PyTPS 转化花生对其后代耐盐性和品质性状的影响

为了研究条斑紫菜TPS基因（ PyTPS）对花生种子耐盐性和品质性状的影响,利用花粉管通道法,将携带条斑紫菜PyTPS基因的pCAMBIA2300-PyTPS重组载体导入花生,获得了T0转基因植株。利用PCR对T0植株进行了检测,PCR阳性率为34．7％。将部分转基因植株的T2种子进行耐盐试验,利用半定量RT-PCR分析了PyTPS基因在转基因植株中的表达情况,并用近红外技术测定了T2种子的品质性状。结果表明,部分转基因花生种子在盐溶液中的发芽率显著提高,PyTPS基因可在有些转基因植株中表达,有的转基因植株的蛋白质、油酸、亚油酸或脂肪含量发生了明显变化。总之,条斑紫菜PyTPS基因导入花生后,既可提高转基因花生种子的耐盐性,又对部分后代种子的品质性状产生影响。     

硫氧还蛋白基因对大麦发芽特性的影响

对转硫氧还蛋白基因(trxs)的大麦种子进行了生化指标测定及发芽特性研究。结果显示, 转基因大麦籽粒中硫氧还蛋h的活性是非转基因种子的3.3倍;水溶蛋白和醇溶蛋白中巯基含量的比率比非转基因种子都高;发芽时转基因籽粒中α-淀粉酶和β-淀粉酶活力比非转基因种子高;转基因种子的发芽势也明显高于对照。说明将trxs基因导入大麦能增强种子中硫氧还蛋白h的活性,改变与种子发芽相关的一些重要生化特性,并促进种子发芽。     

转GmDof11基因高油转基因大豆的鉴定及主要农艺性状调查

以非转基因受体东农50为对照,对前期已获得的转GmDof11基因的转基因大豆5个株系种子含油量、脂肪酸含量等进行了鉴定,并调查了转基因大豆的主要农艺性状。结果表明:与非转基因对照相比,GmDof11基因在大豆中过量表达,提高了转基因大豆种子的含油量,降低了蛋白质含量,但对各脂肪酸组成没有显著影响。而且,转基因植株的分枝数、主茎节数和百粒重显著或极显著增加。说明转GmDof11基因大豆提高了种子的含油量,并有提高产量的潜力。     

加快我国转基因抗虫棉的产业化开发

概述了我国对转基因抗虫棉的研究、开发现状。认为要搞好转基因抗虫棉的产业化开发，就要提高公众对转基因技术的科学认识，支持和帮助有实力的种子企业参与此项工作。建议大力加强源头创新，抢注抗虫棉功能基因；切实做好转基因抗虫棉的安全评价与管理。     

花生AhPEPC1基因抑制表达的转基因后代转录组分析

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvatecarboxylase,PEPC)是控制油料作物种子中蛋白质/油脂含量比率的一个关键酶。本研究检测了花生AhPEPC1基因抑制表达的转基因株系种子含油量,与非转基因花生相比,转基因花生种子含油量提高了5.7%～10.3%。利用转录组测序(RNA-Seq)技术分析花生中AhPEPC1基因的抑制表达是否影响其他基因的功能。结果表明,转录组分析筛选到110个基因差异表达,其中25个基因上调表达,85个基因表达下调。对110个差异表达基因进行了KEGG富集分析,其中有34个基因成功获得了KEGG注释,发现氨基酸的生物合成途径中有2个基因(Aradu.M0JX8,Aradu.FE0Z7)下调表达。利用荧光定量PCR分析了15个DEG(differential expressed gene)在非转基因对照和转基因花生种子中的表达情况,发现其趋势与转录组测序结果基本一致。研究结果可在一定程度上解析AhPEPC1基因调控花生种子含油量的分子机制。     

