猪带绦虫六钩蚴的体外培养

采用12种培养体系培养猪带绦虫六钩蚴，结果发现单层细胞且无气相存在的培养体系效果较好，促使大部分六钩蚴进入了六钩蚴后期发育，且虫体可延长存活至16d。     

北京鸭贝氏隐孢子虫(Cryptospridium baileyi)人工感染试验

用饱和蔗糖溶液漂浮法,从北京鸭新鲜粪便中分离贝氏隐孢子虫卵囊,经2日龄雏鸡传代纯化卵囊,收集高峰期排出的卵囊。人工感染2日龄雏鸭157,每只剂量分別为4.27×10~7和2.64×10~7个卵囊;另5只不感染作对照组。实验组在接种后第3天,首次在粪便中发现贝氏隐孢子虫卵囊,排卵囊时间长达17天,排卵囊高峰期为接种后第6-14天。在接种后第7天,实验组鸭开始出现呼吸困难等症状,严重发病多见于感染后第10-14天。临床症状为:张口呼吸、伸颈、胸腹部起伏明显、气喘、咳嗽等。第14天以后临床症状逐渐消失。在楼种后第11天,实验组死亡1只,死亡率为6.7%。剖检发病严重或死亡的雏鸭,可见泄殖腔、法氏囊及呼吸道粘膜上皮水肿,肺腹侧坏死,呈灰白色硬块等;气囊增厚、混浊,呈云雾状外观。用泄殖腔、法氏囊及呼吸道粘膜涂片染色,可见大量的淡红色球形虫体;光镜切片染色亦可见许多大小不一的虫体位于粘膜表面。虫体寄生部位的上皮细胞微绒毛脱落、上皮细胞肿胀等。     

北京鸭贝氏隐孢子虫（Cryptosporidium baileyi）人工感染试验

用饱和蔗糖溶液漂浮法,从北京鸭新鲜粪便中分离贝氏隐孢子虫卵囊,经2日龄雏鸡传代纯化卵囊,收集高峰期排出的卵囊。人工感染2日龄雏鸭15只,每只剂量分别为4.27×10#+7和2.64×10#+7个卵囊;另5只不感染作对照组。实验组在接种后第3天,首次在粪便中发现贝氏隐孢子虫卵囊,排卵囊时间长达17天,排卵囊高峰期为接种后第6-14天。在接种后第7天,实验组鸭开始出现呼吸困难等症状,严重发病多见于感染后第10-14天。临床症状为：张口呼吸、伸颈、胸腹部起伏明显、气喘、咳嗽等。第14天以后临床症状逐渐消失。在接种后第11天,实验组死亡1只,死亡率为6.7%。剖检发病严重或死亡的雏鸭,可见泄殖腔、法氏囊及呼吸道粘膜上皮水肿,肺腹侧坏死,呈灰白色硬块等;气囊增厚、混浊,呈云雾状外观。用泄殖腔、法氏囊及呼吸道粘膜涂片染色,可见大量的淡红色球形虫体;光镜切片染色亦可见许多大小不一的虫体位于粘膜表面。虫体寄生部位的上皮细胞微绒毛脱落、上皮细胞肿胀等。     

金毛狗卵发育的观察

用显微镜及透射电镜(TEM)对金毛狗(Cibotium barometz (L.)J.Sm.)卵的发育进行了观察,结果表明,金毛狗幼卵时期,卵细胞与腹沟细胞间的胞间连丝发达,卵细胞内含大量囊泡,质体含淀粉粒;随着生长发育,卵细胞.与腹沟细胞之间产生分离腔,但腹沟细胞与卵细胞始终通过孔区相连,发育中期,卵细胞上方开始形成卵膜.电镜观察表明,卵细胞上方的卵膜较厚,由多层膜构成,侧方和下方的卵膜较薄;孔区上方无卵膜覆盖,从而形成受精孔.发育后期,卵细胞内囊泡消失,质体退化,卵核形成大量核外突.     

