【结论】混池法可以有效鉴定F_2群体真实性、降低工作量、节约成本,为作图群体及其后代真实性鉴定提供新方法,以提高遗传育种选择效率。