高静水压处理对四倍体和转基因水稻种子萌发的影响

对四倍体水稻、转基因水稻及其二倍体、未转基因水稻在相同的条件下进行静水压力处理，结果表明，与其二倍体和未转基因水稻相比，四倍体和转基因水稻的发芽率显著降低，生长受抑程度明显增加，同时转基因材料高压处理当代突变频率明显提高。这些结果说明，染色体加倍和外源基因的导入，可能与种子的耐压性降低和突变频率提高有关。     

转基因大豆种子、豆粕定性PCR检测方法的研究与应用

利用定性PCR检测方法,以大豆凝集素基因(Lectin)为内标基因,检测了转基因大豆种子、豆粕中的四个外源基因:35S-CTP基因、Cp4-epsps基因、nos终止子基因、CaMV35S启动子基因,并通过酶切(XmnI)验证试验验证了定性PCR检测结果的准确性,建立了定性PCR检测转基因大豆种子、豆粕的方法,利用市场上抽检到的大豆种子、豆粕样品,进行了实际检测工作.     

RNAi沉默转基因油菜fad2基因表达的种子特异性分析

为研究RNAi沉默转基因油菜fad2基因表达的效果及其器官特异性,实时荧光定量PCR法分析比较了转基因油菜W-4与非转基因对照Westar开花后第7天、第14天、第21天、第28天的种子以及越冬期油菜根、茎、叶器官中的fad2基因的相对表达量。结果显示:对照Westsr种子中fad2基因的相对表达量随开花后的天数呈逐渐增加的趋势,但W-4种子中fad2基因的相对表达量在开花后第21天、第28天较对照Westar显著下降,降幅达到60%。说明转基因油菜W-4在种子发育过程中表达的fad2基因的dsRNA干扰了fad2基因表达。W-4与Westar在越冬期根、茎、叶器官中fad2基因的相对表达量基本一致,无显著性差异。脂肪酸组成分析结果显示:W-4种子中油酸平均含量达到81.5%较Westar增加了近15%,而多不饱和脂肪酸平均含量为5.25%,较Westar下降了近70%;但根、茎、叶中的脂肪酸含量二者无显著差异;结果表明转基因油菜中RNAi干扰fad2基因表达具有种子特异性,不干扰其它器官的fad2基因表达。研究还发现转基因油菜fad2基因表达下降的时期与napin基因表达时期同步,均始于开花后21d左右,表明目标基因的表达受napin启动子的准确控制。     

转ScALDH21基因棉花植株能提高棉花抗盐能力

来自极端耐旱齿肋赤藓(Syntrichia caninervis)的ALDH21(GQ245973)基因能否提高棉花耐盐性尚未见报道。本研究利用将Sc ALDH21基因导入新农棉1号的3个T4代转Sc ALDH21基因棉花株系为研究材料,通过不同Na Cl浓度处理转基因棉花种子及其幼苗,鉴定转基因种子萌发和幼苗生长时期的耐盐能力。研究结果表明:受体棉种子萌发耐受的Na Cl浓度为0~50 mmol/L,转基因棉花种子萌发耐受的Na Cl浓度为50~100 mmol/L,部分株系,如L38,能够耐受150 mmol/L Na Cl浓度的盐胁迫;随着盐胁迫浓度升高,种子萌发延迟,萌发率也有不同程度的降低,但转基因种子萌发率均优于受体种子。在高Na Cl浓度(100~150 mmol/L)胁迫下,转基因幼苗鲜重显著高于受体,其鲜重比受体高75%以上;转基因株系SOD和POD活性较受体植株增强。本研究结果表明,在盐胁迫条件下,转Sc ALDH21基因棉花表现出优良的生长和生理优势,转Sc ALDH21基因能提高棉花的抗盐能力。     

反义trxs基因的导入对小麦种子发芽的影响

用基因枪将反义trxs基因导入小麦幼胚,经组织培养获得了抗性再生植株。PCR及限制酶切检测显示,反义trxs基因在转基因植株中基本完整。生化指标测定及发芽特性试验表明,与对照相比,转基因籽粒中Trx h活性明显降低;水溶蛋白和醇溶蛋白中巯基含量比率以及α-淀粉酶活性都有所下降;转基因种子的发芽势明显降低,但种子最终发     