扁吻鱼胚胎及仔鱼发育的形态学观察

2005年4月底在人工繁殖条件下,对扁吻鱼Aspiorhynchus laticeps精、卵的形态,胚胎和仔鱼发育进行观察。结果表明:扁吻鱼的成熟卵呈浅灰色,微黏性,成熟卵卵径为1.80~1.85 mm,受精后卵膜吸水膨胀,卵膜直径为3.30~3.45 mm。受精卵在水温21~22℃下,历经1 h40 min胚盘突起;2 h10 min出现第一次卵裂;历经7 h 15 min胚胎发育到多细胞期;12 h 4 min发育到囊胚期;16 h 36 min为原肠早期;30h 20 min发育到神经胚期;历经91 h 37 min器官形成,心脏搏动,胚体摆动;103 h后仔鱼孵出,全长为7.5 mm。孵出后的第6 d,全长为11.6 mm,卵黄囊基本吸收完毕,开口索食。孵出26 d后,全长为21.00mm,奇鳍、偶鳍发育完成,肌肉增生,但体尚未披鳞。观察发现:扁吻鱼受精卵不仅具有黏性,而且卵膜吸水膨胀,形成的膜径1.8倍于卵径,富有弹性;受精卵发育后期在微流水中能悬浮水中片刻,后逐渐沉水,因此加强水中氧量的供给有助于其发育;受精卵的胚盘隆起至第6次卵裂的时距大大快于青海湖裸鲤,且眼基和体节、嗅囊和尾芽同时发生;孵出前的胚体已超越卵膜内经,尾端超出头部的眼后。     

鲶卵膜形成的显微和超微结构比较的研究

光学显微镜观察鲶卵膜形成的显微结构,第1时相卵母细胞外具1层质膜.第2时相卵母细胞外可见到滤泡膜,第3时相卵母细胞时,可见到放射膜.第4时相初滤泡层和放射膜较前期更加增厚.第5时相卵母细胞外的滤泡膜已脱去.第6时相放射膜逐渐消解.透射电镜观察鲶卵膜形成的超微结构,在第2时相时,不仅具滤泡层,而且有鞘细胞层、基板和刚发生的放射膜,第3时相基板加厚.第4时相基板逐渐消失.第5时相滤泡细胞解体,放射膜的外层已经消失.对鲶卵母细胞膜发生的显微和超微结构作了比较,对卵膜的划分及分期、滤泡层的来源和构成、放射膜生成的机制等作了描述和探讨.     

贝氏隐孢子虫在鸡胚绒毛尿囊膜上发育过程的研究

 借助微分干涉显微镜（NIC）对贝氏隐孢子虫（C. Baileyi）在鸡胚CAM上的发育过程进行了研究。整个发育周期为96小时，全部发育过程包括：脱囊 — 裂殖生殖 — 配子生殖 — 孢子生殖，共4个阶段。裂殖生殖共产生3代裂殖体，在第Ⅰ、Ⅲ代裂殖体中分别含有8个裂殖子，在第Ⅱ代裂殖体中含有4个裂殖子。孢子化过程在CAM内胚层上皮细胞表面的带虫空泡内完成，并产生薄壁型和厚壁型两种卵囊。首次提出虫体具有群体寄生现象和同步发育特征；描述了C. Baileyi的运动期虫体离开母体和发育为滋养体的动态变化过程；应用由粪便中纯化的卵囊直接感染鸡胚成功 。并用37℃水浴脱囊，脱囊率达60%左右，表明温度对隐孢子虫的脱囊具有重要作用，无需胰酶和牛胆酸钠的参与。动物回归试验表明：C. Baileyi不能经胚胎途径造成感染，在CAM上发育的C. Baileyi卵囊对雏鸡具有较强的感染性。     

猪带绦虫仓鼠动物模型的建立

 【目的】为开展猪带绦虫的病原学形态观察、生物学特性研究以及解决实验材料来源的问题,建立猪带绦虫的实验仓鼠动物模型。【方法】通过经口感染被免疫抑制的实验仓鼠,观察仓鼠体内绦虫的感染、生长发育及寄生部位等生物学特性,并利用压片技术和组织切片技术对检出的绦虫的形态结构进行研究。【结果】免疫抑制剂在5 mg/只,感染一次就能使囊尾蚴发育到性成熟;在实验仓鼠体内,感染后40 d的仓鼠体内就能检出具有体节的可见虫体,感染80 d后的仓鼠体内能检出孕卵节片;检出的虫体多数吸附在小肠前1/3段,也有寄生在胆囊和胆管中的虫体,甚至偶见虫体钻出胆囊外堆积在肝脏附近;虫体头节上可见4个吸盘及两圈小钩;与人猪带绦虫相比,成熟节片较少。【结论】成功建立了猪带绦虫仓鼠动物模型,这使得成功解决猪带绦虫实验材料的来源问题成为可能,也为猪带绦虫的深入研究奠定了基础。     