抗除草剂基因在黄瓜杂种纯度快速鉴定上的应用研究

黄瓜抗除草剂转基因T0植株经除草剂抗性筛选,连续2代自交获得T1和T2种子;分别对T1植株进行bar基因PCR检测和T2植株Southern杂交检测,证明bar基因已整合到黄瓜染色体上;以非转基因黄瓜为对照,摸索出田间抗性鉴定和室内种子抗性鉴定的除草剂临界浓度;从田间和室内筛选除草剂抗性纯合性转基因株系3个;以表现较好的2个抗性纯合转基因株系为父本,与非转基因母本杂交,获得F1种子,并在室内进行了杂交种纯度鉴定,鉴定效率达100％。建立了一套在种子发芽阶段或2片真叶期进行黄瓜杂交种纯度鉴定的新技术。     

基于FAE1和FAD2基因的油菜种子脂肪酸生物合成遗传调控

脂肪酸延伸酶1基因FAE1和Δ~(12)-脂肪酸脱饱和酶基因FAD2是植物脂肪酸生物合成途径中的两个关键酶基因,在同一甘蓝型油菜品种CY2中对这两个关键酶基因进行单表达和双表达遗传调控获得五种不同类型的具有相同遗传背景的转基因株系。本研究分析比较了种植于相同环境条件下的五类转基因株系及野生型对照的种子脂肪酸组成和含油量,结果表明,两基因单独和双重调控可显著改变油酸、亚油酸、亚麻酸、花生烯酸和芥酸等多种脂肪酸含量,其中两个内源目标基因同时沉默种子中的油酸含量从20.5%提高到了82.8%,拟南芥FAE1基因籽粒特异表达种子中的芥酸含量由43.9%增加到了60.2%。与野生型对照相比,五类转基因种子中的十八碳不饱和脂肪酸相对比率和油酸脱饱和比例均发生了显著变化。此外,增强FAE1基因表达后种子含油量有所提高,而沉默两个目标基因的表达则使种子含油量降低,表明两个关键酶基因调控对油脂合成与积累也产生一定影响。     

甘蓝型油菜BnaLCR23基因CRISPR-Cas9表达载体的构建及遗传转化

BnaLCR23基因是甘蓝型油菜"湘油15号"种子不同发育时期抑制差减杂交文库中的一个功能未知基因,分析表明其功能可能与种子发育和油脂代谢相关,为了明确该基因的功能,本研究基于CRISPR-Cas9基因编辑系统构建了该基因的敲除质粒。利用根癌农杆菌介导的油菜下胚轴遗传转化方法将敲除质粒转入甘蓝型油菜中,经潮霉素抗性筛选以及抗性苗基因组DNA的PCR检测,获得转基因油菜。转基因油菜材料的获得为深入研究BnaLCR23基因在甘蓝型油菜种子发育和储存物的积累过程中的功能提供了帮助。     

转基因种子质量控制及认证初探

作物种子质量是决定该品种推广的关键。从国家实施种子审定绿色通道制度以来，我国以玉米为代表的作物品种呈逐年井喷式发展，而种源狭窄导致育成品种同质化严重，种子质量参差不齐，企业竞争力不足。此外，由于转基因作物在抗虫、抗病性等方面较普通种具有优势，且近年来受灾害性极端气候环境影响，外加农村劳动力转移等问题，导致农业生产效率不高。种子认证制度是控制种子质量的主要途径，是发达国家在种业发展这条道路上较为成功的制度和经验。我国种子认证工作起步较晚，转基因作物品种的推广蓄势待发，需要未雨绸缪，建立完善的溯源体系来保证转基因种子的安全性。研究转基因种子认证体系，应当做到全程可溯源，全程质量可控，并从根本上避免常见的种子质量问题。就转基因农作物获得安全证书及产业化应用中遇到的问题进行初步探究，从回交转育到转基因种子生产、销售及应用过程中潜在的问题进行分析，为建立全面切实可行的转基因种子认证方案提供指导，为转基因种子产业化提供保障。     