中国水牛小型肉孢子虫的研究

以自然感染微型包囊的肉孢子虫的水牛食道6务,切碎,混匀,分别感染仔猫5只,幼犬6只。结果所有犬均获得感染,排出卵囊或孢子囊。潜隐期为9～17天。所有猫在试验期内没有排出卵囊或孢子囊。以试验犬获得的孢子囊2.8×10~5,6.2×10~4及1.5×10~5个分别感染水牛犊2头及乳牛犊1头。2头水牛犊感染后均表现严重生长不良,1头于第60天扑杀,淋巴结触片发现裂殖体样虫体。另一头于102天扑杀,食道肌肉内有微型包囊。但1头乳牛犊和对照牛(1头水牛犊,1头乳牛犊)生长良好,组织学检查未发现虫体。作者根据其为微型包囊,感染犬获得成功、回归黄牛没有成功,初步认为是李氏肉孢子虫 Sarcocystis levinei。     

尖吻细鳞鲑胚胎及仔、稚、幼鱼发育的研究

通过活体观察和Bouin＇s液固定对乌苏里江尖吻细鳞鲑Brachymystax lenok的胚胎及仔、稚、幼鱼的发育进行观察,确定尖吻细鳞鲑的发育过程,详细描述了胚胎各发育时期的时序、形态特征以及仔、稚、幼鱼的发育特点,并将尖吻细鳞鲑与其它几种鱼类进行比较,探讨破膜所需时间与卵子性质和孵化水温的关系。结果表明：尖吻细鳞鲑成熟卵呈淡黄色,圆球形,卵径为（4.32±0.21）mm,含有大量卵黄,卵的比重大于水,属端黄卵,卵膜厚,无黏性,有弹性;受精卵在水温6.0~10.7℃条件下,历时597 h孵出,有效积温为190.79℃.d;尖吻细鳞鲑胚胎发育过程包括受精卵、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官形成等6个阶段、26个发育时期。初孵仔鱼全长为（10.67±0.02）mm,破膜第13天仔鱼出现鳔并开始上浮,第14天仔鱼卵黄囊吸收完全,仔鱼期结束,进入稚鱼期;破膜后第25天稚鱼体侧出现幼鲑斑,第35天各鳍发育完全,进入幼鱼期,此时鱼体外观与成鱼无异。     

卜氏晶囊轮虫休眠卵全卵膜的超微结构观察

在扫描电镜下研究了卜氏晶囊轮虫Splanchnabrightwelli休眠卵卵膜的亚显微结构,并对卵膜与休眠卵功能的关系进行了探讨。结果表明：卜氏晶囊轮虫休眠卵卵膜分三层,其中第一层卵膜（S1）包括两小层,即外表有乳状突起的第一小层（ML）和弹簧状的第二小层（SL）,ML层外表乳状突起之间有的有小桥相连,有的无小桥相连,而SL层纵面观似弹簧状,外表面（与ML层卵膜接触的面）有较大的突起和较多的孔,内表面（与第二层接触的面）较光滑且突起较小;第二层卵膜（S2）纵面观均匀致密;第三层卵膜（S3）紧包胚胎,外表面光滑。从本试验结果推测,晶囊轮虫休眠卵第一层的第二小层卵膜的弹簧状结构装置,很可能是晶囊轮虫休眠卵休眠期间存放休眠卵产出气体的地方。     