我国种业开始进入基因时代

以生产高科技农药饮誉国内外的红太阳集团公司，与南京农业大学合作，培育出世界种业领先水平的优质、高产的转基因抗虫杂交棉——南抗3号，这标志着我国的种子产业进入基因时代。     

转录因子ABP9基因过表达对植物生长发育的影响分析

【研究目的】为分析玉米ABA/逆境响应转录因子ABP9基因过量表达对植物生长发育的影响以利用该基因开展抗逆分子育种。【方法】本研究构建了35S启动子驱动ABP9组成型表达的植物表达载体，获得了过表达ABP9基因的拟南芥转基因株系，并在正常生长条件下，比较了转基因植株和野生型在种子萌发、营养生长和生殖生长阶段的形态和生理变化，分析了可能的分子机制。【结果】结果表明，正常生长条件下，转基因植株与野生型相比表现出萌发，幼苗生长以及开花阶段的生长抑制；气孔开度减小，叶片内源ABA含量降低；ABA信号传导基因表达增强，而ABA合成基因表达降低；而且这些效应在ABP9基因表达相对较强的转基因株系中表现更明显。【结论】说明ABP9基因过量在正常生长条件下即诱导转基因植株产生耐逆反应，抑制植株的生长发育。因此，在利用ABP9基因进行转基因抗逆育种时须考虑控制ABP9基因适时适量表达。     

无抗性选择标记转基因软米和糯稻新品系的选育及中间试验

直链淀粉含量是影响稻米品质的最重要因素之一。为培育直链淀粉含量较低的软米和糯稻新品系,在经共转化法获得的转反义Wx基因水稻自交后代中筛选获得国不含抗性选择标记基因的纯合体.对这些纯合转基因水稻的分析表明,其未成熟种子胚乳中Wx基因表达水平和成熟种子中Wx蛋白量较未转化对照有不同程度的降低。转基因水稻成熟种子中直链淀粉含量较未转化对照有不同程度的下降,2个转基因系降低至10%左右,相当于软米的直链淀粉含量,1个转基因系降到了2%以下,形成了糯稻新品系。转基因稻米中直链淀粉含量降低后,其胶稠度相应变软,而糊化温度未发生明显改变。田间试验结果表明,转基因水稻的大部分农艺性状与受体品种武香粳9号无显著差异。因此,本研究成功培育了无抗性选择标记且淀粉品质改良的转反义Wx基因水稻新品系。     

转基因抗虫棉纯度的幼苗鉴定方法研究

根据卡那霉素标记基因与Bt抗虫基因紧密连锁的关系．试验研究了利用卡那霉素溶液快速鉴定携带转Bt基因抗虫棉纯度的4种方法．其方法具有简便、快捷、有效的特点，可在转基因抗虫棉杂交后代选择和繁种保纯中应用，同时也为种子企业抗虫棉纯度检验提供了一种新方法。     

玉米种子生产基地品种转基因成分快速检测的策略

近年来,种子监督管理过程中发现部分地区存在非法繁育转基因作物的现象.为了打击转基因玉米非法繁育的行为,更好地保障农业转基因安全,对玉米种子生产基地的品种进行转基因成分的现场快速检测十分重要.本研究检索已知商业化转基因玉米的外源目的基因信息,构建了转基因玉米常用外源目的基因数据库,建立了玉米品种转基因成分快速检测的策略.研究发现,利用Cry 1 Ac/Ab、CP 4 EPSPS、Pat/Bar3个快速检测试纸组合可完成20个转基因玉米转化事件的现场快速检测.     

转基因棉种生产经营门槛将提高

农业部近日制定了《转基因棉花种子生产经营许可规定》，将转基因棉花种子生产经营的“门槛”均设为企业注册资本不少于3000万元。其中要拿下经营许可证，企业固定资产不少于1000万元。规定自2011年10月7日起施行。转基因棉花种子生产许可证有效期为三年，经营许可证有效期为五年，同时不得超出农业转基因生物安全证书规定的有效期限。