卡拉白鱼性腺发育组织学观察

采用石蜡组织切片法,对卡拉白鱼的性腺发育进行组织学研究,系统地描述了各期精巢和卵巢的形态机构,特征及其变化.结果表明:卡拉白鱼精巢和卵巢发育均分为六个时期.3月龄性腺开始出现分化.雄鱼15月龄体重16.22±1.02g,成熟系数12.95,精巢发育至Ⅳ期,精子出现;23月龄精巢发育Ⅴ期,已充满精子性成熟.卵巢Ⅰ期6月龄,体重2.93±0.58 g,个体卵巢均处于此期;Ⅱ期9-12月龄,体重3.73±0.77g至7.29±1.13g个体卵巢处于此期,成熟系数0.80 1.09;Ⅲ期1 3 1 5月龄,体重9.21±1.42g至1 7.54±1.59g个体卵巢处于此期,成熟系数8.67 10.15;Ⅳ期16-23月龄,体重20.31±2.57 g至30.78±4.32g个体均处于此期,成熟系数13.59-9.90;Ⅴ期24月龄,体重53.42±1.48g个体卵巢处于此期,成熟系数11.61.卵巢发育Ⅲ期出现辐射带,最初卵黄物质是以碳水化合物卵黄-液泡形式出现的,卵膜由卵母细胞膜、辐射带和包卵膜组成,膜结构与其微黏性卵相适应.卵巢发育属于同步分批类型,为一次分批产卵鱼类.     

鲶卵膜形成的显微和超微结构比较的研究

光学显微镜观察鲶卵膜形成的显微结构,第1时相卵母细胞外具1层质膜。第2时相卵母细胞外可见到滤泡膜,第3时相卵母细胞时,可见到放射膜。第4时相初滤泡层和放射膜较前期更加增厚。第5时相卵母细胞外的滤泡膜已脱去。第6时相放射膜逐渐消解。透射电镜观察鲶卵膜形成的超微结构,在第2时相时,不仅具滤泡层,而且有鞘细胞层、基板和刚发生的放射膜,第3时相基板加厚。第4时相基板逐渐消失。第5时相滤泡细胞解体,放射膜的外层已经消失。对鲶卵母细胞膜发生的显微和超微结构作了比较,对卵膜的划分及分期、滤泡层的来源和构成、放射膜生成的机制等作了描述和探讨。     

瘤背石磺的胚胎和幼虫发育

在水温27～29℃、气温27～31℃和海水盐度为16的环境条件下人工孵化瘤背石磺的卵块,根据早期发育的形态变化将其划分为胚胎发育(包括卵裂期、囊胚期、原肠期、卵内担轮幼虫、卵内面盘幼虫)和幼虫发育(包括开口期、大面盘幼虫、附着期、匍匐幼虫)两个阶段。受精卵发育至卵内担轮幼虫需要51h,胚胎发育89h后变态为卵内面盘幼虫,第7天面盘幼虫孵化出卵,直径增大1倍;第23天幼虫变态为匍匐幼虫,虫体直径为受精卵的4倍。分析认为,瘤背石磺的胚胎发育具备典型的不等全裂、螺旋卵裂特征,幼虫为典型的腹足纲面盘幼虫形态;温度对胚胎发育时间影响显著而充气可以加速幼虫孵化出卵;面盘幼虫需要有适宜的潮间带环境和饵料(如底栖硅藻)才可以正常附着变态。     

瘤背石磺的胚胎和幼虫发育

在水温27～29℃、气温27～31℃和海水盐度为16的环境条件下人工孵化瘤背石磺的卵块,根据早期发育的形态变化将其划分为胚胎发育(包括卵裂期、囊胚期、原肠期、卵内担轮幼虫、卵内面盘幼虫)和幼虫发育(包括开口期、大面盘幼虫、附着期、匍匐幼虫)两个阶段。受精卵发育至卵内担轮幼虫需要51h,胚胎发育89h后变态为卵内面盘幼虫,第7天面盘幼虫孵化出卵,直径增大1倍;第23天幼虫变态为匍匐幼虫,虫体直径为受精卵的4倍。分析认为,瘤背石磺的胚胎发育具备典型的不等全裂、螺旋卵裂特征,幼虫为典型的腹足纲面盘幼虫形态;温度对胚胎发育时间影响显著而充气可以加速幼虫孵化出卵;面盘幼虫需要有适宜的潮间带环境和饵料(如底栖硅藻)才可以正常附着变态。     

鹅球虫Eimeria nocens的生活史及致病性研究

 16只10日龄小鹅分别接种1.0×105~1.0×106个Eimeria nocens孢子化卵囊，在接种后30~336 h期间内分期剖杀，对E. nocens的生活史和致病性进行了动态性观察。在内生性发育过程中，E. nocens至少有3个世代的裂殖生殖阶段。有两种类型的裂殖体存在，一种在接种后54~78 h发育成熟，为第1代裂殖体，每个含10个左右的裂殖子；另一种在接种后102~240 h发育成熟，为第2代或第3代裂殖体，每个含25个左右的裂殖子。接种后198 h左右虫体开始进入配子生殖阶段。从接种后第10天开始有卵囊排出，显露期为4 d。25℃下卵囊孢子化时间为60~72 h。E. nocens寄生于空肠后部、回肠、盲肠、直肠和泄殖腔的绒毛和肠腺上皮细胞及固有膜中。在裂殖生殖后期、配子生殖和卵囊排出期间组织病变比较明显，主要包括肠粘膜上皮坏死和脱落、肠壁水肿、出血和炎性细胞浸润以及肠绒毛萎缩等，尤以回肠及其邻近部位最为严重。感染鹅腹泻、食欲下降、消瘦乃至死亡。     

关于如何解决家鱼胚胎整齐出膜与卵膜迅速溶解的试验

在家鱼人工繁殖孵化过程中,常常遇到:在同一批受精卵放入一个孵化容器内孵化时,从开始破膜到全部胚胎脱膜和卵膜碎片全部溶解,一般要六至八小时以上,在这孵化过程中,需要不停地洗刷过滤纱窗,否则,就会出现贴卵、贴苗及卵、苗溢逃的现象。是否可以更集中地迅速脱膜和卵膜尽快地溶解、减少或避免洗刷纱窗的紧张劳动和防止贴卵、贴苗及卵苗溢逃的现象呢?     

悬铃木方翅网蝽发育历期和成虫寿命观察

测定了悬铃木方翅网蝽Corythucha ciliata(Say)卵和若虫的发育历期以及成虫寿命.结果显示,悬铃木方翅网蝽的卵孵化都集中在产卵后的第7～11天,平均发育历期9.34d,平均孵化率89.14%:若虫羽化集中在孵化后的第8～14天,平均发育历期10.23 d,平均羽化率66.90%;成虫寿命在30～65 d之间.     

小鹅贝氏隐孢子虫人工感染试验

 笔者用鸭源和鹅源隐孢子虫对13只2日龄小鹅进行了人工感染试验。用鸭源隐孢子虫感染10只小鹅，每只感染1.2×10#+7个孢子化卵囊，潜隐期为3天；用鹅源隐孢子虫感染3只小鹅，每只感染8×10#+6个孢子化卵囊，潜隐期为4天。两组的排卵囊的高峰期均在接种后第7-17天，排卵囊时间长达21天。人工感染后小鹅的严重发病出现在第8-17天。主要临床症状为呼吸困难、气喘、咳嗽、张口呼吸、打喷涕、精神不振、饮、食欲锐减。人工感染后第7、10和17天各死亡一只，死亡率为23%。病理剖检可见喉头、气管水肿，渗出物增多，肺充血、发炎，气囊混浊呈云雾状外观。病理组织学观察可见喉头、气管、法氏囊、泄殖腔粘膜上皮细胞肿胀，微绒毛脱落；粘膜涂片染色和电镜观察可在上述部位的上皮细胞表层发现大量虫体。根据动物感染试验及卵囊的形态特征，确认小鹅隐孢子虫为贝氏隐孢子虫Cryptospridium baileyi。这是世界上首次报道的小鹅隐孢子虫病的病例。     

绵羊巴贝斯虫单一种的分离及其繁殖特性观察

甘肃陇东地区自然发病羊,混合感染有小型和大型两种巴贝斯虫,一种小型虫体被鉴定为绵羊巴贝斯虫(Babesia ovis),另一种大型巴贝斯虫(B.sp.)尚难确定其分类地位.本文报告绵羊巴贝斯虫单一种的分离及其繁殖特性观察.用自然感染小尾寒羊混合种(以大型虫体为主)含虫血,由颈部皮下接种702号除脾山羊,在接种后第11天的血液涂片中查到了典型的大型双梨籽形虫体,第14天的血片中也见到了绵羊巴贝斯虫.这两种虫